Innovative ferritin nanocages for drug-delivery and biotechnological applications

The work presented in this thesis aimed to set out the basis for the rational design of innovative protein-based carriers for drug-delivery and biotechnological applications. In this context, ferritin stood out as promising protein system due to its remarkable characteristics. Ferritins are versatile biocompatible proteins scaffolds that display a cage-like structure that provides shielding of the cavity’s content from harsh external conditions, and are amenable to modifications in a relatively straightforward manner. Previously published information noted that the proteic cage of ferritins presents an unexpected degree of plasticity in that it can undergo significant structural rearrangements and thus trap small molecules within the internal cavity, a process referred to as “encapsulation”. However the assembled state of ferritin’s cage has always been seen as an impermeable structure, in which the communication between the internal cavity and the exterior is uniquely governed by the gating effect of the channels located at the threefold symmetry axes. In order to clarify the process of molecule confinement within ferritin the internal cavity, a critical analysis of the process of ligand entry/release through the protein matrices of ferritins of different origin was carried. Thus the kinetics of the disulfide bond formation between DTNB and engineered cysteines at selected positions were followed. Kinetics were found to be in the order of tens of seconds, a time frame likely to reflect the slow crossing of the protein matrix.The obtained data indicates that the protein matrix does not provide a significant barrier against bulky ligands such as DTNB, which, due to its dimensions (8-10 Å) and its net negative charge was thought unlinke to cross the protein shell. Within this vision, the technological effort of protein engineering for payload delivery may be most conveniently addressed to modification of the properties of the surface of the internal cavity rather than to possible rearrangements of the threefold channels. In an effort to develop versatile ferritin-based drug-delivery systems, archaeal ferritins appeared particularly promising as scaffolds. These proteins displays unique assembly properties and extreme thermodynamic stability, however lack the cell recognition properties of human ferritin. Thus a chimeric protein was designed in which the relevant recognition sequence of human ferritin was grafted into the corresponding sequence into archaeal ferritin surface exposed regions in order to confer specific recognition of human epitopes while keeping the unique salt-dependent assembly reaction. The construct structure was determined by X-ray crystallography and successfully shown to be actively uptaken via the Transferrin Receptor 1, a receptor known to be overexpressed in cancer cells. With the aim of improving current encapsulation methods the assembly properties of the novel archaeal-human chimeric ferritin nanocarrier were investigated and the effect of divalent cation investigated. Data demonstrated that physiological Mg2+ concentrations are sufficient to promote full assembly and that assembly takes place in a highly cooperative and fast manner, driven mostly by hydrophobic forces. However, at present, the effect of divalent cations has not been translated into a model of assembly mechanism, though, taken together, data indicates that subunit oligomerization may possibly follow an analogous mechanism as identified for cation-induced assembly of viral capsids. The understanding of the major forces governing the assembly provides key elements for the development of strategies for efficient encapsulation/ release of probes in a controlled way. On a different approach, the project aimed to exploit the versatility of ferritins for bioimaging applications by inserting an extra functional segment per monomer for binding of luminescent lanthanides, within mouse H ferritin’s cavity. This extra segment possesses one high affinity Terbium binding site provided by six coordinating aminoacid side chains and a tryptophan residue in its close proximity for FRET sensitization. Accordingly, the construct demonstrated lanthanide fluorescence detectable in the pM concentration range and demonstrated to be actively uptaken by selected tumor cell lines by confocal microscopy and FACS analysis of their FITC derivatives. Crystallographic data shown that introduction segment did not disrupt the cage assembly, and the presence of a total of 56 Tb(III) atoms per 24mer. These systems could be used for advanced cell imaging applications, merging the recognition capabilities of ferritins with the notable properties of lanthanide-based fluorescence

The New Accounting for Operating Leases: Unintended Consequences in the Airline Industry

By 2020, new accounting rules for operating leases were applicable to publicly traded companies reporting under either the US Generally Accepted Accounting Principles (GAAP) or International Financial Reporting Standards (IFRS). The accounting authorities under both standards noted that the new rules were developed to increase the transparency of lease transactions to provide more relevant and comparable information. We compare two Brazilian airlines reporting under IFRS, Azul and Gol, with an operationally similar US airline reporting under US GAAP, JetBlue, to determine whether the new standards improve the ability to understand, evaluate, and compare performance, managerial decision making and credit metrics. We conclude that unintended consequences of the new rules have in some areas hindered rather than enhanced the comparability and transparency. Based on our analysis, we recommend two changes that would enhance comparability and transparency in the airline industry as well as other industries with heavy reliance on operating leases

Ferritin nanovehicle for targeted delivery of cytochrome C to cancer cells

In this work, we have exploited the unique properties of a chimeric archaeal-human ferritin to encapsulate, deliver and release cytochrome c and induce apoptosis in a myeloid leukemia cell line. The chimeric protein combines the versatility in 24-meric assembly and cargo incorporation capability of Archaeglobus fulgidus ferritin with specific binding of human H ferritin to CD71, the “heavy duty” carrier responsible for transferrin-iron uptake. Delivery of ferritin-encapsulated cytochrome C to the Acute Promyelocytic Leukemia (APL) NB4 cell line, highly resistant to transfection by conventional methods, was successfully achieved in vitro. The effective liberation of cytochrome C within the cytosolic environment, demonstrated by double fluorescent labelling, induced apoptosis in the cancer cells

Direito de Autor, intimidade privada e ambiente digital: reflexões sobre a cópia privada de obras intelectuais

Araucaria. Revista Iberoamericana de Filosofia, Política y Humanidades - Año 9, Nº 18, Segundo semestre de 2007O presente texto analisa o limite estabelecido na maioria das legislações autorais ao direito de reprodução que dispensa do consentimento do titular do direito de autor as reproduções para uso privado. Este limite aparece muitas vezes associado a um direito dos titulares de direitos a uma compensação equitativa pelos prejuízos que se estima daí terem resultado para a exploração normal das obras intelectuais, a qual se encontra actualmente em discussão pela Comissão Europeia e que obriga a repensar a própria subsistência de um limite relativo à cópia privada. São, por isso, passadas em revista as justificações que tradicionalmente têm fundamentado este limite e analisada a legitimidade das mesmas no contexto das reproduções digitais de obras, concedendo-se especial atenção àquele que parece ser o seu alicerce mais consistente, isto é, a protecção da privacidade do indivíduo

Novas tecnologias da informação: o professor como mediador do conhecimento

Anais do II Seminário Seminário Estadual PIBID do Paraná: tecendo saberes / organizado por Dulcyene Maria Ribeiro e Catarina Costa Fernandes — Foz do Iguaçu: Unioeste; Unila, 2014Este artigo tem como objetivo destacar a importância de projetos no PIBID 3 voltados para as novas tecnologias da educação e da informação como ferramentas importantes no processo de ensino e aprendizagem. Para tanto, busca investigar a importância das novas tecnologias da informação na sociedade atual e na escola, reconhecendo como as mesmas estão sendo utilizadas no contexto educacional, enfocando o papel do professor como mediador. A metodologia utilizada neste estudo é a pesquisa bibliográfica, pautada em Saviani (1985), Sampaio e Leite (1999), Vygotsky (2000), Dowbor (2001), Behrens (2005) , dentre outros, que discutem as novas tecnologias de informação e da comunicação no âmbito escolar. Ao final do trabalho conclui-se que a atividade docente, diante das novas tecnologias da educação pode proporcionar a melhoria do processo de ensino e aprendizagem nas escolas, sendo que os projetos do PIBID voltados para este tema são de extrema relevânci

Entrando a la música de cuerpo entero : un enfoque cognitivista para la enseñanza inicial de los instrumentos

La ejecución de un instrumento musical es un procedimiento complejo que, con un fin de expresión artística, conjuga habilidades provenientes de una diversidad de campos que exceden lo estrictamente musical. El individuo que se inicia en el estudio de un instrumento puede reducir la complejidad de la situación aprovechando su experiencia personal en los diferentes dominios involucrados. Tomando como marco teórico estudios cognitivistas que analizan los mecanismos de apropiación de conocimiento nuevo a partir de la reposición de conocimiento previo, las autoras trabajan sobre su adaptación al campo de la enseñanza inicial de los instrumentos musicales.L'exécution d'un instrument de musique est une procédure complexe que, avec une fin (le but) d'expression artistique, rassemble des compétences d'une diversité des champs qu'ils excèdent le fait strictement musicale. L'individu qui commence dans l'étude d'un instrument peut réduire la complexité du fait de profiter de situation de son expérience personnelle dans les différentes champs impliquées. Dans l'encadrement théorique cognitiviste qui analyse les mécanismes d'appropriation de nouvelle connaissance depuis le rétablissement de connaissance précédente, le travail de femmes auteur sur son (elle, votre) l'ajustement au champ(domaine) de l'éducation initiale des instruments de musique.Fil: García Trabuco, Alejandra. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Artes y Diseño. Escuela de MúsicaFil: Silnik, María Alejandra.Fil: Yurcic, Andrea Verónica. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Artes y Diseño. Escuela de Músic

Compressão de sinais de eletromiografia utilizando transformada de Wavelets e alocação de bits por sub-bandas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Elétrica, 2012.Em face ao crescente uso de sinais de eletromiografia pela medicina, é imprescindível a otimização do processo de codificação dos sinais envolvidos. Assim, esta pesquisa visa colaborar com essa crescente necessidade. Aqui é apresentado um codificador de sinais baseado em transformada Wavelet e alocação de bits por sub-bandas. Foram implementadas e comparadas três formas distintas de alocação de bits: exponencial, linear e raiz-quadrática, todas decrescentes. Comparações com outros codificadores presentes na literatura são apresentadas. Verificou-se que alocação raiz-quadrática decrescente aplicada a alocação de bits por sub-banda gerou um melhor resultado quando comparada com as outras formas de alocação e resultados melhores ou semelhantes foram alcançados na comparação com outros codificadores presentes na literatura. No esenvolvimento do codificador, buscou-se sempre a máxima compressão, mas sem a perda de fidelidade do sinal reconstruído, característica fundamental da análise de sinais eletromiográficos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTGiven the increasing use of electromyographic signals by the medicine, is essential to optimize the process of encoding the signals involved. So this research intends to collaborate with this growing need. In this work, an encoder signal based on wavelet transform and bit allocation for sub-bands is presented. Were implemented and compared three methods of allocating bits: exponential, linear and quadratic-root, all decreasing. It was found that decreasing quadratic-root allocation applied to the bits allocation per sub-band produced the best results when compared with other forms of allocation and similar or better results were achieved in comparison to other encoders in the literature. In the development of the encoder, always sought to maximum compression, but without loss of fidelity of the reconstructed signal, a fundamental characteristic of the analysis of electromyographic signals

A relação entre Escola e Família na perspectiva de futuros Educadores de Infância e de Professores do 1º ciclo do Ensino Básico: influências da formação inicial e supervisão pedagógica na promoção desta relação

Este estudo procura caracterizar a relação entre Escola e Família na perspectiva de alunos futuros Educadores de Infância e Professores do Ensino Básico do 1º ciclo, no contexto do seu estágio final de quarto ano. Partindo do pressuposto que as concepções dos alunos não se formulam num vazio, procura-se compreender as concepções teóricas e práticas acerca da relação entre Escola e Família destes alunos, no contexto da formação que os enquadra e igualmente no contexto das escolas onde realizam o seu estágio final. Realizámos um estudo de caso em duas Instituições de Ensino Superior, a Escola Superior de Educação de Beja e a Universidade de Évora, nomeadamente a quatro turmas de quarto ano das duas licenciaturas já referidas. Como instrumentos de recolha de dados fizemos uma análise das disciplinas do plano de estudos de cada licenciatura, assim como fizemos também uma análise dos instrumentos de planificação e avaliação que estes estabelecimentos de ensino utilizam, e ainda aplicámos aos alunos um inquérito por questionário. Os resultados que obtivemos mostram que os alunos dão importância à relação de complementaridade e de relação entre Escola e Família, não considerando assim a separação entre estes dois agentes educativos. Como tal, estes alunos consideraram que os professores e educadores devem ter em consideração o envolvimento das Famílias nas suas planificações de actividades e assumir os pais como agentes educativos activos. Estes dados só fazem sentido, uma vez que quer a Escola Superior de Educação de Beja, quer a Universidade de Évora, parecem fornecer aos seus alunos, formação para que estes estejam sensibilizados para a promoção da relação entre Escola e Família, através de vários propósitos que exigem aos seus alunos. Contudo salientamos uma formação inicial mais abrangente e exigente na Universidade de Évora. Ainda assim, é um facto que estes alunos encontraram factores que dificultaram o estabelecimento da relação entre Escola e Família ao longo dos seus estágios finais, no entanto, conseguiram estabelecer estratégias de modo a ultrapassá-las, estratégias estas, na sua maioria inseridas nos tipo 2 e 3 da tipologia de Joyce Epstein, assim como estratégias ligadas à comunicação e promoção da participação conjunta em actividades realizadas tanto dentro como fora da sala e/ou Instituição. ABSTRACT: This study characterizes the school-family relationships from the point of view of pre­school and primary student-teachers in their final year of initial training. Assuming that the student’s conceptions are not build in an empty context, we seek to understand the theoretical and practical concepts about the school-family relationships of these students, in the context of their experience at the University and at the schools where they undergo their final practicum. This is a case-study of two higher education institutions: Escola Superior de Educação de Beja and Universidade de Évora, and two courses in each institution: Pre-school Education and Primary School Teaching; the students belong to the four final years of these courses. Data included documentary analysis of the courses plans and the planning and evaluation instruments used within each course and a questionnaire to all students of each course. Results point out to an understanding of school-family relationships characterized by complementarity and reciprocity, rejecting a view of separation between school and family. These students considered important that teachers include in their plans opportunities to involve families and that they consider families as active educational agents. These results seem to be associated with the higher education institutions programs which encourage and require students to adopt such approach. The results seem to suggest that the teachers' training at the Universidade de Évora is slightly broader and more demanding. Despite these students having found some resistances and difficulties during their practicum in relation to implementing school and family links, they were also able to implement some strategies to overcome these difficulties. The strategies students used were mainly within Joyce Epstein's type tow and tree; strategies were mainly directed to promote communication and joint participation in activities inside as well as outside the classroom and the school

Plano de negócios para a reestruturação da subsecção de bar da Cooperativa Agrícola de Vila do Conde, CRL

Projeto apresentado ao Instituto Politécnico do Porto para obtenção do Grau de Mestre em Gestão das Organizações, Ramo de Gestão de Empresas Orientação Científica: Professor Doutor Eduardo de Sá e Silva | Doutora Fátima Monteiro Orientação Técnica: Dr. Paulo CostaO presente projeto compreende um Plano de Negócios para a reestruturação da subsecção de bar da Cooperativa Agrícola de Vila do Conde, CRL (CAVC) e transformação em snack-bar, com vista à sua afirmação no mercado da restauração. O principal objetivo prende-se com a avaliação económica e financeira do projeto, bem como a sua análise de viabilidade. Foi elaborado em âmbito de estágio profissionalizante, tido como requisito parcial para a obtenção do grau de mestre em Gestão das Organizações – Ramo de Gestão de Empresas, que serviu como suporte para a integração e conhecimento das várias valências e serviços da Cooperativa, permitindo a obtenção de toda a informação necessária ao desenvolvimento projeto. Durante o estágio, foram realizadas algumas horas ao serviço da subsecção de bar, por forma a obter um maior conhecimento acerca do cliente, assim como dos potenciais serviços e produtos a implementar. Este relatório apresenta-se como produto final de meses de experiência laboral, pesquisa bibliográfica e de reflexão de um ano curricular. Primordiar-se-á a introdução de um conceito inovador: a aposta em gastronomia de vertente biológica, variada e com uma conceção gourmet1, que despoletará a satisfação das necessidades locais e a fidelização de colaboradores, associados, residentes locais e empresas limítrofes. Com base no conhecimento do mercado adquirido, é definido todo o processo de formulação estratégica. Nesta fase, são apresentados aspetos como a visão, missão, valores e recursos da empresa que permitirão identificar as vantagens competitivas e fatores críticos de sucesso do projeto. Numa última fase, procede-se à adequação de um modelo de monitorização estratégica do desempenho – Balanced Scorecard – ao projeto como ferramenta de controlo de gestão, com vista a proporcionar o alinhamento da estratégia com os objetivos definidos e por conseguinte, permitir a exequibilidade deste. Considerando um investimento inicial na ordem dos 110.000 euros, é expetável que durante os primeiros 2 anos o resultado líquido seja negativo, levando a que o Pay Back estimado seja de 8 anos. Com uma faturação no primeiro ano de 84.059.00 euros, um VAL de 51.529.00 euros e uma TIR de 17,52%, considera-se um negócio economicamente viável.Este proyecto apresenta un plan de negocios para la reestructuración de la subsección de bar de la Cooperativa Agricola de Vila do Conde (CAVC) y su transformación en snack-bar, con miras a su afirmación en el mercado de la restauración. El objetivo principal es la evaluación económica y financiera del proyecto y su análisis de factibilidad. Fue preparado en conjunto con la practica curricular que tuvo lugar en la empresa, requisito parcial para obtener el grado de master en Gestión Organizacional - Gestión de Empresas. La práctica sirvió de apoyo a la integración y el conocimiento de los distintos activos y servicios cooperativos y permitio obtener toda la información necesaria para la elaboración del proyecto. Durante la etapa, hubo un par de horas en la subsección de bar con el fin de obtener un mayor conocimiento sobre el cliente y sus necessidades. Este informe se presenta como un producto final de meses de experiencia laboral, investigación bibliográfica y un año de reflexión académica. Uno de los objetivos es la introducción de un nuevo concepto: el enfoque en alimentos biológicos con una concepción gourmet, que suscite la satisfacción de las necesidades locales y la lealtad de los empleados, asociados, residentes locales y empresas vecinas. Basado en el mercado de los conocimientos adquiridos, se define la formulación estratégica. En esta etapa, se presentan aspectos como la visión, misión, valores y recursos de la empresa que identifican las ventajas competitivas y los factores críticos para el éxito del proyecto. En la fase final, se procede a la adecuación de un modelo estratégico de rendimiento - Balanced Scorecard - al proyecto como una herramienta de control de gestión, con el fin de proporcionar una alineación de la estrategia con objetivos definidos y, por tanto, permitir la viabilidad de este. Teniendo una inversión inicial de 110.000 euros, se espera que durante los dos primeros años el resultado neto sea negativo y que el Pay Back estimado sea de 8 años. Con una facturación en el primer año de 84.059.00 euros, un VAN (Valor Presente Neto) de 51.529.00 euros y una Tasa Interna de Retorno de 17,52%, se considera un negocio económicamente viable