Badania histochemiczne niektórych enzymów oddechowych w mięśniowej fazie włośnicy

Continuing our earlier investigations that demonstrated changes in the respiration of the muscular tissue in T. spiralis-infected animals, the localization and activity of some dehydrogenases, NAD-and NADP-tetrazolium reductases in the muscles and liver of the mouse were assessed histochemically at various intervals of time after infection dose of 50 or 500 larvae. The changes under observation failed to show a clearcut dependence on the inoculum size and took place in the immediate neighbourhood of the parasite. Only in the liver could more general changes be postulated in the presence of increased alfa-glycerophosphate and glucose-6-phosphate dehydrogenases by the 14-17 day of infection ; isocitrate, succinate, beta-hydroxybutyrate dehydrogenases and NAD-tetrazolium reductase being very active both in infected and control animals. In the muscular tissue, the most pronounced changes were found in fibres directly attacked by larvae. From the 13th-14th day of infection an increase was seen in the activity of isocitrate, lactate, glucose-6-phosphate dehydrogenases and NAD reductase, followed by its decline 22-30 days p.i., i.e. in the period of cyst formation. The activity of malate dehydrogenase tended to decrease at the time of intense changes and only 21 days p.i. did it show an increase that was also found in the substance contained between the larval body and the cyst. The intensity of staining, size of the granules and diffusive type of the reaction seem to indicate the presence of disturbances in the respiration process of infected fibres and a mitochondrial damage. The larval body mostly contained a greater enzymatic activity than the surrounding tissues.Nawiązując do naszych wcześniejszych badań biochemicznych, wykazujących zmiany w oddychaniu tkanki mięśniowej zwierząt zarażonych włośniami, oznaczono histochemicznie lokalizację i aktywność niektórych dehydrogenaz oraz NAD i NADP-tetrazolium reduktaz w mięśniach oraz wątrobie myszy w różnych okresach po zarażeniu dawką 50 lub 500 larw. Obserwowane zmiany nie różniły się wyraźnie zależnie od wysokości dawki zakaźnej, występowały w najbliższym otoczeniu pasożyta. Jedynie w wątrobie można by mówić o bardziej ogólnych zmianach - w dniach 14-17 p.z. wzrosła aktywność dehydrogenaz alfa-glicerofosforanu i glikozo-6-fosforanu. Dehydrogenazy bowiem kwasu izocytrynowego, bursztynowego, mlekowego, beta-hydroksymasłowego oraz NAD-tetrazolium reduktaza były bardzo aktywne u zwierząt zarażonych i kontrolnych. W tkance mięśniowej najwyraźniejsze zmiany dotyczyły włókien bezpośrednio zaatakowanych przez larwy. Od 13-14 dnia p.z. wzrastała aktywność dehydrogenaz kwasów izocytrynowego, mlekowego, glikozo-6-fosforanu i NAD-reduktazy. Ich aktywność obniżała się po 22-30 dniach p.z., w okresie formowania się torebek. Aktywność zaś dehydrogenazy kwasu jabłkowego była obniżona w czasie intensywnych przemian i dopiero po 21 dniu następował jej wzrost, który stwierdzało się również w substancji zawartej między larwą a torebką. Biorąc pod uwagę nie tylko intensywność zabarwienia, ale i wielkość ziarn oraz charakter dyfuzyjny reakcji, można sądzić o zaburzeniach w procesie oddychania zarażonych włókien oraz o uszkodzeniu mitochondriów. W larwach pasożyta była na ogól większa aktywność badanych enzymów aniżeli w otaczających je tkankach

Badania histochemiczne na fosforylazę oraz substancje pas dodatnie w mięśniowej fazie włośnicy

Histochemical procedures (after Takeuchi and Kuriaki, modified by Godlewski) were applied to study the activity of "a", "a" + "b" phosphorylase and phosphorylase-beta-kinase in the muscular tissue of T. spiralis infected mice, examined at various post-infection periods every 2 days between the 5th and 36th day and then with decreasing frequency up to 4 months after infection. Additional studies involved PAS-positive substances and control tests for glycogen. T. spiralis infection was found to affect distinctly the behaviour of phosphorylase. The phosphorylase "a" disappears from the infected muscles and in the neighbouring ones its activity is considerably reduced as compared with the control. After cyst formation, the substance contained between the larval body and the cyst shows again the presence of phosphorylase which tends to increase and its staining properties indicate the synthesis of amylosaccharides. In the larval body (muscular layer) the phosphorylase appears by the 17th day, increases up to the 36th day to decline in later phases (e.g. 4 months after infection). The content of the whole phosphorylase ("a" + "b" + beta-kinase) is increased in noninfected fibres of experimental animals (at 11-25 days of infection) this meaning that there the "a" form passes into the inert "b" one. The decrease in the phosphorylase "a" activity or its lack might indicate augmentation in glycogen reserves of the muscular tissue in infected animals, as postulated by other authors, but the control tests for PAS-positive substances demonstrate that in the infected fibres the increase is true not only for glycogen but also for other polysaccharides. Like in the larval body, the glycogen content is increased exclusively in the muscular layer, whereas in the stichosome cells and in the wall of the alimentary tract glycogen was found to accumulate along with other PAS-positive substances, that are likely to te neutral mucopolysaccharides.W tkance mięśniowej myszy zarażonych T. spiralis (badanej w różnych okresach po zarażeniu, między 5 a 36 dniem p.z. co drugi dzień, potem rzadziej, aż do 4 mies. p.z.) oraz myszy zdrowych, kontrolnych, śledzono histochemicznie (metody Takeuchi i Kuriaki w modyfikacji Godlewskiego) aktywność fosforylazy "a", "a" + "b" oraz fosforylazo-beta-kinazy. Ponadto badano substancje PAS-dodatnie wraz z odczynami kontrolnymi na glikogen. Okazało się, że zarażenie T. spirafis wpływa wyraźnie na zachowanie się fosforylazy. Fosforylaza "a" ginie zupełnie w włóknach zarażonych i również w włóknach sąsiadujących z nimi aktywność tego enzymu jest słabsza w porównaniu z kontrolą. Po wytworzeniu się torebki w substancji zawartej między larwą a ścianą torebki pojawia się znów fosforylaza, dając z czasem odczyn coraz intensywniejszy, którego zabarwienie świadczy o syntezie amylocukru. W larwach (w warstwie mięśniowej) fosforylaza pojawia się w 17 dniu p.z., jej aktywność wzrasta do 36 dnia p.z., ale w późniejszych okresach (np. po 4 mies. p.z.) widoczny jest spadek aktywności. Zawartość fosforylazy całkowitej ( "a" + "b" oraz fosforylazo-beta-kinazy), zwiększa się w włóknach nie zarażonych pasożytem u zwierząt doświadczalnych (w 11-25 dniu p.z.), co świadczy, że fosforylaza "a" przechodzi tam w postać nieczynną "b". Spadek aktywności fosforylazy "a" lub jej brak mogą świadczyć o zwiększaniu się zapasów glikogenu w tkance mięśniowej zwierząt zarażonych, co stwierdzali już inni autorzy. Przeprowadzone jednak reakcje kontrolne na substancje PAS-dodatnie sugerują, że w zarażonych włóknach zwiększają się nie tylko ilości glikogenu, ale i innych wielocukrów. Podobnie i w larwie glikogen wzrasta tylko w warstwie mięśniowej, natomiast w komórkach stichosomu i ściany przewodu pokarmowego gromadzą się prócz glikogenu inne substancje PAS-dodatnie, może mukopolisacharydy obojętne