Caracterização da imunogenicidade das proteínas recombinantes Virb9, Virb10 e fator termo instável de Elongação de Peptídeos de Anaplasma marginale em camundongos

Considering the limitations of current methods of anaplasmosis control, the development of a more effective vaccine is required. Previous studies, using proteomic and genomic approaches, have identified new membrane proteinsin Anaplasma marginale that may be vaccine candidates. These include VirB9, VirB10 and elongation factor-Tu (EFTu).Although the role of these proteins in the membrane of A. marginale has not been properly characterized, production of the recombinant proteins rVirB9, rVirB10, and rEF-Tu has been achieved. However, these recombinant proteins have not yet been exploited in vaccine formulations. The present study describes the use of rVirB9, rVirB10and rEF-Tu, emulsificated in adjuvant Montanide, in mice. A strong humoral immune response was induced under these conditions, with both IgG1 and IgG2a production. The IgG2a/IgG1 ratios revealed a predominance of IgG1.However, splenocytes of the animals that received rVirB9 or rVirB10 produced high levels of gamma interferon after in vitro stimulation, indicating a specific cellular immune response to these proteins. Therefore, further studies are required to adjust the profile of the immune response in order to perform tests of protection against A. marginale in cattle.Considerando as limitações dos atuais métodos de controle contra a anaplasmose bovina, o desenvolvimento de uma vacina efetiva se faz necessário. A partir do advento da análise genômica e proteômica, novas proteínas de membrana de Anaplasma marginale foram identificadas como possíveis candidatas a componentes de uma vacina, tais como, VirB9,VirB10 e Fator Termo Instavél de Elongação de Peptídeos (EF-Tu). Embora estas proteínas ainda não estejam bem caracterizadas na membrana de A. marginale, a produção destas na forma recombinante (rVirB 9, rVirB10 e rEF-Tu)tem sido realizada, mas as mesmas ainda não foram exploradas em formulações vacinais. Neste trabalho, avaliou-se ouso de rVirB9, rVirB10 e rEF-Tu emulsionadas em adjuvante Montanide em camundongos. Nas condições testadas, verificou-se a indução de forte resposta imune humoral com a produção de IgG1 e IgG2a, sendo que as proporções dos níveis de produção destas subclasses indicam predomínio de IgG1. Entretanto, esplenócitos de animais, que foram injetados com rVirB9 ou rVirB10, produziram interferon-gama acima do limite de detecção do ensaio após estimulação in vitro, sinalizando assim resposta celular específica. Assim, novas avaliações serão realizadas com a finalidade de modular o perfil de resposta imune obtido em bovinos e avaliar a proteção contra A. marginale

Requirement of dual stimulation by homologous recombinant IL-2 and recombinant IL-12 for the in vitro production of interferon gamma by canine peripheral blood mononuclear cells.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2014-09-30T17:25:47Z No. of bitstreams: 1 Pereira A Requirement of dual stimulation.........pdf: 724685 bytes, checksum: d93ffeee109acbadf1748e48f588bb43 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2014-09-30T17:26:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Pereira A Requirement of dual stimulation.........pdf: 724685 bytes, checksum: d93ffeee109acbadf1748e48f588bb43 (MD5)Made available in DSpace on 2014-09-30T17:59:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira A Requirement of dual stimulation.........pdf: 724685 bytes, checksum: d93ffeee109acbadf1748e48f588bb43 (MD5) Previous issue date: 2014Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, BrasilInstituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais. INCT-DT. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Laboratório de Patologia e Biointervenção. Salvador, BA, Brasil / Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais. INCT-DT. Salvador, BA, BrasilBACKGROUND: Very few studies have been carried out so far aiming at modulating cellular immune responses in dogs. In this study, we evaluated the ability of recombinant canine IL-2 (rcaIL-2) and IL-12, in the form of a single-chain fusion protein (rsccaIL-12), to stimulate peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy mongrel dogs. RESULTS: Recombinant canine IL-2 purified from Escherichia coli or present in the supernatant of COS-7 cells transfected with pcDNA3.1-caIL-2 (COS-7 caIL-2 supernatant) was able to induce proliferation of CTLL-2 cells, thus showing their functional activity. In addition, purified rcaIL-2 and COS-7 caIL-2 supernatant stimulated resting canine PBMC proliferation to a level higher than baseline level. Neither COS-7 sccaIL-12 supernatant nor COS-7 caIL-2 supernatant alone was able to induce significant production of interferon gamma by resting PBMC. However, COS-7 sccaIL-12 supernatant in combination with COS-7 caIL-2 supernatant induced production of IFN-γ by those cells. CONCLUSIONS: The data shown herein suggest that the combination of canine recombinant IL-12 and IL-2 can be useful to promote cellular immune responses in dogs

Characterization of novel Leishmania infantum recombinant proteins encoded by genes from five families with distinct capacities for serodiagnosis of canine and human visceral leishmaniasis

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2014-02-07T14:25:50Z No. of bitstreams: 1 Oliveira, GG. et al. Characterization of novel Am J Tro Med Hyg 2011, v.85, p. 1025 .pdf: 1084049 bytes, checksum: 3c97efc05da2bea959bc5dc9f2477b25 (MD5)Made available in DSpace on 2014-02-07T14:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira, GG. et al. Characterization of novel Am J Tro Med Hyg 2011, v.85, p. 1025 .pdf: 1084049 bytes, checksum: 3c97efc05da2bea959bc5dc9f2477b25 (MD5) Previous issue date: 2011Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Instituto Nacional de Doenças Tropicais. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilTo expand the available panel of recombinant proteins that can be useful for identifying Leishmania -infected dogs and for diagnosing human visceral leishmaniasis (VL), we selected recombinant antigens from L. infantum , cDNA, and genomic libraries by using pools of serum samples from infected dogs and humans. The selected DNA fragments encoded homologs of a cytoplasmic heat-shock protein 70, a kinesin, a polyubiquitin, and two novel hypothetical proteins. Histidine-tagged recombinant proteins were produced after subcloning these DNA fragments and evaluated by using an enzyme-linked immunosorbent assays with panels of canine and human serum samples. The enzyme-linked immunosorbent assays with different recombinant proteins had different sensitivities (67.4–93.0% and 36.4–97.2%) and specificities (76.1–100% and 90.4–97.3%) when tested with serum samples from Leishmania -infected dogs and human patients with VL. Overall, no single recombinant antigen was sufficient to serodiagnosis all canine or human VL cases