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    Efecto de enjuagues de √°cido hipocloroso sobre el pH de la saliva: estudio in vitro

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    ¬†Background: Hypochlorous acid (HOCl) has been proposed as antiplaque agent. The potential use of anti-plaque mouthwashes must be previously evaluated to determine whether it affects damping properties of saliva favoring tooth demineralization processes. Aim: To evaluate in vitro the effect of mouthwashes with HOCl at different concentrations on saliva pH. Methods: 20 whole saliva samples were collected. 1.1 ml of saliva were titrated with 0.1 or 0.4 mL of HOCl at different concentrations (125, 250 y 500 ppm) until a volume ratio 1:1 and 4:1. 0.5% NaCl was used as a titration control. HOCl volume required to induce a critical pH in saliva was assessed at ‚ȧ 5.5. A descriptive analysis for all variables and ANOVA with post hoc Bonferroni with multiple comparisons was conducted. Results: None of the HOCl concentrations evaluated affects the ability of the saliva to neutralize acids in solution at a 1:1 ratio. However, it is reached at pH < 5.5 when the proportion of HOCl at 500 ppm was increased in relation to the volume of saliva (3:1; p = 0.016). Concentrations of 250 and 125 ppm do not affect saliva pH even at proportions in volume of 6:1 and 9:1. Conclusion: HOCl at 125 ppm and 250 ppm does not affect the ability of saliva to neutralize acids in solution and these concentrations are suitable for use as active agent of an antiplaque mouthwash.Antecedentes: Se ha propuesto el √°cido hipocloroso (HOCl) como un agente antiplaca. El potencial uso de enjuagues con HOCl debe valorarse para establecer si afecta el pH y las propiedades amortiguadoras de la saliva que favorezcan procesos de desmineralizaci√≥n dental. Objetivo: Evaluar el efecto in vitro de enjuagues con HOCl a diferentes concentraciones sobre el pH de la saliva. M√©todos: Se recolectaron 20 muestras de saliva total. 1,1 mL de saliva fueron titulados con 0,1 y 0,4 mL de HOCl a diferentes concentraciones (125, 250 y 500 ppm) hasta una proporci√≥n en volumen 1:1 o 4:1. El NaCl 0,5 % se utiliz√≥ como control de titulaci√≥n. Se evalu√≥ el volumen requerido de HOCl para inducir un pH cr√≠tico de la saliva ‚ȧ 5,5. Se efectu√≥ un an√°lisis descriptivo para todas las variables y un Anova con post hoc de comparaciones m√ļltiples de Bonferroni. Resultados: Ninguna de las concentraciones evaluadas de HOCl afect√≥ la capacidad de la saliva en amortiguar los √°cidos en soluci√≥n a una proporci√≥n 1:1. Sin embargo, se alcanz√≥ un pH < 5,5 cuando se aument√≥ la proporci√≥n de HOCl 500 ppm en relaci√≥n con el volumen de saliva (3:1; p = 0,016). Las concentraciones 250 y 125 ppm no afectan considerablemente el pH de la saliva incluso a proporciones en volumen 6:1 y 9:1, respectivamente. Conclusi√≥n: El HOCl a 125 ppm y a 250 ppm no afecta la capacidad de la saliva para neutralizar los √°cidos en soluci√≥n, por lo que estas concentraciones son √≥ptimas para su potencial uso como principio activo de enjuague bucal antiplaca

    Efecto de enjuagues de √°cido hipocloroso sobre el pH de la saliva: estudio in vitro / Effect of Hypochlorous Acid as a Mouthwash on Salivary pH: in vitro Study

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    Antecedentes: Se ha propuesto el √°cido hipocloroso (HOCl) como un agente antiplaca. El potencial uso de enjuagues con HOCl debe valorarse para establecer si afecta el pH y las propiedades amortiguadoras de la saliva que favorezcan procesos de desmineralizaci√≥n dental. Objetivo: Evaluar el efecto in vitro de enjuagues con HOCl a diferentes concentraciones sobre el pH de la saliva. M√©todos: Se recolectaron 20 muestras de saliva total. 1,1 mL de saliva fueron titulados con 0,1 y 0,4 mL de HOCl a diferentes concentraciones (125, 250 y 500 ppm) hasta una proporci√≥n en volumen 1:1 o 4:1. El NaCl 0,5 % se utiliz√≥ como control de titulaci√≥n. Se evalu√≥ el volumen requerido de HOCl para inducir un pH cr√≠tico de la saliva ‚ȧ 5,5. Se efectu√≥ un an√°lisis descriptivo para todas las variables y un Anova con post hoc de comparaciones m√ļltiples de Bonferroni. Resultados: Ninguna de las concentraciones evaluadas de HOCl afect√≥ la capacidad de la saliva en amortiguar los √°cidos en soluci√≥n a una proporci√≥n 1:1. Sin embargo, se alcanz√≥ un pH &lt; 5,5 cuando se aument√≥ la proporci√≥n de HOCl 500 ppm en relaci√≥n con el volumen de saliva (3:1; p = 0,016). Las concentraciones 250 y 125 ppm no afectan considerablemente el pH de la saliva incluso a proporciones en volumen 6:1 y 9:1, respectivamente. Conclusi√≥n: El HOCl a 125 ppm y a 250 ppm no afecta la capacidad de la saliva para neutralizar los √°cidos en soluci√≥n, por lo que estas concentraciones son √≥ptimas para su potencial uso como principio activo de enjuague bucal antiplaca.¬†Background: Hypochlorous acid (HOCl) has been proposed as antiplaque agent. The potential use of anti-plaque mouthwashes must be previously evaluated to determine whether it affects damping properties of saliva favoring tooth demineralization processes. Aim: To evaluate in vitro the effect of mouthwashes with HOCl at different concentrations on saliva pH. Methods: 20 whole saliva samples were collected. 1.1 ml of saliva were titrated with 0.1 or 0.4 mL of HOCl at different concentrations (125, 250 y 500 ppm) until a volume ratio 1:1 and 4:1. 0.5% NaCl was used as a titration control. HOCl volume required to induce a critical pH in saliva was assessed at ‚ȧ 5.5. A descriptive analysis for all variables and ANOVA with post hoc Bonferroni with multiple comparisons was conducted. Results: None of the HOCl concentrations evaluated affects the ability of the saliva to neutralize acids in solution at a 1:1 ratio. However, it is reached at pH &lt; 5.5 when the proportion of HOCl at 500 ppm was increased in relation to the volume of saliva (3:1; p = 0.016). Concentrations of 250 and 125 ppm do not affect saliva pH even at proportions in volume of 6:1 and 9:1. Conclusion: HOCl at 125 ppm and 250 ppm does not affect the ability of saliva to neutralize acids in solution and these concentrations are suitable for use as active agent of an antiplaque mouthwash

    Lipopolysaccharides isolated from Eikenella corrodens but not from Porphyromonas gingivalis W83 induce proatherosclerotic inflammatory responses in human coronary artery endothelial cells

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    Eikenella corrodens and Porphyromonas gingivalis are oral microorganisms associated with the periodontal disease and have been identified in atherosclerotic lesions. The pro-atherosclerotic potential of a periodontopathic species depends on the ability of the strain to infect the endothelium. Lipopolysaccharide (LPS) from atherosclerosis-associated bacteria causes innate inflammatory responses in the pathogenic processes induced by microorganisms. The purpose of this study was to compare the pro-inflammatory responses of human coronary artery endothelial cells (HCAECs) to LPS isolated from E. corrodens 23834 and P. gingivalis W83.Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación [CO] Colciencias1308-519-28960Inducción de disfunción endotelial in vitro por lipopolisacarido de bacterias periodontopaticas e inhibición de la inflamación por resolvina (rvd1) y estatina (rosuvastatina)n

    Purificación y caracterización de lipopolisacáridos de eikenella corrodens 23834 y porphyromonas gingivalis w83

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    T√≠tulo corto: Metodolog√≠a para el aislamiento e identificaci√≥n¬† de LPS de periodonto-pat√≥genosT√≠tulo en ingl√©s: Purification and characterization of lipopolysaccharide from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83Resumen:¬†La purificaci√≥n de lipopolisac√°ridos (LPS) o endotoxinas y su caracterizaci√≥n es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomol√©culas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relaci√≥n con enfermedades locales periodontales y sist√©micas. Este estudio implementa una metodolog√≠a para la extracci√≥n, purificaci√≥n y caracterizaci√≥n de LPS a partir de bacteria completa de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83,¬† utilizando t√©cnicas previamente descritas. La extracci√≥n cruda de LPS se realiz√≥ con fenol-agua caliente; la purificaci√≥n se realiz√≥ con tratamiento enzim√°tico con nucleasas y proteasa, seguido de cromatograf√≠a de exclusi√≥n por tama√Īo (Sephacryl S-200 HR) con deoxicolato de sodio como fase m√≥vil. La caracterizaci√≥n de los extractos purificados se realiz√≥ por barrido espectrofotom√©trico, pruebas bioqu√≠micas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromog√©nica de LAL. Como control para la identificaci√≥n y caracterizaci√≥n de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodolog√≠a implementada permiti√≥ la obtenci√≥n de LPS de elevada pureza con la identificaci√≥n de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endot√≥xica a bajas concentraciones. La metodolog√≠a implementada en este estudio para la purificaci√≥n y caracterizaci√≥n de LPS a partir de bacteria completa¬† fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.Palabras clave: endotoxinas, cromatograf√≠a, √°cido 2-ceto-3-desoxioctulos√≥nico (KDO), test LAL, periodontitis.Abstract:¬†Purification of lipopolysaccharide (LPS) or endotoxins and its characterization is an important aspect for studies aimed at clarify the role of these biomolecules from Gram negative bacteria present in the oral cavity and its relationship with periodontal and systemic diseases. This study describes an extraction, purification and characterization method of LPS from Eikenella corrodens 23834 and Porphyromonas gingivalis W83. LPS extraction was performed by using hot phenol-water; the purification was done with nuclease and protease enzymatic treatment, followed by size-exclusion chromatography (Sephacryl S-200 HR) with sodium deoxycholate as mobile phase. The characterization of the purified extracts was performed by spectrophotometric scanning, SDS-PAGE biochemical tests, Purpald assay and chromogenic LAL test. As control, commercial LPS from Escherichia coli, Salmonella typhimurium, P. gingivalis, and Rodobacter sphaeroides were used. The methodology mentioned above had allowed obtaining high purity LPS by identifying KDO or heptoses, a chemotype S-LPS (smooth) to E. corrodens; SR-LPS (semi-rough) for P. gingivalis W83. Both purified LPS showed endotoxic capacity at low concentrations. The methodology used in this study for purification and characterization of LPS from the whole bacteria was efficient when it was compared with commercial LPS.Key words: endotoxin, 2-keto-3-deoxyoctonate (KDO), Chromatography, Limulus test (LAL), periodontitis
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