Molecular Mechanisms Controlling HIV Transcription and Latency – Implications for Therapeutic Viral Reactivation

Persistence of transcriptionally silent replication competent HIV-1 is a major barrier to clearance of the virus from patients; current combinatorial antiretroviral therapies are successful in abrogating active viral replication, but are unable to eradicate latent HIV-1. A “shock and kill” strategy has been proposed as a curative approach in which latent virus is activated and infected cells are removed by immune clearance, while new rounds of infection are prevented by antiretroviral therapy. Much effort has been put toward understanding the molecular mechanisms maintaining HIV latency and the nature of reservoirs, to provide novel therapeutic targets. This has led to the development of latency reversal agents (LRAs), some of which are undergoing clinical trials. Targeting multiple mechanisms underlying HIV latency via a combination of LRAs is likely to result in more potent activation of the latent reservoir. Therefore, novel as well as synergistic combinations of therapeutic molecules are required to accomplish more potent latency reversal

A Two-Color Haploid Genetic Screen Identifies Novel Host Factors Involved in HIV-1 Latency

To identify novel host factors as putative targets to reverse HIV-1 latency, we performed an insertional mutagenesis genetic screen in a latent HIV-1 infected pseudohaploid KBM7 cell line (Hap-Lat). Following mutagenesis, insertions were mapped to the genome, and bioinformatic analysis resulted in the identification of 69 candidate host genes involved in maintaining HIV-1 latency. A select set of candidate genes was functionally validated using short hairpin RNA (shRNA)-mediated depletion in latent HIV-1 infected J-Lat A2 and 11.1 T cell lines. We confirmed ADK, CHD9, CMSS1, EVI2B, EXOSC8, FAM19A, GRIK5, IRF2BP2, NF1, and USP15 as novel host factors involved in the maintenance of HIV-1 latency. Chromatin immunoprecipitation assays indicated that CHD9, a chromodomain helicase DNA-binding protein, maintains HIV-1 latency via direct association with the HIV-1 5′ long terminal repeat (LTR), and its depletion results in increased histone acetylation at the HIV-1 promoter, concomitant with HIV-1 latency reversal. FDA-approved inhibitors 5-iodotubercidin, trametinib, and topiramate, targeting ADK, NF1, and GRIK5, respectively, were characterized for their latency reversal potential. While 5-iodotubercidin exhibited significant cytotoxicity in both J-Lat and primary CD4(+) T cells, trametinib reversed latency in J-Lat cells but not in latent HIV-1 infected primary CD4(+) T cells. Importantly, topiramate reversed latency in cell line models, in latently infected primary CD4(+) T cells, and crucially in CD4(+) T cells from three people living with HIV-1 (PLWH) under suppressive antiretroviral therapy, without inducing T cell activation or significant toxicity. Thus, using an adaptation of a haploid forward genetic screen, we identified novel and druggable host factors contributing to HIV-1 latency

Gliotoxin, identified from a screen of fungal metabolites, disrupts 7SK snRNP, releases P-TEFb, and reverses HIV-1 latency

A leading pharmacological strategy toward HIV cure requires "shock" or activation of HIV gene expression in latently infected cells with latency reversal agents (LRAs) followed by their subsequent clearance. In a screen for novel LRAs, we used fungal secondary metabolites as a source of bioactive molecules. Using orthogonal mass spectrometry (MS) coupled to latency reversal bioassays, we identified gliotoxin (GTX) as a novel LRA. GTX significantly induced HIV-1 gene expression in latent ex vivo infected primary cells and in CD4+ T cells from all aviremic HIV-1+ participants. RNA sequencing identified 7SK RNA, the scaffold of the positive transcription elongation factor b (P-TEFb) inhibitory 7SK small nuclear ribonucleoprotein (snRNP) complex, to be significantly reduced upon GTX treatment of CD4+ T cells. GTX directly disrupted 7SK snRNP by targeting La-related protein 7 (LARP7), releasing active P-TEFb, which phosphorylated RNA polymerase II (Pol II) C-terminal domain (CTD), inducing HIV transcription

The BAF complex inhibitor pyrimethamine reverses HIV-1 latency in people with HIV-1 on antiretroviral therapy

Reactivation of the latent HIV-1 reservoir is a first step toward triggering reservoir decay. Here, we investigated the impact of the BAF complex inhibitor pyrimethamine on the reservoir of people living with HIV-1 (PLWH). Twenty-eight PLWH on suppressive antiretroviral therapy were randomized (1:1:1:1 ratio) to receive pyrimethamine, valproic acid, both, or no intervention for 14 days. The primary end point was change in cell-associated unspliced (CA US) HIV-1 RNA at days 0 and 14. We observed a rapid, modest, and significant increase in (CA US) HIV-1 RNA in response to pyrimethamine exposure, which persisted throughout treatment and follow-up. Valproic acid treatment alone did not increase (CA US) HIV-1 RNA or augment the effect of pyrimethamine. Pyrimethamine treatment did not result in a reduction in the size of the inducible reservoir. These data demonstrate that the licensed drug pyrimethamine can be repurposed as a BAF complex inhibitor to reverse HIV-1 latency in vivo in PLWH, substantiating its potential advancement in clinical studies.</p

Semantics of the Preposition NA in Contemporary Russian. A Cognitive Linguistics Approach

Niniejsza praca poświęcona jest znaczeniu współczesnego rosyjskiego przyimka НА w kontekstach z biernikiem oraz miejscownikiem. Analiza materiału empirycznego przeprowadzona została w oparciu o aparat pojęciowy lingwistyki kognitywnej. Praca składa się z pięciu rozdziałów. Trzy pierwsze mają charakter teoretyczny. Pierwszy rozdział stanowi wprowadzenie do kognitywnej teorii języka: historia oraz charakterystyka na tle innych paradygmatów w obrębie lingwistyki, wprowadzenie najważniejszych pojęć oraz zjawisk związanych z tematem pracy, prezentacja gramatyki kognitywnej Ronalda Langackera. Drugi rozdział w całości poświęcony jest zagadnieniu przyimka. W tej części pracy dość szczegółowo omawia się tradycyjne podejście do tej klasy części mowy, a następnie (równie szczegółowo) prezentuje się podejście w duchu lingwistyki kognitywnej. Trzeci rozdział ma charakter dopełniający, gdyż przedstawia się tutaj trzy różne, a jednak powiązane ze sobą punkty widzenia na przestrzeń oraz czas: filozoficzny, fizyczny, językowy. Dwa pozostałe rozdziały mają charakter analityczny, gdyż w nich prezentuje się wyniki badań: przyimek jest polisemiczną jednostką symboliczną, której znaczenia odwołują się do trzech domen: przestrzennej, temporalnej oraz abstrakcyjnej. Domena przestrzenna jest najbardziej podstawowa, gdyż stanowi konceptualną podstawę dla wyodrębniania pozostałych znaczeń, istniejących już nie obiektywnie w świecie, lecz raczej w przestrzeniach mentalnych konceptualizatora. Znaczenia rosyjskiego przyimka НА stanowią system sensów uchwytny za pomocą sieci radialnej.The subject of this thesis has been dedicated to the semantics of the Russian contemporary preposition НА used in contexts with accusative case and locative case. The analysis of the empirical data has been conducted within cognitive linguistics. The thesis consists of five chapters, three of which are theoretical and the other two analytical. In the first chapter author focuses on the preliminaries of the cognitive linguistics: its history, paradigmatic background, essential terms necessary for the subject as well as the presentation of the Ronald Langacker’s cognitive grammar. The aim of the second chapter is to present the methodological approach to the Russian preposition both within the traditional study and the cognitive linguistics one. In the third complemental chapter have been presented three different but interconnected points of view at Space and Time: philosophical, physical and linguistic. In the last two chapters the results of the analysis are given: the Russian contemporary preposition “na” is the polysemic symbolical unit, meanings of which refer to the three domains: spatial, temporal and abstract. The temporal domain is the most fundamental one as on its basis the other meanings are derived. These meanings do not exist in the objective world but rather in the mental spaces of the conceptualizer. Moreover, the semantic structure of the discussed preposition is able to constitute the radial network.Настоящая работа посвящена семантике современного русского предлога НА в контекстах с винительным и предложным падежами. Анализ эмпирического материала был проведен при помощи понятийного аппарата когнитивной лингвистики. Работа состоит из пяти глав. Первые три имеют теоретический характер. Первая глава является введением в когнитивную теорию языка: история и характеристика на фоне других парадигм в области лингвистики, введение самых важных понятий и явлений, связанных с темой работы, презентация когнитивной грамматики Рональда Лангакера. Вторая глава полностью посвящена вопросу предлога. В этой части работы довольно подробно обсуждается традиционный подход к этому классу частей речи, а затем (также подробно) презентуется подход в духе когнитивной лингвистики. Третья глава имеет дополнительный характер, так как здесь представляются три разные, однако связанные друг с другом точки зрения на пространство и время: философская, физическая и языковая. Две последние главы имеют аналитический характер, так как в них презентуется результаты исследований: предлог является полисемической символической единицей, значения которой отсылают к трём доменам: пространственному, временному и абстракционному. Пространственный домен фундаментальный, так как является концептуальной основой для выделения остальных значений, существующих уже не объективно в мире, но скорее в ментальных пространствах концептуализатора. Значения русского предлога НА представляют собой систему смыслов, уловимую при помощи радиальной сети

Italian broadcast of radio news today.

Język włoski w dzisiejszych przekazach wiadomości radiowych towarzyszy nam każdego dnia. Bardzo często nieświadomie, jak np. podczas podróży samochodem, czy też w codziennych czynnościach domowych ale także z własnej woli, gdy chcemy dowiedzieć się co dzieje się na świecie i dobrowolnie włączamy odbiorniki radiowe. Należy jednak zaznaczyć, że wiele czynników, takich jak kultura, tradycja, a przede wszystkim historia mają ogromny wpływ na zmiany jak zaszły w języku radia i wiadomości radiowych. Głównym i wspólnym celem wszystkich przekazów jest zdobycie jak największej liczby odbiorców, a także stworzenie informacji zrozumiałej dla każdej klasy społecznejItalian broadcast of radio news today accompanies us every day . Very often we are unaware of this fact , such as when we are in the car or in the performance of daily activities but sometimes also aware when we want to know what happens in the outside world and freely decide to turn on the radio . But we must say , that many factors such as culture , tradition and history mainly act on the changes that have occurred in the language of the radio and the radio news . The main purpose and common transmissions so far is to attract the largest number of recipients and also make the information understandable to all social classes.Italiano trasmesso del radiogiornale oggi ci accompagna ogni giorno. Molto spesso siamo inconsapevoli di questo fatto, come ad esempio quando siamo in macchina oppure nello svolgimento delle azioni quotidiane ma a volte anche consapevoli quando vogliamo sapere cosa succede nel mondo esterno e liberamente decidiamo di accendere la radio. Bisogna però dire, che molti fattori come ad esempio la cultura, la tradizione e soprattutto la storia agiscono sui cambiamenti che sono avvenuti nel linguaggio della radio e del radiogiornale. Lo scopo principale e comune delle trasmissioni radiofoniche è attirare il maggior numero dei destinatari e anche creare le informazioni comprensibili da ogni classe sociale

Sposób otrzymywania odlewów z surówki lub żeliwa o graficie sferoidalnym opis patentowy nr 67257 /

Tyt. z ekranu tyt.Zgłoszono 2 listopada 1970 r.Numer zgłosz. P 144183.Opublikowano 31 marca 1973 r.Dostępny także w wersji drukowanej.Tryb dostępu: Internet