Estudio de la inmunogenicidad y mecanismos de muerte celular en nuevas terapias antitumorales. Aplicación al mieloma múltiple

En la investigación oncológica, el estudio de los mecanismos moleculares de muerte celular provocados por la quimioterapia es esencial no sólo para llegar a comprender los mecanismos de acción inherentes de estos fármacos, sino también para idear, optimizar y mejorar nuevos enfoques terapéuticos que permitan atajar las tan temidas recaídas. Además, durante los últimos años, la inmunoterapia ha irrumpido en la clínica como un tratamiento que brinda de una cierta esperanza a los pacientes con cáncer. Hoy en día, los tratamientos antitumorales utilizados o en desarrollo son capaces de inducir muerte celular mediante distintos mecanismos como la apoptosis, necroptosis, muerte celular inmunogénica (ICD), catástrofe mitótica, entre otras. Nuestro objetivo durante este trabajo ha sido estudiar los diferentes mecanismos de muerte celular inducidos por fármacos antitumorales actuales o de reciente introducción en la clínica, así como explorar la naturaleza inmunogénica subyacente a dichos tipos de muerte celular.Por un lado, se ha estudiado la contribución de la catástrofe mitótica en la inducción de muerte celular por agentes antimitóticos, así como los mecanismos de muerte accionados cuando dichos fármacos se utilizan en combinación con miméticos de BH3. Los resultados mostraron la existencia de una gran variabilidad inter- e intraindividual en los comportamientos y destinos celulares en respuesta a los distintos compuestos antimitóticos (barasertib, alisertib, vincristina y docetaxel). No obstante, la combinación de los distintos compuestos antimitóticos ensayados con miméticos de BH3 mostró una potenciación de la citotoxicidad en líneas celulares tumorales adherentes, siendo la muerte celular experimentada dependiente de caspasas y de Bax y Bak. En cuanto al papel de la familia de Bcl-2 en la muerte inducida por estos fármacos, los datos parecen indicar que los miembros anti-apoptóticos de esta familia contribuyen de forma cooperativa y acumulativa. Además, a pesar de que se trata un tema bajo debate, los experimentos con microscopía de fluorescencia en time-lapse sugieren que la duración del arresto mitótico influye en el destino ante dicho bloqueo. Cuando se combinó los compuestos antimitóticos con el mimético de BH3, ABT-737, se aceleraba la muerte celular y aumentaba el porcentaje de células que sucumbían durante la mitosis, especialmente en aquellas combinaciones donde el arresto mitótico era más prolongado. En el caso particular del inhibidor de aurora-B (barasertib), la potenciación de la muerte celular cuando se combinaba con ABT-737 sigue un mecanismo molecular diferente. El tratamiento con barasertib indujo marcadores de senescencia en diversas líneas celulares tumorales y la administración posterior de ABT-737 sensibilizaba de forma efectiva a dichas células induciendo una potente respuesta citotóxica. Por otro lado, en este trabajo se ha estudiado la inmunogenicidad y los mecanismos de muerte celular inducidos por la combinación de inhibidores del proteasoma con inhibidores de autofagia o compuestos inductores de estrés en el retículo endoplasmático en diversos modelos de mieloma múltiple. A pesar de que las terapias actuales han conseguido extender la esperanza de vida de esta enfermedad, sigue siendo una neoplasia incurable. En concreto, aunque los inhibidores de proteasoma han demostrado una validada eficacia clínica, la resistencia a estos fármacos sigue siendo recurrente y abarca la mayoría de las recidivas. Esta situación por tanto exige que se diseñen y estudien nuevos esquemas terapéuticos para abordar las recaídas. Así, en un trabajo previo del grupo se demostró la capacidad del inhibidor de autofagia cloroquina para potenciar la muerte celular inducida por carfilzomib. Durante este trabajo, se ha logrado observar también una intensificación similar de la muerte celular en las diferentes líneas celulares humanas y murinas analizadas. Además, la capacidad citotóxica mejorada de esta combinación también se ha constatado en una amplia colección de muestras primarias de médula ósea aisladas de pacientes con mieloma múltiple. De manera similar a lo que ocurre con la cloroquina, también hemos observado que el DBeQ, inhibidor de VCP/p97, también aumenta notablemente la muerte celular inducida por carfilzomib tanto en líneas celulares de MM como en células de mieloma primarias aisladas de la médula ósea de pacientes con esta enfermedad. Además, nuestros resultados indican que las combinaciones de carfilzomib con CLQ o DBeQ no sólo potencian, sino que también aceleran la muerte celular. Sin embargo, el mecanismo de acción por el cual se provoca dicha potenciación no se ha aclarado completamente. Los resultados de este trabajo mostraron que estos tratamientos aumentaban la expresión de varios marcadores de la respuesta a estrés en el retículo. No obstante, dicha respuesta, dependía estrechamente del tiempo y variaba sustancialmente entre las distintas líneas celulares de mieloma. La familia Bcl-2 ocupa una posición trascendental en las respuestas mediadas por estrés en el ER. A este respecto, nuestros datos revelaron una acumulación temprana transitoria de diversos miembros tanto anti- como proapoptóticos de esta familia (Mcl-1, Bim, PUMA y en menor medida NOXA). No obstante, nuestros datos mostraron que la línea celular deficiente para Bim sólo ofrecía una protección parcial contra la muerte celular inducida por los fármacos utilizados. Por lo tanto, su deficiencia podría estar compensada por otros miembros de BH3 capaces de desencadenar la muerte celular tras el tratamiento farmacológico. Por otro lado, aunque todavía no se conoce con exactitud el mecanismo molecular responsable de la muerte celular inducida por estrés en el ER, existen pruebas de la participación tanto de la vía de los receptores mortales como de la vía intrínseca de la apoptosis. Para instigar la muerte celular por la vía canónica, se requiere la permeabilización de la membrana externa mitocondrial (MOMP) inducida por la oligomerización de Bax y Bak. Sin embargo, nuestros datos han demostrado la capacidad de las combinaciones de fármacos utilizadas de inducir la muerte celular en células deficientes en Bax y Bak. Así mismo, la muerte celular inducida por las combinaciones basadas en carfilzomib era dependiente de caspasas en la mayoría de las líneas celulares analizadas, aunque la contribución relativa de cada miembro de esta familia variaba con las diferentes líneas celulares utilizadas. Aunque precisa de un estudio más detallado, los datos obtenidos en este trabajo parecen indicar que la autofagia no juega un papel principal en la potenciación ejercida por la cloroquina sobre la muerte inducida por carfilzomib en nuestros modelos experimentales. En su lugar, los datos apuntan a que la cloroquina pueda ejercer de modulador alostérico sobre el proteasoma potenciando la inhibición de este cuando se utiliza en combinación con carfilzomib. En cuanto al estudio de la capacidad inmunogénica de estos tratamientos, se observó que in vitro, las combinaciones de fármacos eran capaces de inducir la expresión de diversas señales inmunogénicas (expresión de ecto-CRT, Hsp70 y BiP), así como la maduración de células dendríticas cuando estas eran coincubadas con restos apoptóticos de células tratadas con las formulaciones ensayadas. Sin embargo, las respuestas in vivo en los experimentos de vacunación en el modelo ortotópico de mieloma murino MOPC315.BM mostraron que la muerte celular provocada por la combinación de carfilzomib con cloroquina no proporcionaba un efecto protector contra el desarrollo de la enfermedad. Tan solo cuando la combinación de fármacos utilizada para tratar las células de mieloma contenía el inhibidor general de caspasas zVAD-fmk, se consiguió retrasar de forma débil el desarrollo del mieloma. Tal y como apuntan algunos estudios, esto podría indicar que las caspasas juegan un papel en la inmunogenicidad de la muerte celular. A la vista de nuestros datos, la emisión de DAMPs por sí misma podría no ser suficiente para provocar respuestas inmunitarias activas contra el cáncer. De hecho, se considera igualmente decisivo los mecanismos subyacentes involucrados en la recepción, transmisión y respuesta de las células inmunes a estas señales de peligro, así como la propia naturaleza inmunosupresora de esta enfermedad. Una de las razones detrás de la disfunción inmune observada en el mieloma múltiple está mediada por la regulación negativa ejercida por las proteínas inhibidoras del punto de control como el eje PD-1/PD-L1. Sin embargo, ni el tratamiento individual con anticuerpos monoclonales dirigidos contra los inhibidores del punto de control (anti-PD1), ni su combinación con la formulación de vacunación antes mencionada, extendían significativamente la supervivencia de los ratones. Es posible que redes moleculares mas complejas estén involucradas en la generación de una respuesta inmune antitumoral efectiva en la enfermedad de mieloma.Por último, cada vez se está consolidando más la idea de que los DAMPs y los procesos moleculares relacionados con la muerte celular inmunogénica puedan servir como una fuente de biomarcadores pronósticos en pacientes con cáncer. En este trabajo hemos demostrado por primera vez que las células de mieloma en muestras de médula ósea aisladas de pacientes con discrasias de células plasmáticas, muestran niveles elevados de ecto-CRT en su superficie. Además, aunque se observó una gran variabilidad interindividual, nuestros datos sugieren que los niveles de ecto-CRT parecen aumentar con la progresión de la enfermedad. Este hallazgo junto con el hecho de que los pacientes con un perfil citogenético alterado mostraron niveles aumentados de ecto-CRT y que la exposición a la CRT aparentemente no está influenciada por la quimioterapia, puede apuntar a la transformación maligna como el instigador principal de la expresión aumentada de este DAMP. Así mismo el análisis del microambiente en la médula ósea de estos pacientes mostró que los pacientes con niveles altos de ecto-CRT exhibían un perfil de células T alterado, con ratios bajos de células T CD4+/CD8+ consecuencia de una menor frecuencia de linfocitos T CD4+ y un mayor número de células T CD8+. Además, también presentaban un mayor número de células NK, mDC, pDC y Tregs, así como una mayor actividad en el eje PD-1/PD-L1. Así, nuestros datos sugieren que los pacientes con una mayor expresión de este DAMP, poseen rasgos inmunológicos reminiscentes de un microambiente medular óseo asociado a un estado inmunitario debilitado y comprometido, lo que podría traducirse en un mal resultado clínico en el contexto de la enfermedad. De hecho, el grupo de pacientes con un perfil de expresión de ecto-CRT aumentado exhibieron significativamente un menor tiempo medio de progresión de la enfermedad, desarrollaban con mayor frecuencia plasmacitomas extramedulares, habían sido tratados con un mayor número de líneas de tratamiento y albergaban un perfil citogenético de alto riesgo. Todo ello sugiere que la elevada expresión de ecto-CRT en las células de mieloma de estos pacientes está relacionada con una mayor malignidad, un microambiente inmunitario en la médula más deficiente y con un peor pronóstico clínico.<br /

Causes of mortality among adults with Down syndrome before and after the COVID-19 pandemic in Spain

Background: The life expectancy of people with Down syndrome (DS) is limited by Alzheimer's disease (AD)-related deaths, mainly due to respiratory infections. The emergence of the COVID-19 pandemic could have changed known, past trends in mortality in this population. We analysed the differences in causes of mortality between individuals with DS deceased before and after the onset of the pandemic. Method: This is a cross-sectional study of adults with DS recruited at a tertiary, university outpatient clinic in Madrid, Spain. Demographic and clinical data were retrospectively collected from their medical records, including information on their deaths, if any. Results: Five hundred seventy-two adults were included in the study, and 67 (11.7%) died. The main cause of death was respiratory infections, which occurred in 36 participants [9 (45.0%) before, and 27 (58.7%) after the appearance of COVID-19]. No significant differences were found in the determinants of pre-pandemic and post-pandemic death after adjusting for age and AD, except for an association between the use of psychotropic medication and death in the post-pandemic period (odds ratio: 2.24; 95% confidence interval: 1.04–4.82). Vaccination against COVID-19 showed a marked protective effect against mortality (odds ratio: 0.0002; 95% confidence interval: 6.7e10−6 to 0.004). Conclusions: The appearance of COVID-19 has not impacted the overall trend of increase in mean age of death of adults with DS in our milieu, probably thanks to the very important protective effect of vaccination, which supports prioritising people with DS in future immunisation campaigns. The association between psychotropic medication use and mortality requires further explorationThis work was supported by a grant to Beatriz Sánchez (grant no. 2021b-2088) and Diego Real de Asúa (grant no. 2021a-2069) from the Fondation Jérôme Lejeun

Reserva cognitiva. Propuesta de una nueva hipótesis conceptual

Introducción Actualmente, se observa una falta de consenso en la definición del concepto de reserva cognitiva, los elementos que la conforman y la relación entre ellos, a pesar del notable aumento de los estudios relacionados con ésta. Materiales y método. Se plantea un modelo conceptual multidominio de dos factores: reserva general y reserva específica de dominio. A su vez, la reserva específica de dominio quedaría dividida en cuatro áreas: cognitiva, conductual, emocional y social. Resultados El modelo planteado parece dar una explicación más amplia del constructo, con nuevos elementos de estudio que se deben tener en consideración. Conclusiones Con esta propuesta, se pretende aportar una nueva perspectiva al estudio de la reserva cognitiva y abrir nuevas líneas de investigación tanto a nivel clínico como académico para demostrar su viabilidad.Introduction. Currently, there is a lack of consensus on the definition of the concept of cognitive reserve, the elements that make it up and the relationship between them, despite the notable increase in the number of studies conducted on the subject. Materials and methods. A multi-domain conceptual model with two factors is proposed: general reserve and domain-specific reserve. The domain-specific reserve, in turn, would be divided into four areas: cognitive, behavioural, emotional and social. Results. The proposed model seems to provide a more comprehensive explanation of the construct, with new elements of study to be taken into consideration. Conclusions. This proposal aims to introduce a new perspective into the study of cognitive reserve and to open up new lines of clinical and academic research with the aim of demonstrating its feasibility

Plasmodium ovale malaria acquired in central Spain

3 p.We describe a case of locally acquired Plasmodium ovale malaria in Spain. The patient was a Spanish woman who had never traveled out of Spain and had no other risk factors for malaria. Because patients with malaria may never have visited endemic areas, occasional transmission of malaria to European hosts is a diagnostic and clinical challenge

Plasmodium ovale malaria acquired in central Spain

3 p.We describe a case of locally acquired Plasmodium ovale malaria in Spain. The patient was a Spanish woman who had never traveled out of Spain and had no other risk factors for malaria. Because patients with malaria may never have visited endemic areas, occasional transmission of malaria to European hosts is a diagnostic and clinical challenge

Pharmacological blockade of either cannabinoid CB1 or CB2 receptors prevents both cocaine-induced conditioned locomotion and cocaine-induced reduction of cell proliferation in the hippocampus of adult male rats

Addiction to major drugs of abuse, such as cocaine, has recently been linked to alterations in adult neurogenesis in the hippocampus. The endogenous cannabinoid system modulates this proliferative response as demonstrated by the finding that pharmacological activation/blockade of cannabinoid CB1 and CB2 receptors not only modulates neurogenesis but also modulates cell death in the brain. In the present study, we evaluated whether the endogenous cannabinoid system affects cocaine-induced alterations in cell proliferation. To this end, we examined whether pharmacological blockade of either CB1 (Rimonabant, 3 mg/kg) or CB2 receptors (AM630, 3 mg/kg) would affect cell proliferation (the cells were labeled with BrdU) in the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and the dentate subgranular zone (SGZ). Additionally, we measured cell apoptosis (as monitored by the expression of cleaved caspase-3) and glial activation (by analyzing the expression of GFAP and Iba-1) in the striatum and hippocampus during acute and repeated (4 days) cocaine administration (20 mg/kg). The results showed that acute cocaine exposure decreased the number of BrdU-immunoreactive (ir) cells in the SVZ and SGZ. In contrast, repeated cocaine exposure reduced the number of BrdU-ir cells only in the SVZ. Both acute and repeated cocaine exposure increased the number of cleaved caspase-3-, GFAP- and Iba1-ir cells in the hippocampus, and this effect was counteracted by AM630 or rimonabant, which increased the number of BrdU-, GFAP- and Iba1-ir cells in the hippocampus. These results indicate that the changes in neurogenic, apoptotic and gliotic processes that were produced by repeated cocaine administration were normalized by pharmacological blockade of CB1 and CB2. The restorative effects of cannabinoid receptor blockade on hippocampal cell proliferation were associated with the prevention of the induction of conditioned locomotion but not with the prevention of cocaine-induced sensitization.Fil: Blanco Calvo, Eduardo. Universitat de Lleida; EspañaFil: Rivera, Patricia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Arrabal, Sergio. Universidad de Malaga; EspañaFil: Vargas, Antonio. Universidad de Malaga; EspañaFil: Pavon, Francisco Javier. Universidad de Malaga; EspañaFil: Serrano, Antonia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Castilla Ortega, Estela. Universidad de Malaga; EspañaFil: Galeano, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas (i); ArgentinaFil: Rubio, Leticia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Suaréz, Juan. Universidad de Malaga; EspañaFil: Rodríguez de Fonseca, Fernando. Universidad de Malaga; Españ

Pharmacological blockade of either cannabinoid CB1 or CB2 receptors prevents both cocaine-induced conditioned locomotion and cocaine-induced reduction of cell proliferation in the hippocampus of adult male rats

Addiction to major drugs of abuse, such as cocaine, has recently been linked to alterations in adult neurogenesis in the hippocampus. The endogenous cannabinoid system modulates this proliferative response as demonstrated by the finding that pharmacological activation/blockade of cannabinoid CB1 and CB2 receptors not only modulates neurogenesis but also modulates cell death in the brain. In the present study, we evaluated whether the endogenous cannabinoid system affects cocaine-induced alterations in cell proliferation. To this end, we examined whether pharmacological blockade of either CB1 (Rimonabant, 3 mg/kg) or CB2 receptors (AM630, 3 mg/kg) would affect cell proliferation (the cells were labeled with BrdU) in the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle and the dentate subgranular zone (SGZ). Additionally, we measured cell apoptosis (as monitored by the expression of cleaved caspase-3) and glial activation (by analyzing the expression of GFAP and Iba-1) in the striatum and hippocampus during acute and repeated (4 days) cocaine administration (20 mg/kg). The results showed that acute cocaine exposure decreased the number of BrdU-immunoreactive (ir) cells in the SVZ and SGZ. In contrast, repeated cocaine exposure reduced the number of BrdU-ir cells only in the SVZ. Both acute and repeated cocaine exposure increased the number of cleaved caspase-3-, GFAP- and Iba1-ir cells in the hippocampus, and this effect was counteracted by AM630 or rimonabant, which increased the number of BrdU-, GFAP- and Iba1-ir cells in the hippocampus. These results indicate that the changes in neurogenic, apoptotic and gliotic processes that were produced by repeated cocaine administration were normalized by pharmacological blockade of CB1 and CB2. The restorative effects of cannabinoid receptor blockade on hippocampal cell proliferation were associated with the prevention of the induction of conditioned locomotion but not with the prevention of cocaine-induced sensitization.Fil: Blanco Calvo, Eduardo. Universitat de Lleida; EspañaFil: Rivera, Patricia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Arrabal, Sergio. Universidad de Malaga; EspañaFil: Vargas, Antonio. Universidad de Malaga; EspañaFil: Pavon, Francisco Javier. Universidad de Malaga; EspañaFil: Serrano, Antonia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Castilla Ortega, Estela. Universidad de Malaga; EspañaFil: Galeano, Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Cardiológicas (i); ArgentinaFil: Rubio, Leticia. Universidad de Malaga; EspañaFil: Suaréz, Juan. Universidad de Malaga; EspañaFil: Rodríguez de Fonseca, Fernando. Universidad de Malaga; Españ

Cost-effectiveness of active monitoring versus antidepressants for major depression in primary health care: a 12-month non-randomized controlled trial (INFAP study)

Background Clinical practice guidelines for the treatment of major depressive disorder (MDD) recommend antidepressants for patients with moderate-severe depression and active monitoring for patients with mild-moderate symptoms. The feasibility and efficiency of active monitoring has not been proven conclusively. The aim of this study is to evaluate the cost-effectiveness of active monitoring in comparison to antidepressants for primary care patients with mild-moderate MDD. Methods/Design This is a 12-month follow-up multicenter observational prospective controlled trial. Patients are enrolled in 12 primary care centers in Barcelona (Spain). Eligible patients are adults (≥18 years-old) with a new episode of MDD that sign a written consent to participate. This is a naturalistic study in which general practitioners (GPs) use their professional judgment to allocate patients into active monitoring or antidepressants groups. GPs treat the patients following their clinical criteria. At baseline, GPs complete a questionnaire (sociodemographic/job characteristics, training, attitude towards depression, interest on mental health and participation in communication groups). Patients’ measurements take place at baseline and after six and 12 months. Main outcome measures include severity of depression (PHQ-9), health-related quality of life (EuroQol-5D) and use of healthcare and social care services (Client Service Receipt Inventory). Secondary outcomes include diagnosis of MDD according to DSM-IV diagnostic criteria (SCID-I), disability (WHO-DAS), anxiety (BAI), comorbidities, medication side-effects and beliefs about medicines (BMQ). The analysis will be done according to the intention to treat analysis. Missing data will be imputed using multiple imputation by chained equations. To minimize the bias resulting from the lack of randomization, a propensity score will be used. Incremental effects and costs between groups will be modelled in each of the imputed databases using multivariate generalized linear models and then combined as per Rubin’s rules. Propensity scores will be used to adjust the models. Incremental cost-effectiveness ratios will be calculated by dividing the difference in costs between groups by the difference in effects. To deal with the uncertainty, resampling techniques with bootstrapping will be used and cost-effectiveness planes and cost-effectiveness acceptability curves will be constructed. A series of sensitivity analyses will be performed. Discussion Given the high burden and costs generated by depressive disorder, it is important that general practitioners treat major depression efficiently. Recent evidence has suggested that antidepressants have low benefits for patients with mild to moderate major depression. For such cases of depression, active monitoring exists as a treatment option, but it is not without difficulties for implementation and its effectiveness and efficiency have not been demonstrated conclusively. The results of the study will provide information on which is the most efficient approach to treat patients with mild to moderate major depression in primary care

Options in the surgical treatment of cavemous haemangioma of the rectum

El hemangioma cavernoso difuso del recto es una malformación congénita poco frecuente. de tipo hamartomatoso. Suele manifestarse en forma de rectorragias abundantes. en pacientes jóvenes y habitualmente requiere cirugía. Para evitar la resección abdóminoperineal en estos pacientes, se ha descrito una técnica de tipo «pull-through», que incluye una mucosectomía amplia del recto y una anastomosis colo-anal. Sin embargo. nosotros consideramos que si es posible descartar preoperatoriamente la afectación de otras vísceras pélvicas, es más adecuado realizar de una proctectomía conservadora seguida de anastomosis coloanal. Presentamos un caso en un paciente de 17 años