13 research outputs found

    Phosphate-activated cyclin-dependent kinase stabilizes G1 cyclin to trigger cell cycle entry

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    G1 cyclins, in association with a cyclin-dependent kinase (CDK), are universal activators of the transcriptional G1-S machinery during entry into the cell cycle. Regulation of cyclin degradation is crucial for coordinating progression through the cell cycle, but the mechanisms that modulate cyclin stability to control cell cycle entry are still unknown. Here, we show that a lack of phosphate downregulates Cln3 cyclin and leads to G1 arrest in Saccharomyces cerevisiae. The stability of Cln3 protein is diminished in strains with low activity of Pho85, a phosphate-sensing CDK. Cln3 is an in vitro substrate of Pho85, and both proteins interact in vivo. More interestingly, cells that carry a CLN3 allele encoding aspartic acid substitutions at the sites of Pho85 phosphorylation maintain high levels of Cln3 independently of Pho85 activity. Moreover, these cells do not properly arrest in G1 in the absence of phosphate and they die prematurely. Finally, the activity of Pho85 is essential for accumulating Cln3 and for reentering the cell cycle after phosphate refeeding. Taken together, our data indicate that Cln3 is a molecular target of the Pho85 kinase that is required to modulate cell cycle entry in response to environmental changes in nutrient availability. © 2013, American Society for Microbiology.S. Hernández received a postgraduate Junior Faculty fellowship from the UIC and l'Obra Social la Caixa. This work was supported by grants from Ministerio de Ciencia e Innovación of the Spanish government (BFU 2009-09278)Peer Reviewe

    Antimicrobial activity of polyphenols extracted from fruits of various species of the genus Vaccinium

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    Introducci√≥n: El g√©nero Vaccinium pertenece a la familia Ericaceae y tiene polifenoles,minerales y un buen porcentaje de fibras (pectina celulosa). Estos compuestos han mostradotener propiedades antioxidantes, antitumorales, antiinflamatorias y antimicrobianas.Objetivo: Describir la actividad antimicrobiana de los compuestos polifen√≥licos dediferentes especies del g√©nero Vaccinium.M√©todos: Se realiz√≥ una revisi√≥n bibliogr√°fica en las bases BVS, Journals, Google Scholar,Ovid, NCBI y MEDLINE. Para la b√ļsqueda se emplearon las palabras clave: Vaccinium,anti-bacterial angents, polyphenols y medidinal plants, y se emplearon operadores boleanos.Resultados: Se pudo identificar mediante la revisi√≥n que las diferentes especies del g√©neroVaccinium presentan varios compuestos polifen√≥licos con actividad antimicrobiana, enparticular la generada por las proantocianidinas. Estas reportaron mayor actividad inhibitoriafrentes a diversos microrganismos pat√≥genos.Conclusiones: Se comprob√≥ que el g√©nero Vaccinium posee una alta variedad decomponentes polifen√≥licos que brindan caracter√≠sticas de uso terap√©utico para el manejo deciertas enfermedades e infecciones en el ser humano, las cuales podr√≠an ser usadas comoalternativa terap√©utica.Fil: Ricco Garc√≠a, Natalia Andrea. Universidad de Boyac√°; ColombiaFil: Espinosa Manrique, Wilfred Edilberto. Universidad Nacional de La Plata; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Centro Cient√≠fico Tecnol√≥gico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoqu√≠micas Te√≥ricas y Aplicadas. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Investigaciones Fisicoqu√≠micas Te√≥ricas y Aplicadas; ArgentinaFil: L√≥pez Velandia, Diana Paola. Universidad de Boyac√°; Colombi

    Neurobehavioral evaluation and phytochemical characterization of a series of argentine valerian species

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    Folkloric or galenic preparations of valerian roots and rhizomes have been used as sedatives/anxiolytics and sleep inducers since ancient times. ‚ÄúValerianas‚ÄĚ are plants that naturally grow in our region. Although some of them are used in folk medicine, they lack scientific information. We performed a comparative study of the phytochemical composition and the potential in vivo effects of ethanolic extracts of argentine valerian species: Valeriana carnosa Sm., V. clarionifolia Phil. and V. macrorhiza Poepp. ex DC., from ‚ÄúPatagonia Argentina‚ÄĚ; V. ferax (Griseb.) H√∂ck and V. effusa Griseb., from the central part of our country, and V. officinalis (as the reference plant). All these plants were rich in phenolic compounds, evidenced the presence of ligands for the benzodiazepine binding site of the GABAA receptor and were able to induce sedation as assessed by loss-of-righting reflex assays (500 mg/kg, i.p.). Mice treated with V. macrorhiza, V. carnosa and V. ferax extracts showed reduced exploratory behaviors while V. clarionifolia produced anxiolytic-like activities (500 mg/kg, i.p.) in the Hole board test. Oral administrations (300 mg/kg and 600 mg/kg, p.o.) evidenced sedative effects for V. ferax and anxiolytic-like properties for V. macrorhiza, V. carnosa and V. clarionifolia extracts. Our native valerian species are active on the CNS, validating its folkloric use as anxiolytic/sedative and sleep enhancers.Instituto de Recursos Biol√≥gicosFil: Marcucci, Carolina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; ArgentinaFil: Anselmi Relats, Juan Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; ArgentinaFil: Bach, Hern√°n Ger√≥nimo. Instituto Nacional de Tecnolog√≠a Agropecuaria (INTA). Instituto de Recursos Biol√≥gicos; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. C√°tedra de Farmacobot√°nica; ArgentinaFil: Kamecki, Fabiola. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; ArgentinaFil: Varela, Beatriz G. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. C√°tedra de Farmacobot√°nica; ArgentinaFil: Wagner, Marcelo L. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. C√°tedra de Farmacobot√°nica; ArgentinaFil: Pastore, Valentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; ArgentinaFil: Pastore, Valentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunol√≥gicos y Fisiopatol√≥gicos. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Estudios Inmunol√≥gicos y Fisiopatol√≥gicos; ArgentinaFil: Colettis, Natalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; ArgentinaFil: Ricco, Rafael A. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. C√°tedra de Farmacobot√°nica; ArgentinaFil: Marder, Mariel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Instituto de Qu√≠mica y Fisicoqu√≠mica Biol√≥gicas Prof. Dr. Alejandro C. Paladini; Argentin

    Argentine valerians: Traditional use and potential to treat neurodegenerative diseases

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    Las ra√≠ces de valeriana son sedantes/ansiol√≠ticas e inductoras del sue√Īo. Desde hace m√°s de 20a√Īos estudiamos sus extractos y flavonoides neuroactivos. La enfermedad de Alzheimer (EA)es producida por acumulaci√≥n anormal de prote√≠nas (amiloide-ő≤, tau) y metales pesados, estr√©soxidativo y alteraci√≥n de neurotransmisores (acetilcolina). Aqu√≠ presentamos un estudio de 5valerianas argentinas: Valeriana carnosa Sm., V. clarionifolia Phil., V. macrorhiza DC, V. ferax(Griseb.) H√∂ck y V. effusa Griseb. (V. officinalis L., referencia). Validamos propiedadestranquilizantes de sus extractos en ensayos agudos en ratones Swiss machos [Marcucci y col.,Heliyon 6, e05691, 2020]. Evaluamos in vitro la presencia de: ligandos para el receptorGABAA: todas presentaron; inhibidores de acetil y butircolinesterasa (AChE/BChE)(Ellman): todas poseen (AChE murina IC50: 1.1-12.1 mg/ml y BChE murina IC50: 0.0018-1.46mg/ml) y de agregaci√≥n Aő≤1-42 (tioflavina T): V. effusa 93% y V. clarionifolia 82% (0.1 mg/ml).Propiedades antioxidantes (DPPH y ABTS): se observ√≥ relaci√≥n directa con contenido decompuestos fen√≥licos. Inhibidores de monoaminooxidasas (MAO) A y B (Amplex red): s√≥loV. carnosa inhibi√≥ hMAO A (IC50: 300 ¬Ķg/ml); fue estudiada en ratones (un mes, 100mg/kg/d√≠a, en agua de bebida), presentando mejora de memoria espacial (Y-maze), disminuci√≥nde actividad AChE en cerebros y efecto s√≠mil-antidepresivo (Tail suspension). Nuestrasvalerianas son prometedoras para tratar la EA.Fil: Marcucci, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaFil: Rademacher, Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaFil: Kamecki Gonz√°lez, Fabiola Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaFil: Pastore, Valentina. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaFil: Bach, H.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica; ArgentinaFil: Knez, D.. Universidad de Ljubljana; EsloveniaFil: Gobec, S.. Universidad de Ljubljana; EsloveniaFil: Wagner, M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica; ArgentinaFil: Ricco, R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica; ArgentinaFil: Colettis, Natalia Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaFil: Marder, M.. Consejo Nacional de Investigaciones Cient√≠ficas y T√©cnicas. Oficina de Coordinaci√≥n Administrativa Houssay. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioqu√≠mica. Instituto de Qu√≠mica y F√≠sico-Qu√≠mica Biol√≥gicas; ArgentinaVII Jornadas Nacionales de Plantas Arom√°ticas Nativas y sus Aceites Esenciales y III Jornadas Nacionales de Plantas Medicinales NativasArgentinaUniversidad Nacional de C√≥rdobaSociedad Argentina de Bot√°nic

    Caracterización molecular de nuevos substratos de la CDK Pho85

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    La ciclina Cln3 es un activador cr√≠tico de START, cuya sobreexpresi√≥n provoca c√©lulas de menor tama√Īo que progresan r√°pidamente por el ciclo celular, mientras que su deleci√≥n induce un mayor tama√Īo de las c√©lulas y retrasa el ciclo de √©stas (Cross 1988, Nash et al. 1988), actualmente se cuenta con numerosa informaci√≥n acerca del importante papel de Cln3 en la regulaci√≥n de START, unida a la CDK Cdc28. (Wang et al. 2009). Estudios previos realizados en este grupo han descrito una nueva relaci√≥n molecular que ha permitido darle un enfoque novedoso a la funci√≥n de Cln3: se ha observado que una deficiencia de fosfatos en el medio, modifica la estabilidad de Cln3 e induce una parada en la fase G1 del ciclo celular. Esta disminuci√≥n, tambi√©n se observ√≥ en aquellas cepas donde Pho85, uno de los principales reguladores del metabolismo del fosfato, ten√≠a inhibida su actividad quinasa (Menoyo et al. 2013). Pho85 es una CDK multifuncional, que presenta una elevada promiscuidad molecular, ya que es dirigida a un gran n√ļmero de substratos mediante la uni√≥n a 10 ciclinas diferentes. Cln3 podr√≠a ser uno de estos substratos ya que resultados previos indican una clara interacci√≥n g√©nica entre Cln3 y el complejo Pho85-Pho80 (Menoyo et al. 2013). Pero las evidencias moleculares que demuestran si esta interacci√≥n es directa, necesarias para considerar a Cln3 un substrato bona fide de Pho85, a√ļn deb√≠an ser caracterizadas. En este trabajo doctoral, se demuestra que Pho85 unido a Pho80 est√° fosforilando in vitro a Cln3 y mediante experimentos in vitro, se observa que esta fosforilaci√≥n incrementa la vida media de la prote√≠na. Adem√°s, tambi√©n se ha podido observar la fosforilaci√≥n in vivo as√≠ como el efecto que el mutante no fosforilable de Cln3 ejerce sobre el ciclo celular. Cln3 es un substrato compartido por las CDK‚Äôs Cdc28 y Pho85. El rol de las CDKs de S. cerevisiae est√° muy bien caracterizado, siendo Cdc28 asociada a sus ciclinas, esencial en la regulaci√≥n del ciclo celular. Por otra parte, Pho85 asociado a ciclinas de G1 act√ļa regulando el ciclo (Measday et al. 1994) y aunque no es esencial para la viabilidad celular, aquellas c√©lulas que no disponen de este gen tienen m√ļltiples problemas: desde morfolog√≠a anormal hasta retraso en el ciclo celular, pasando tambi√©n por una acumulaci√≥n de gluc√≥geno (Carroll, O'Shea 2002) y sensibilidad a diversos componentes qu√≠micos (Huang et al. 2002). Por esta raz√≥n, mientras que Cdc28 es conocida como la CDK esencial de S. cerevisiae, Pho85 lo es como la CDK multifuncional que controla diferentes v√≠as moleculares de este organismo. La definici√≥n no es err√≥nea, ya que Pho85-Pcl1 comparte un gran n√ļmero de substratos con Cdc28: Sic1 es fosforilado por ambas quinasas para ser destruido (Nishizawa et al. 1998), ocurre lo mismo con Clb6 (Jackson et al. 2006), mientras que en el caso de Bni4 (Zou et al. 2009, Holt et al. 2009) la fosforilaci√≥n garantiza su correcta localizaci√≥n. Parte de los experimentos de esta tesis, se han centrado en encontrar nuevos substratos que √ļnicamente est√©n siendo afectados por los complejos de Pho85-Pcl1, para as√≠ poder averiguar las funciones espec√≠ficas de esta quinasa en la fase G1 del ciclo celular. Mediante experimentos de prote√≥mica se buscaron interacciones con este complejo y finalmente se caracteriz√≥ la relaci√≥n molecular de uno de ellos: la E3 ligasa Dma1. Debido a la gran cantidad y a las diferentes clases de E3 que existen en todos los organismos, las ubiquitin ligasas son de los factores implicados en la cascada de ubiquitinaci√≥n, que m√°s se desconoce. En c√©lulas humanas, las ubiquitin ligasas est√°n implicadas en un gran n√ļmero de patolog√≠as, lo cual las vuelve id√≥neas para ser utilizadas como dianas terap√©uticas. A medida que avanzan las investigaciones, se descubre que la complejidad del sistema de ubiquitinaci√≥n es cada vez mayor y el n√ļmero de preguntas relacionadas con este tipo de enzimas, aumentan d√≠a a d√≠a. En las investigaciones presentadas, se observa que Pho85 unido a Pcl1 fosforila a Dma1 en unos residuos concretos, ubicados en el extremo N-terminal de la prote√≠na. Esta fosforilaci√≥n modifica la actividad ubiquitinadora de Dma1, reduci√©ndola, lo cual podr√≠a tener relevancia en el control de la cantidad de Dma1 en determinadas circunstancias

    Comprehensive and quantitative analysis of G1 cyclins. A tool for studying the cell cycle.

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    In eukaryotes, the cell cycle is driven by the actions of several cyclin dependent kinases (CDKs) and an array of regulatory proteins called cyclins, due to the cyclical expression patterns of the latter. In yeast, the accepted pattern of cyclin waves is based on qualitative studies performed by different laboratories using different strain backgrounds, different growing conditions and media, and different kinds of genetic manipulation. Additionally, only the subset of cyclins regulating Cdc28 was included, while the Pho85 cyclins were excluded. We describe a comprehensive, quantitative and accurate blueprint of G1 cyclins in the yeast Saccharomyces cerevisiae that, in addition to validating previous conclusions, yields new findings and establishes an accurate G1 cyclin blueprint. For the purposes of this research, we produced a collection of strains with all G1 cyclins identically tagged using the same and most respectful procedure possible. We report the contribution of each G1 cyclin for a broad array of growing and stress conditions, describe an unknown role for Pcl2 in heat-stress conditions and demonstrate the importance of maintaining the 3'UTR sequence of cyclins untouched during the tagging process

    The quantitative changes in the yeast Hsp70 and Hsp90 interactomes upon DNA damage

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    The molecular chaperones Hsp70 and Hsp90 participate in many important cellular processes, including how cells respond to DNA damage. Here we show the results of applied quantitative affinity-purification mass spectrometry (AP-MS) proteomics to understand the protein network through which Hsp70 and Hsp90 exert their effects on the DNA damage response (DDR). We characterized the interactomes of the yeast Hsp70 isoform Ssa1 and Hsp90 isoform Hsp82 before and after exposure to methyl methanesulfonate. We identified 256 chaperone interactors, 146 of which are novel. Although the majority of chaperone interaction remained constant under DNA damage, 5 proteins (Coq5, Ast1, Cys3, Ydr210c and Rnr4) increased in interaction with Ssa1 and/or Hsp82. This data presented here are related to [1] (Truman et al., in press). The mass spectrometry proteomics data have been deposited to the ProteomeXchange Consortium (http://proteomecentral.proteomexchange.org) via the PRIDE partner repository (Vizcaino et al. (2013) [2]) with the dataset identifier PXD001284

    Biological Evaluation of <i>Valeriana</i> Extracts from Argentina with Potent Cholinesterase Inhibition for the Treatment of Neurodegenerative Disorders and Their Comorbidities‚ÄĒThe Case of <i>Valeriana carnosa</i> Sm. (Caprifoliaceae) Studied in Mice

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    Alzheimer‚Äôs disease (AD) is a neurodegenerative disorder whose pathophysiology includes the abnormal accumulation of proteins (e.g., ő≤-amyloid), oxidative stress, and alterations in neurotransmitter levels, mainly acetylcholine. Here we present a comparative study of the effect of extracts obtained from endemic Argentinian species of valerians, namely V. carnosa Sm., V. clarionifolia Phil. and V. macrorhiza Poepp. ex DC from Patagonia and V. ferax (Griseb.) H√∂ck and V. effusa Griseb., on different AD-related biological targets. Of these anxiolytic, sedative and sleep-inducing valerians, V. carnosa proved the most promising and was assayed in vivo. All valerians inhibited acetylcholinesterase (IC50 between 1.08‚Äď12.69 mg/mL) and butyrylcholinesterase (IC50 between 0.0019‚Äď1.46 mg/mL). They also inhibited the aggregation of ő≤-amyloid peptide, were able to chelate Fe2+ ions, and exhibited a direct relationship between antioxidant capacity and phenolic content. Moreover, V. carnosa was able to inhibit human monoamine oxidase A (IC50: 0.286 mg/mL (0.213‚Äď0.384)). A daily intake of aqueous V. carnosa extract by male Swiss mice (50 and 150 mg/kg/day) resulted in anxiolytic and antidepressant-like behavior and improved spatial memory. In addition, decreased AChE activity and oxidative stress markers were observed in treated mouse brains. Our studies contribute to the development of indigenous herbal medicines as therapeutic agents for AD
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