Avaliação da expressão gênica comparativa dos genes γGCS, GSH2, TRYR e ODC em isolados de Leishmania de pacientescom Leishmaniose Tegumentar Americana

Dissertação apresentada ao Programa de Pós graduação em Biologia Experimental Stricto senso da Universidade Federal de Rondônia, para obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Dr. Ricardo de Godoi Mattos FerreiraA leishmaniose é uma doença de caráter antropozoonótico presente em regiões tropicais e subtropicais. Cerca de 1,3 milhões de novos casos são notificados anualmente em 98 países, com aproximadamente 30 mil mortes por ano. A Leishmaniose tegumentar (LT) apresenta diversas manifestações clínicas, as mais frequentes são a leishmaniose cutânea e a leishmaniose mucosa, provocadas por espécies do gênero Leishmania, dentre elas Leishmania braziliensis, L. guyanensis e L. amazonensis. O tratamento de LT é feito com antimoniais pentavalentes (SbV), porém nos últimos anos tem aumentado o número de casos de resistência ao tratamento. Os genes yGCS, ODC, GSH2 e TRYR codificam proteínas com funções envolvidas no metabolismo da droga. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a expressão gênica comparativa desses genes em cepas de Leishmania de pacientes atendidos no Hospital de Medicina Tropical de Rondônia – CEMETRON. Foram analisadas 22 cepas de L. braziliensis e 15 de L. guyanensis realizadas em ensaios de PCR em tempo real. Foi obtido o perfil da curva de crescimento das duas espécies analisadas para realizar a coleta de RNA nas fases logarítmica tardia e estacionária. A concentração ideal dos iniciadores para os genes e a eficiência de cDNA foram obtidas para padronização da técnica utilizada. O gene ODC apresentou maior expressão entre os genes avaliados e o gene yGCS apresentou a menor expressão. Entre as espécies de Leishmania foi observada variação significativa nos genes yGCS e ODC. Os genes GSH2 e TRYR não apresentaram variação significativa na expressão em nenhuma das variáveis analisadas. Entre as fases logarítmica tardia e a estacionária (de L.b e L.g) não foi observada diferença significativa. Quando comparada a expressão gênica entre cultura e RNA extraído da lesão foi observada variação significativa para os genes yGCS e ODC. Em todas as análises, inclusive no heatmap foi observada variação na expressão gênica intra espécie. A partir dos resultados obtidos, fica reforçada a importância da obtenção de informações clínicas dos pacientes em relação a cura clínica ou falha terapêutica e visando compará-las com dados de expressão gênica dos isolados e os dados de expressão gênica obtidos do RNA extraídos da lesão

Infecção natural por Plasmodium vivax e Plasmodium falciparum em Anopheles spp. (Diptera: Culicidae) capturados nas áreas de influência direta da usina hidrelétrica de Jirau em Rondônia

Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Ricardo de Godoi Mattos Ferreira.Os insetos vetores têm papel importante na disseminação de patógenos emergentes. A família Culicidae tem atraído a atenção da saúde pública por abrigar organismos envolvidos na transmissão de diversas doenças. Vetores como o Culex quinquefasciatus, o Aedes aegypti, e os do gênero Anopheles, são responsáveis pela transmissão de doenças importantes como filariose, dengue e malária, respectivamente. Processos antrópicos como a urbanização, construções e invasão de áreas preservadas, contribuem para a disseminação desses vetores e possivelmente afetam seus criadouros, alterando a dinâmica da transmissão das doenças. Em Rondônia está sendo construída a Usina Hidrelétrica de Jirau no rio Madeira. Medidas de controle são empregadas desde o início da construção visando a não disseminação de doenças, principalmente a malária, e controlando os casos inclusive nas áreas de influência das usinas do rio Madeira. Este trabalho teve como objetivo verificar a infecção natural por Plasmodium vivax e P. falciparum, agentes causadores da malária no Brasil, em espécies de Anopheles capturadas nas áreas de influência direta da Usina de Jirau em Rondônia, bem como comparar a taxa de infecção encontrada entre as espécies estudadas. Os mosquitos coletados foram identificados e encaminhados ao Laboratório de Genética para análise molecular. Foi realizada extração de DNA por NaOH e TrisHCL, amplificação do DNA por PCR e visualização do fragmento por eletroforese. Foram analisados 1872 mosquitos individualmente e destes 78 estavam positivos para Plasmodium spp. apresentando uma taxa de infecção de 4,2%. A porcentagem de infecção natural por espécie de parasita foi de 2,9% para P. vivax, 1% para P. falciparum e 0,3% para infecção mista. Dos positivos, 70,5% eram P. vivax, 23,1% P. falciparum e 6,4% infecção mista. As espécies de anofelinos encontradas parasitadas foram An. darlingi, An. triannulatus, An. nuneztovari, An. konderi e An. braziliensis, seguindo a ordem das espécies de Anopheles mais frequentes. Não houve diferença significativa entre as taxas de infecção encontradas nas espécies de Anopheles infectadas. É importante a detecção de outras espécies, além do An. darlingi, infectadas, o que mostra que outras espécies apresentam competência vetorial semelhante à do An. darlingi, principal vetor da bacia Amazônica, e que também podem se tornar potenciais vetores. A detecção de infecção natural é um dos principais parâmetros analisados no controle e monitoramento da malária, pois identifica as espécies de Anopheles e Plasmodium circulantes na região. O estudo fez parte de um relatório de acompanhamento da construção da Usina de Jirau realizado pelo Laboratório de Entomologia do IPEPATRO e FIOCRUZ Rondônia, com o objetivo de avaliar a dinâmica da transmissão e fornecer suporte entomológico na continuidade da implementação de medidas de controle da malária na região

Busca de fatores genéticos associados á leishmaniose mucosa em escala genômica utilizado microarranjos de dna

Dissertação de mestrado apresentada ao programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental, do Núcleo de Saúde, da Universidade Federal de Rondônia – UNIR, como requisito para obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Dr. Ricardo de Godoi Mattos FerreiraA leishmaniose tegumentar é uma doença infecciosa causada por parasitos protozoários do gênero Leishmania, sendo considerada uma doença de difícil entendimento, podendo gerar uma diversidade de aspectos clínicos. A distribuição dessa doença a tornou um problema de saúde pública mundial afetando diversos países. A leishmaniose tegumentar tem amplo espectro clínico variando de lesões de pele, únicas ou múltiplas, localizadas principalmente em áreas descobertas do corpo, à lesões mucosas, que são consideradas uma evolução clínica da doença a partir das lesões cutâneas. Os fatores que contribuem para o agravamento da lesão cutânea inicial parecem dependentes da espécie do parasita envolvida e de fatores genéticos e imunológicos do hospedeiro. O presente trabalho propôs avaliar aspectos genéticos do hospedeiro associados ao fenótipo clínico da leishmaniose mucosa, pela busca de polimorfismos (Single Nucleotide Polymorphism - SNP) que possam estar relacionados com o agravamento da doença, utilizando uma plataforma robusta, com capacidade de analisar simultaneamente 262 mil sítios distribuídos por todo o genoma humano. O estudo é do tipo caso – controle, com um grupo de 30 amostras de pacientes com lesão mucosa (caso) e um grupo com 29 amostras de pacientes com lesão cutânea (controle). Foi realizada a leitura de 69 chips e, 59 chips foram considerados aptos para prosseguir com a análise tendo como base as métricas QC. Desses, 30 chips foram de amostras provenientes de pacientes com lesão mucosa e, 29 chips de amostras provenientes de pacientes com lesão cutânea. Os testes de associação entre os SNPs e os fenótipos foram realizados utilizando o pacote PLINK. Para observar os resultados de maneira global, foi utilizado o gráfico de Manhattan Plot. Na análise utilizando a abordagem GWAS não foram observadas associações significantes considerando nível de significância determinado pela aplicação da correção de Bonferroni. Considerando que a correção de Bonferroni é reconhecidamente conservadora, foram analisados os 15 SNPs com maior indicação de associação com o fenótipo abordado. Desses, foi possível listar três possíveis genes candidatos relacionados com a evolução da leishmaniose tegumentar (C20orf85, GRM8 e PCLO). No cromossomo 4, foram identificados três SNPs em posições bem próximas e, numa região adjacente a esses foram descritos quatro genes relacionados com a resposta imune em infecções pelo parasito Leishmania, tornando esses polimorfismos sugestões para trabalhos futuros

Inability to work : analysis of sickness benefits granted in the State of Rondônia

Trata-se de um estudo epidemiológico descritivo com objetivo de estimar a prevalência e a duração dos benefícios auxílio-doença, concedidos pelo Instituto Nacional de Seguro Social, bem como dos fatores associados à incapacidade para o trabalho entre os trabalhadores empregados em Rondônia em 2008. As prevalências foram apresentadas por 10.000 trabalhadores e estratificadas por sexo, idade, diagnóstico, atividade econômica, espécie e duração dos benefícios. Os homens apresentaram maiores prevalência e duração dos benefícios. Os benefícios previdenciários mostraram-se 2,5 mais prevalentes do que os acidentários e ambos aumentaram com a idade. Os acidentários foram mais prevalentes na faixa etária de 50-59 anos. silvicultura: construção civil e locação de mão de obra: apresentaram as maiores prevalências. Os principais grupos diagnósticos foram lesões; doenças do sistema osteomuscular e doenças do aparelho digestivo: A duração dos benefícios auxílio-doença foi maior entre homens, com > 40 anos e na espécie previdenciária. A atividade econômica é um importante fator de risco para a incapacidade para o trabalho, e precisa ser mais bem explorada como tal visando melhorar a prevenção de doenças e diminuir o impacto na saúde dos trabalhadores decorrentes das condições ambientais e dos processos de trabalho.This is a descriptive epidemiological study aiming to o estimate the prevalence and duration of sickness benefits granted by the Brazilian Social Security Institute, as well as the clinical causes of inability to work among employees in Rondonia in 2008. The prevalence was submitted by 10,000 workers and stratified by sex, age, diagnosis, economic activity, and type and duration of benefits. Men had a higher prevalence and duration of benefits. Social security benefits were found to be 2,5 times more prevalent than accident benefits and both increased with age. Labor accidents were more prevalent in the age group ranging between 50-59 years, and Forestry, construction and manpower leasing: had the highest prevalence. The main diagnostic groups were injuries, musculoskeletal system disorders and digestive diseases. The duration of the sickness benefits was higher among men, =40 years and in the social security category. The economic activity is an important risk factor for Inability to work, and it needs to be further explored in order to improve sickness prevention and reduce the impact on workers' health arising from environmental conditions and working processes

Prestaciones sociales por enfermedad, concedidas por el Seguro Social, a los empleados en el sector de la carne y pescado en Brasil durante el año 2008

Este estudo objetivou identificar fatores associados à incidência de concessão de benefícios entre trabalhadores na atividade de carne e pescado no Brasil. Foram estudados os benefícios auxílio-doença concedidos pela Previdência Social aos empregados em carne e pescado no Brasil em 2008. As incidências por 10 mil vínculos empregatícios foram estratificadas por sexo, idade, diagnóstico, atividade econômica, unidade federada, espécie e duração dos benefícios auxílio-doença. Foram concedidos 31.913 benefícios auxílio-doença, com incidência de 788,7. O ramo abate de bovinos, equinos, ovinos e caprinos apresentou a maior incidência (1.223,2); o pescado, a maior duração (61 dias) de benefícios auxílio-doença. As mulheres apresentaram maior incidência, enquanto os homens, maior duração de benefícios auxílio-doença. Os grupos Lesões, doenças osteomusculares e transtornos mentais representaram 67,2% dos benefícios auxílio-doença. Os diagnósticos mais incidentes foram as dorsopatias, hemorragia no início da gravidez e episódios depressivos. O ramo de atividade, sexo, e a idade representaram importantes fatores associados à incidência de benefícios auxílio-doença, sugerindo uma precarização das condições/relações de trabalho.This study aims to analyze factors associated with sick leave rates among workers in the meat, fish, and seafood industries in Brazil. The study analyzed all sick leave benefits granted by the country's social security system to workers in these industries in 2008. Incidence of sick leave per 10 thousand jobs was stratified by sex, age, diagnosis, job position, State, and nature and length of benefits. The study analyzed 31,913 sick leaves, with an annual incidence of 788.7. Meat processing and packaging showed the highest incidence, and fish and seafood processing and packaging showed the longest mean length of sick leave. Women showed a higher sick leave incidence, while men received longer average sick leaves. Injuries, musculoskeletal disorders, and mental disorders accounted for 67.2% of sick leaves. The most common diagnoses were lower back pain, first-trimester bleeding in pregnancy, and depression. The data suggest poor job protection and adverse working conditions in these industries.El objetivo del presente estudio fue identificar factores asociados a la incidencia de concesión prestaciones sociales por enfermedad a los trabajadores del sector cárnico y pesquero en Brasil. Se estudiaron las prestaciones sociales por enfermedad, concedidas por el Seguro Social, a los empleados de los sectores anteriormente mencionados durante el año 2008. Las incidencias por cada 10 mil empleados fueron estratificadas por sexo, edad, diagnóstico, actividad económica, departamento, tipo y duración de las prestaciones por enfermedad. Se concedieron 31.913 prestaciones sociales por enfermedad, con una incidencia de 788,7. El colectivo perteneciente a mataderos de ganado vacuno, equino, bovino y caprino presentó la mayor incidencia (1.223,2) y el de pesca la mayor duración (61 días de prestaciones sociales por enfermedad). Las mujeres presentaron una mayor incidencia, mientras los hombres una mayor duración de las prestaciones por enfermedad. Los grupos de lesiones, enfermedades osteomusculares y trastornos mentales representaron un 67,2% de los beneficios de auxilio por enfermedad. Los diagnósticos más incidentes fueron las dorsopatías, hemorragias en el principio de la gestación y episodios depresivos, según las ramas de la actividad ejercida, el sexo y la edad son importantes factores, sugiriendo precariedad en las condiciones de trabajo

Correlation between presence of Leishmania RNA virus 1 and clinical characteristics of nasal mucosal leishmaniosis

AbstractIntroductionMucosal leishmaniosis (ML) is a severe clinical form of leishmaniosis. Complex factors related to the parasite and the host are attributed to the development of mucosal lesions. Leishmania RNA virus 1 (LRV1) can disrupt immune response, and may be the main determinant of severity of the disease; it should be investigated.ObjectiveTo study the existence of clinical differences between patients with ML with endosymbiosis by LRV1 and. those without it.MethodsA cross-sectional cohort study with clinical evaluation, polymerase chain reaction (PCR) detection of Leishmania, species classification, and search of LRV1 was performed. Only patients with confirmed diagnosis of ML by positive PCR and with nasal mucosa injuries were included in this analysis.ResultsOut of 37 patients, 30 (81.1%) were diagnosed with Leishmania braziliensis, five (13.5%) with Leishmania guyanensis, and two (5.4%) with mixed infection of L. braziliensis and L. guyanensis. LVR1 virus was present in 26 (70.3%) of the cases.ConclusionCorrelation between clinical phenotype and presence of LRV1 was not observed, although the frequency of the virus is two-fold higher in mucosal lesions than that found in the literature on skin lesions in the same geographical area

Asymptomatic infection with Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax in the Brazilian Amazon Basin: to treat or not to treat?

In this study, we determined whether the treatment of asymptomatic parasites carriers (APCs), which are frequently found in the riverside localities of the Brazilian Amazon that are highly endemic for malaria, would decrease the local malaria incidence by decreasing the overall pool of parasites available to infect mosquitoes. In one village, the treatment of the 19 Plasmodium falciparum-infected APCs identified among the 270 residents led to a clear reduction (Z = -2.39, p = 0.017) in the incidence of clinical cases, suggesting that treatment of APCs is useful for controlling falciparum malaria. For vivax malaria, 120 APCs were identified among the 716 residents living in five villages. Comparing the monthly incidence of vivax malaria in two villages where the APCs were treated with the incidence in two villages where APCs were not treated yielded contradictory results and no clear differences in the incidence were observed (Z = -0.09, p = 0.933). Interestingly, a follow-up study showed that the frequency of clinical relapse in both the treated and untreated APCs was similar to the frequency seen in patients treated for primary clinical infections, thus indicating that vivax clinical immunity in the population is not species specific but only strain specific