INMUNOENSAYO DE CAPA FINA (ICF) EN EL SERODIAGNÓSTICO DE LA TRIPANOSOMIASIS BOVINA CAUSADA POR EL Trypanosoma vivax

El Trypanosoma vivax es el agente causal de la tripanosomiasis bovina. Las bajas parasitemias y sus oscilaciones típicas en la enfermedad, limitan el uso de métodos de diagnóstico directo. La prueba de ELISA es una técnica serológica con buena sensibilidad, especificidad y valor predictivo, pero con ciertos inconvenientes debido a su alto costo y difícil transferencia al campo. Dada la optimización previa de la técnica de ELISA para la detección de anticuerpos de bovino anti-T. vivax utilizando antígenos del Trypanosoma evansi, el objetivo de este trabajo fue el de optimizar la prueba de Inmunoensayo de Capa Fina (ICF) y aplicarla junto con la prueba de ELISA en un estudio seroepidemiológico comparativo. A manera general, los antígenos del T. evansi se sensibilizaron en las placas a distintas concentraciones en tampón carbonato 0,05 M pH 9,6, para posteriormente incubarlas en presencia de los sueros problema y de referencia, positivos y negativos, al T. vivax. El excedente de antígenos y sueros se eliminó por lavados con agua destilada y las reacciones antígeno-anticuerpo, se revelaron con los vapores de un baño de María en el caso del ICF y por incubación con anticuerpos secundarios conjugados a peroxidasa y un sustrato cromogénico para el ELISA. La seroprevalencia obtenida por ICF y ELISA fue del 38,66% y 36% respectivamente, a la vez que la distribución de la seroprevalencia por localidad, es similar en ambas pruebas. La fiabilidad del ICF en relación al ELISA quedó demostrada con una sensibilidad del 89,36% y especificidad del 75%. Los resultados demuestran que la prueba de ICF tiene una alta correlación con la prueba de ELISA, por ello la postulamos como una técnica alternativa en los estudios seroepidemiológicos de la tripanosomiasis bovina.   (Palabras clave: Ganado bovino; Trypanosoma vivax; Técnicas inmunológicas; anticuerpos)           Abstract   Trypanosoma vivax is the aethiological agent of bovine trypanosomiasis. The low parasitic burden and typical fluctuations, limit the direct diagnosis of the disease. The ELISA is a serological technique that has been used for the detection of trypanosomiasis. However, despite its good sensibility, specificity and predictive value, the high cost of this test has restricted its applicability under field conditions. Given the previous standardization of the ELISA assay for the detection of bovine antibodies against T. vivax using T. evansi antigens, the aim of this work was to standardize the Thin Layer Immunoassay (TIA) and apply it in conjunction with the ELISA test in a serological and epidemiological comparative study. Briefly, T. evansi antigens were sensitized in Petri dishes at different protein concentrations in 0.05 M carbonate buffer (pH 9.6). Subsequently, the Petri dishes were incubated in the presence of problem and reference sera, which were either positive or negative to T. vivax. The excess antigen and sera was eliminated by washes in distilled water and the antigen-antibody reactions were developed with a water steam in the TIA, followed by incubation with secondary antibodies (anti-bovine IgG) conjugated to Horseradish Peroxidase (HRP) and a chromogenic substrate in the ELISA. Results show that the values of seroprevalence obtained by both techniques were similar (38.66% and 36% for ICF and ELISA, respectively). Also, seroprevalence distribution in each locality was similar for both tests. The relative trustability of TIA was demonstrated with a sensibility of 89.36% and a specificity of 75%, respectively. These results suggest that TIA has a high correlation with ELISA and is suitable to be used in serological and epidemiological studies of bovine trypanosomiasis.   (Key words: Cattle; Trypanosoma vivax;  Immunological techniques; antibodies

Lectin-binding pattern in the kidney of mice experimentally infected with a venezuelan strain of Trypanosoma evansi

El Trypanosoma evansi es un hemoparásito que ocasiona la tripanosomosis equina en Venezuela. Esta enfermedad cursa con un incremento en la temperatura corporal, anemia, debilidad, parálisis y en algunos casos la muerte. Los mecanismos celulares del proceso infeccioso no se conocen con exactitud y pueden involucrar a los glicoconjugados de superficie del parásito y del hospedador. El propósito del presente estudio fue determinar las diferencias en el patrón de enlazamiento de las lectinas: sCon A, sWGA, PNA, SBA, UEA-I, LFA, SNA, y MAL-II en el riñón de ratones sanos e infectados con T. evansi. Para ello se realizó el marcaje sobre cortes en parafina de riñón utilizando el método del Complejo Avidina-Biotina (ABC). En controles se observó una reacción de moderada a intensa del endotelio glomerular con LFA, SNA y MAL-II mientras que en los animales infectados la reacción fue intensa. Los controles no experimentaron marcaje con sConA, sWGA, PNA y SBA a la vez que los infectados mostraron reacción mínima. El endotelio glomerular de los animales infectados no experimentó cambios en el enlazamiento de UEA-I con respecto a los controles. En los animales infectados, los eritrocitos y los túbulos contorneados proximales incrementaron su reactividad con SNA, y los componentes de la matriz extracelular con UEA-I. El marcaje con sWGA en la cápsula Bowmann de los riñones de animales infectados disminuyó con respecto a los controles. Estos resultados sugieren que en ratones infectados, los tripanosomas vivos o muertos pueden liberar componentes que alteran el patrón de glicoconjugados en las membranas celulares del riñón.431 - [email protected]@yahoo.comBimestralTrypanosoma evansi is the aethiological agent of equine trypanosomosis in Venezuela. This disease causes an increment in body temperature, anaemia, weakness and paralysis, finally causing the death of the host. The cellular mechanisms involved in the infectious process are not known and may involve the growth of superficial glycoconjugates with characteristic sugar residuals on the surfaces of both host and trypanosomes. The aim of the present study was to determine possible differences in the binding patterns of lectins: sCon A, sWGA, PNA, SBA, UEA-I, LFA, SNA, and MAL-II in kidneys of healthy mice and and mice infected with T. evansi. Sections of infected and control mice kidneys were labelled according to the Avidine-Biotine Complex (ABC) method. In controls and infected animals an intense reaction in the glomerular endothelium was observed with: LFA, SNA and MAL-II, and a low to moderate reaction with sCon A, sWGA, PNA, SBA, and UEA-I. In infected animals, the red blood cells and the Henle loop showed increased reactivity with SNA, and the components of the extracellular matrix with UEA-I. In infected animals the binding with SNA in the proximal convolute tubules and with PNA and sWGA in the renal capsule was reduced. These results suggest that in infected mice, living or dead trypanosomes might liberate biologically active products that alter the pattern of the glycoconjugates in the cell membranes of the kidney