Use of RT-PCR and elisa techniques for the diagnostic of infectious bronchitis virus in broilers at slaughter

ABSTRACT. Almeida D.O., Tortely R., Nascimento E.R., Khan M., Pereira V.L.A & Babapoor S. [Use of RT-PCR and elisa techniques for the diagnostic of infectious bronchitis virus in broilers at slaughter.] Uso das técnicas de RT-PCR e elisa no diagnóstico da bronquite infecciosa em frangos de corte ao abate. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 37(1):55-59, 2015. Departamento de Saúde Coletiva Veterinária e Saúde Pública, Universidade Federal Fluminense, Rua Vital Brazil Filho, 64, Santa Rosa, Niterói, RJ 24230-340, Brasil. E-mail: [email protected] Avian infectious bronchitis (IB) is a viral, acute and highly contagious disease caused by infectious bronchitis virus (IBV). The disease affects broilers improvement and performance causing major economic losses in the world poultry industry. Generally, IBV infections can be diagnosed by detection of IBV itself or the specific antibody response. This study aimed to detect IBV in broilers under Sanitary Inspection by RT-PCR and ELISA, comparing the results and relating them with the average weight of the flock. Samples were collected from 40 vaccinated broiler flocks under Sanitary Inspection at slaughter. Ten birds from every flock were randomly selected and blood samples were collected for ELISA as well three birds had their trachea and caecal tonsils collected for RT- -PCR test. From 40 flocks, 30 were IBV positive by ELISA and 26 by RT-PCR, in which 15 were detected simultaneously in trachea and caecal tonsil and 5 in each sample. There was no agreement between ELISA and RT-PCR results regarding IBV diagnosis as well positivity in both tests was not statistically significant with the average weight of the flock. There was an improvement on IBV diagnosis when caecal tonsils and tracheas were used instead of just one of them. Considering the only vaccine serotype allowed by Brazilian government is the Mass serotype and its persistence in broilers would only be detected up to 28 days, possibly the studied broilers were challenge with a field strain

Manual de técnicas laboratoriais para monitoramento e diagnóstico das micoplasmoses aviárias

O tamanho e a importância da avicultura brasileira resultam do aprimoramento genético das aves, do elevado valor da nutrição e da adoção de medidas sanitárias, na maioria preventivas, as quais promovem também o bem-estar das aves por atenderem aos aspectos de ambiência saudável das instalações, equipamentos, insumos e ambientes interno e externo. Para se conhecer o estado de saúde das aves é preciso monitorá-las com testes capazes de evidenciar agentes causadores de doenças, dentre os quais os micoplasmas, prioritários pelos prejuízos que causam. Testes para monitoramento e diagnóstico da micoplasmose são preponderantes, principalmente na detecção precoce dessa doença em um estabelecimento avícola de produção. Este manual disponibiliza e descreve os principais métodos de diagnóstico da micoplasmose aviária a serem utilizados pelos laboratórios de diagnóstico, estudantes, técnicos e professores das instituições de ensino e profissionais da área. Nele são incluídos protocolos detalhados para cada método, relação dos insumos, equipamentos, EPI/EPC utilizados, interpretação dos resultados, cuidados que se deve ter na realização dos ensaios de forma a mitigar os riscos inerentes a erros diagnósticos, bem como de contaminação dos operadores e do meio ambient

Genomic characterisation of Campylobacter jejuni Cj26: A high-level ciprofloxacin/erythromycin-resistant strain isolated from a poultry carcass in southern Brazil

ABSTRACT: Objectives: The draft genome sequence of Campylobacter jejuni (Cj26) was analysed to investigate genetic mechanisms of antimicrobial resistance, virulence-associated genes, and phylogenetic context. Methods: Antimicrobial resistance was assessed by agar dilution and disk diffusion. Cj26 was sequenced using NovaSeq 6000 technology. The genome was assembled and annotated. Resistance genes and chromosomal mutations were analysed using the Center for Genomic Epidemiology services, and the multilocus sequence type, SVR-flaA, and porA were determined. The virulome was determined using the Virulence Factor Database. Plasmid detection and assembly were performed using Unicycler v0.5.0 software. To infer the core genome phylogeny, prokka v1.14.5 was employed in conjunction with IQtree v2.0.3. Results: The Cj26 strain showed a high level of resistance to ciprofloxacin (32 µg/mL) and erythromycin (>128 µg/mL) and resistance to tetracycline and ampicillin. Multilocus sequence typing revealed that the strain belonged to sequence type 353. The substitutions Tre-86-Ile in gyrA and A2075G in 23s RNA were detected, along with the genes tetO, aph(3′)-III, ant(6)-Ia, and blaOXA 460. A consistent relationship among accessory and core genes was identified. When compared to other sequence type 353 genomes from Brazil, Cj26 clustered with strains that had more antimicrobial resistance genes than the other clusters. Conclusion: This report provides insight into the antimicrobial resistance determinants found in a C. jejuni strain and offers a valuable resource for further studies on Campylobacter genomics and antimicrobial resistance

Diagnosis of porcine enzootic pneumonia by post mortem sanitary inspection: comparison with other diagnostic methods

ABSTRACT. Carrijo K.F., Nascimento E.R., Pereira V.L.A., Morés N., Klein, C.S., Domingues L.M. & Tortelly R. [Diagnosis of porcine enzootic pneumonia by post mortem sanitary inspection: comparison with other diagnostic methods.] Diagnóstico da pneumonia enzoótica suína pela inspeção sanitária post mortem: comparação com outros métodos de diagnóstico. Revista Brasileira de Veterinária Brasileira 36(2):188-194, 2014. Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Pará, 1720, Bloco 2T, Jardim Umuarama, Uberlândia, MG 38400-902, Brasil. E-mail: keniacarrijo@ famev.ufu.br To compare the concordance of the diagnosis of porcine enzootic pneumonia (PEP) by post-mortem Sanitary Inspection with other methods (histophatology and immunohistochemistry - IHC), were used lung tissue samples from 100 pigs slaughtered under sanitary inspection, and 50 of these had macroscopic lesions suggestive of PEP and 50 had no such lesions. These were fixed in 10% buffered formalin and processed by routine procedures for paraffin embedding and IHC technique for Mycoplasma hyopneumoniae using a monoespecific polyclonal antibody. The study demonstrating that there is concordance between the diagnosis of Sanitary Inspection with histophatology, between the diagnosis of Sanitary Inspection with IHC and histophatology with IHC. It can be conclude that when the lung has gross lesions of PEP, the probability the result is positive to M. hyopneumoniae by IHC and the presence of microscopic lesions increases. Thus, the microscopic diagnosis for PEP is feasible because it is associated to the other, so that the diagnosis given by the officials of Sanitary Inspection in slaughterhouses is not wrong; the macroscopic diagnosis is therefore a valid method for the diagnosis of PEP, it being understood this is not to say that the detection of M. hyopneumoniae

Detecção do Grupo Mycoplasma mycoides por imunoperoxidase indireta (IPI) e PCR-REA em conduto auditivo de bovinos

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em “ovo-frito”. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00%) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0% (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7% (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3% (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7% (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil

Pré-resfriamento na redução de coliformes em carcaças de frango de corte

O objetivo deste trabalho foi comparar a análise individual (plano de duas classes) e a análise por lotes (plano de três classes), priorizado pelo plano amostragem oficial da ANVISA, na influência do pré-resfriamento de carcaças de frangos de corte na redução da contaminação por coliformes termotolerantes. Foram analisadas 240 carcaças de frangos de corte, sendo coletadas 120 amostras antes e 120 após a etapa de pré-resfriamento, para quantificação de coliformes termotolerantes pela técnica de contagem em placas. As médias das contagens obtidas das carcaças coletadas antes e após o pré-resfriamento foram diferentes, com uma redução média de 0,99log10 UFC g-1 de coliformes termotolerantes. Na interpretação dos resultados obtidos antes do pré-resfriamento pela análise individual, 16,7% (20/120) das carcaças foram classificadas como inaceitáveis, enquanto, pela análise por lotes, foram 37,5% (45/120). Houve associação entre a aceitabilidade dos lotes e a passagem pelo chiller com um valor de Odds Ratio de 35,48. Ficou demonstrada a importância da utilização do plano de análise por lotes e da etapa de pré-resfriamento no processo de produção, sendo decisivos para a aceitação dos lotes de carcaças de aves para comercialização pelos parâmetros vigentes na legislação nacional