Portable diagnostic platform for detection of microorganisms Coliforms and E. coli.

Portable diagnostic devices are a viable and low-cost alternative for the detection of pathogens, since they reduce the time of analysis of results availability. Ease of sample collection and quick diagnosis allow this new input to be applied in the diagnosis of the main contaminating microorganisms present in the water. Laboratory tests evaluated the technical viability of the diagnostic device, using commercial strains which were inoculated and optimized in the devices and their growth compared to the conventional method in Petri dishes. Samples of 100 μL bacterial suspension were tested and compared with the traditional sample inoculation method. The device viability was determined by detecting characteristic bacterial colonies in a specific culture medium through the colorimetric development of the obtained colonies. The feasibility assessments allow us to affirm that the device enables both qualitative and quantitative detection of the target bacteria present in liquid samples, and is promising to be applied to assess the quality of water, food and environmental surfaces

Caracterização da atividade proteolítica dos produtos de excreção/secreção dos estágios larvares de cochliomyia hominivorax.

Larvas da mosca Cochliomyia hominivorax causam graves miíases em bovinos criados nas Américas Central e do Sul.As fêmeas colocam seus ovos nos bordos de ferimentos recentes, na pele dos animais, e as larvas se estabelecem graças à secreção/excreção de enzimas proteolíticas. Larvas de C. hominivoraxforam criadas no laboratório de sanidade animal da Embrapa Pecuária Sudeste. Após serem lavadassucessivamente em solução salina, solução salina adicionada de VancomicinaR e água destilada estéril, grupos de 50 larvas foram colocados em placas de Petri contendo 5mL de meio RPMI. Após incubação por 12 horas (L 1 e L2) ou 24 horas (L3) a 370 C, as larvas foram descartadas e o meio centrifugado. Osobrenadante obtido foi distribuído em alíquotas de 100 L e armazenado a -80°C. A atividade proteolítica foi investigada aplicando-se as amostras desses produtos nativos em gel de poliacrilamida napresença de dodecil sulfato de sódio em sistema de gradiente 5-12,5%, copolimerizado com gelatina ou com colágeno a 0,2%. A natureza da proteólise foi avaliada nos mesmos géis, nos quais as amostras foram aplicadas após incubação prévia com cada um dos seguintes inibidores de proteases: PMSF, TLCK, TPCK, E-64, DCI, Elastatinal e EDTA. A análise da atividade proteolítica dos extratos sobre colágeno e gelatina revelou a presença de perfis caracterizados por amplas áreas de hidrólise, na faixa que se estende desde a região de massa molecular aparente> 170 kDa até 29 kDa; por uma zona de hidrólise intensa na região de 170 a 102 kDa e várias bandas com massas aparentes entre 45 e 74 kDa. A inibição da atividade proteolítica dos extratos de L 1 foi obtida principalmente pela incubação com PMSF e DCI; de L2, com DCI eL3, com PMSF. Esse tipo de inibição sugere a predominância de enzimas do grupo das serina proteases. roteases.Agradeciment

Identificação de alvos moleculares para o diagnóstico quantitativo da resistência a pesticidas organofosforados em populações do carrapato-dos-bovinos.

Os programas de controle direcionados aos parasitas ainda exigem a utilização de produtos químicos para maior estabilidade operacional das ações de controle e o uso de carrapaticidas químicos é a principal ferramenta de controle para as infestações do carrapato-dos-bovinos. A utilização de técnicas fenotípicas de avaliação in vitro da suscetibilidade de carrapatos às bases pesticidas são ainda o método mais prático e mais utilizados para o diagnóstico e mensuração do fator de resistência às bases carrapaticidas. Na atualidade, o desenvolvimento e o aprimoramento de provas diagnósticas moleculares de resistência aos diferentes grupos pesticidas devem ser consideradas como ações prioritárias de pesquisa e desenvolvimento dada a necessidade de disponibilização ao setor produtivo de ferramentas acuradas e de rápida execução que a médio prazo venham a substituir os bioensaios, os quais necessitam de aproximadamente 45 dias para obtenção dos resultados. A partir de uma população de Rhipicephalus microplus reconhecidamente resistente a pesticidas foram realizados os estudos que demonstram a atividade enzimática das estares no processo de detoxicação de organofosforados. Observou-se que na cepa de R. microplus resistente a organofosforados ocorreu o aumento na transcrição dos genes que codificam enzimas metabolizantes, possibilitando identificar os alvos moleculares aptos para serem utilizadas no desenvolvimento do ensaio diagnóstico molecular quantitativo para a resistência aos pesticidas organofosforados em populações do carrapato-dos-bovinos.bitstream/item/139148/1/bpd-74-carrapatodosbovinos.pd

Diagnóstico de resistência às bases carrapaticidas em populações do carrapato dos bovinos.

Os programas de controle direcionados aos parasitas ainda exigem a utiliza- ção de produtos químicos para maior estabilidade operacional das ações de controle e o uso de carrapaticidas químicos é a principal ferramenta de controle para as infestações do carrapato dos bovinos. A correta escolha de princípios ativos capazes de controlar as infestações nos rebanhos é uma necessidade premente, devido ao rápido surgimento e estabelecimento de populações de carrapatos resistentes. A utilização de técnicas fenotípicas de avaliação in vitro da suscetibilidade de carrapatos às bases pesticidas são ainda o método mais prático e de maior aceitação para se diagnosticar e mensurar o grau da resistência às bases carrapaticidas nas populações, porém provas diagnósticas moleculares estão sendo desenvolvidas e utilizadas para a identificação de populações do carrapato dos bovinos resistentes às principais moléculas utilizadas em seu controle. A rápida e acurada identificação da resistência à pesticidas nas populações do carrapato dos bovinos deve ser considerada como uma demanda prioritária para reduzir a dependência química relacionada ao controle das infestações, mitigar a contaminação ambiental determinada pelos pesticidas e eliminar a presença de resíduos parasiticidas nos alimentos. Lembrando que, a identificação de produtos de degradação de fármacos parasiticidas em produtos de origem animal se apresenta como uma barreira não tarifária que será cada vez mais explorada pelo competitivo mercado internacional de produtos cárneos e lácteos

Diagnóstico de resistência às bases carrapaticidas em populações do carrapato dos bovinos.

Os programas de controle direcionados aos parasitas ainda exigem a utiliza- ção de produtos químicos para maior estabilidade operacional das ações de controle e o uso de carrapaticidas químicos é a principal ferramenta de controle para as infestações do carrapato dos bovinos. A correta escolha de princípios ativos capazes de controlar as infestações nos rebanhos é uma necessidade premente, devido ao rápido surgimento e estabelecimento de populações de carrapatos resistentes. A utilização de técnicas fenotípicas de avaliação in vitro da suscetibilidade de carrapatos às bases pesticidas são ainda o método mais prático e de maior aceitação para se diagnosticar e mensurar o grau da resistência às bases carrapaticidas nas populações, porém provas diagnósticas moleculares estão sendo desenvolvidas e utilizadas para a identificação de populações do carrapato dos bovinos resistentes às principais moléculas utilizadas em seu controle. A rápida e acurada identificação da resistência à pesticidas nas populações do carrapato dos bovinos deve ser considerada como uma demanda prioritária para reduzir a dependência química relacionada ao controle das infestações, mitigar a contaminação ambiental determinada pelos pesticidas e eliminar a presença de resíduos parasiticidas nos alimentos. Lembrando que, a identificação de produtos de degradação de fármacos parasiticidas em produtos de origem animal se apresenta como uma barreira não tarifária que será cada vez mais explorada pelo competitivo mercado internacional de produtos cárneos e lácteos

Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA celular a partir de adultos de Haematobia irritans ( Linnaeus, 1758) ( Diptera: Muscidae)

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