AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DE Sporothrix spp. EM SOLO DE ÁREA HIPERENDÊMICA PARA ESPOROTRICOSE NO EXTREMO SUL DO BRASIL

O aumento de casos de esporotricose zoonótica tornou-se um problema de saúde pública em áreas hiperendêmicas para a doença em felinos. O envolvimento dos gatos domésticos nesta transmissão e o contato contínuo destes animais com o solo sugerem que o ambiente possa ser uma importante fonte e/ou reservatório de fungos Sporothrix spp. Assim, este estudo objetivou avaliar a presença de fungos do complexo Sporothrix em amostras de solo provenientes de locais de acesso de felinos infectados no sul do Brasil. Foram coletadas amostras de solo de residências com felinos com esporotricose, de locais próximos a estas residências e também de locais públicos, totalizando 101 amostras. Estas foram processadas pela técnica de plaqueamento direto e incubadas a 25°C por até 15 dias. Dezessete amostras foram paralelamente submetidas a extração de DNA (kitNORGEN BIOTEK CORP(r)) e técnica de PCR espécie-específico e Nested-PCR. Embora em nenhuma amostra avaliada tenha sido detectada a presença de Sporothrix spp., seja por cultivo ou por biologia molecular, este estudo não descarta o papel do ambiente na tríade do processo infeccioso (solo - animal - humano), sendo necessários outros estudos ampliando área de abrangência, volume, tipo e método de coleta das amostras, bem como técnicas de detecção.Palavras-chave: Ambiente; geofílico; S. brasiliensis; S. schenckii

Avaliação do uso da resazurina em teste de suscetibilidade in vitro frente a Sporothrix brasiliensis

A técnica de microdiluição em caldo, que permite determinar a concentração inibitória mínima (CIM) dos fármacos frente aos microrganismos, é considerada padrão ouro para avaliação do perfil de suscetibilidade fúngica in vitro. Considerando que a leitura dos resultados é realizada pela visualização do crescimento fúngico, e que a utilização de indicadores de crescimento microbiano poderia otimizar essa leitura, o estudo teve como objetivo avaliar o uso da resazurina como indicador do crescimento de Sporotrhix brasiliensis em testes de microdiluição em caldo. Cinco isolados clínicos (nas fases leveduriforme e filamentosa) foram testados frente ao itraconazol (ITC – concentrações de 0,0313 a 16 µg/mL) a partir da técnica de microdiluição em caldo, utilizando a resazurina nas concentrações de 0,01% e 0,002%. A leitura dos resultados foi realizada após 24, 48 e 72 horas de incubação, e a CIM dos poços com resazurina foi considerada como sendo a menor concentração sem modificação na coloração, enquanto que a CIM do controle, foi considerada a menor concentração de fármaco capaz de inibir o crescimento fúngico. Os resultados da mudança da cor da resazurina foram comparados com os resultados sem acréscimo de resazurina. A CIM do ITC na microdiluição clássica frente aos isolados testados variou de 0,0625 a 1 µg/mL, porém, com o uso da resazurina como indicador de crescimento fúngico, independente da concentração testada, a CIM foi ≤0,0625 µg/mL. O estudo evidencia que a resazurina não é eficaz como indicador de crescimento de S. brasiliensis visto que não modificou a coloração do meio de cultivo, mesmo na presença visível de crescimento fúngico, sendo portanto contra indicada para uso em testes de suscetibilidade in vitro frente a este microrganismo

Initial Results of the International Efforts in Screening New Agents against Candida auris

This article belongs to the Special Issue Biology, Immunology, Epidemiology, and Therapy of Fungal Infections: A Themed Issue Dedicated to Professor David A. Stevens.Background: Candida auris is an emergent fungal pathogen and a global concern, mostly due to its resistance to many currently available antifungal drugs. Objective: Thus, in response to this challenge, we evaluated the in vitro activity of potential new drugs, diphenyl diselenide (PhSe)2 and nikkomycin Z (nikZ), alone and in association with currently available antifungals (azoles, echinocandins, and polyenes) against Candida auris. Methods: Clinical isolates of C. auris were tested in vitro. (PhSe)2 and nikZ activities were tested alone and in combination with amphotericin B, fluconazole, or the echinocandins, micafungin and caspofungin. Results: (PhSe)2 alone was unable to inhibit C. auris, and antagonism or indifferent effects were observed in the combination of this compound with the antifungals tested. NikZ appeared not active alone either, but frequently acted cooperatively with conventional antifungals. Conclusion: Our data show that (PhSe)2 appears to not have a good potential to be a candidate in the development of new drugs to treat C. auris, but that nikZ is worthy of further study.his work was accomplished with support from the Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Brazil, within the scope of the Capes-PrInt Program—Financing Code 001info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Anti-Aspergillus fumigatus IgG in patients with bronchiectasis and its relationship with clinical outcome

Aspergillosis is a mycosis, most commonly afecting the airways. This mycosis can worsen the clinical condition of patients with concurrent lung diseases. We assayed for the presence of serum anti-A. fumigatus IgG in bronchiectasis patients from a tertiary hospital in south Brazil and evaluated the relationship with clinical outcome. Thirty-one patients with bronchiec tasis, without cystic fbrosis, were included. Clinical and epidemiological data were collected from all participants. Positive serological tests were detected in 13% (4/31) of the patients. The mortality rate for the year following the assay was, in the seropositive group, 75% (3/4), whereas in the seronegative group, 15% (4/27). An illustrative case is also shown and discussed. Our study highlights the diagnostic challenge and the possible impact of Aspergillus infection on these patients, indicating the necessity of more and larger investigations in the feldinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

Desconhecimento de profissionais e ações de extensão quanto à esporotricose no extremo Sul do Brasil

Atualmente o aumento crescente e alarmante de casos de esporotricose na região Sul do Rio Grande do Sul (RS) acarreta um grave problema para a saúde pública local. Nesta linha, estudos que visem o conhecimento sobre a doença nesta região tornam-se de extrema importância para a compreensão do panorama epidemiológico. Tendo isto em vista, o estudo teve como objetivo avaliar o conhecimento de profissionais da saúde sobre a esporotricose em área hiperendêmica e relatar as atividades de extensão que estão sendo realizadas neste âmbito. Foram aplicados questionários semi-estruturados a profissionais de saúde humana, de dois municípios do sul do RS, totalizando 91 entrevistados. Apesar da alta incidência da doença na região, 26% dos profissionais não conheciam a doença, e cerca de 40% apontaram erroneamente ou desconheciam o agente etiológico (38%) e a principal apresentação clínica da esporotricose (45%). Considerando a necessidade da suspeição clínica para o diagnóstico e correto tratamento da doença, ações de capacitação foram realizadas abrangendo profissionais da saúde humana e animal. Levando em consideração a alta endemicidade da doença na região, faz-se necessária uma continuidade dessas ações de extensão, com intuito de conscientização dos profissionais e da população quanto ao grave cenário atual da esporotricose, buscando frear o atual aumento do número de casos da doença nesta região

<i>Sporothrix brasiliensis</i>: Epidemiology, Therapy, and Recent Developments

Sporotrichosis caused by Sporothrix brasiliensis is an emergent mycosis that is now a worldwide concern. One important step to sporotrichosis control is its correct treatment. However, limitations abound; thus, new antifungals, mainly focused on S. brasiliensis, are urgently needed. We performed a systematic review (following the PRISMA guideline) focused on (1) the global distribution of human and animal sporotrichosis by S. brasiliensis, especially outside of Brazil; (2) appraising therapies tested against this pathogen. We identified sporotrichosis caused by S. brasiliensis reported in five countries (Paraguay, Chile, Argentina, the United Kingdom, and the United States) in addition to Brazil, occurring on three continents, highlighting the epidemiological scenario in Argentina with an important increase in reported cases in recent years. Regarding the antifungal activity of drugs, 25 articles described the in vitro action of 20 unique chemicals and eight repurposed drugs against S. brasiliensis. Only five studies reported in vivo activity against S. brasiliensis (five drugs) using invertebrate and vertebrate models. Sporotrichosis caused by S. brasiliensis has a global impact and it is no longer specifically a Brazilian problem. We review the need for understanding the disease epidemiology, education of clinicians and of the populace, organization of health care delivery to respond to a spreading epidemic, and research on therapy for sporotrichosis

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF Aspergillus spp. FROM THE WATER USED FOR REHABILITATION OF MAGELLANIC PENGUINS

Aspergillosis is the main cause of mortality in captivity penguins. The infection occurs mainly by conidia inhalation of the Aspergillus genus, however, the fungus can also be dispersed by water. Therefore, this study aimed to evaluate water quality of the pool where the rehabilitated penguins remain at Centro de Recuperação de Animais Marinhos in Rio Grande city, Brazil, searching for the presence of the fungus Aspergillus spp. Water samples were collected weekly during a ten-month period and processed within six hours, applying the technique of filtrating membrane, with incubation at 25 ºC and 37 ºC during seven days. Of the forty samples analyzed, thirty-two were positive for the presence of Aspergillus genus, from these 60% correspond to A. fumigatus. Some variables significantly interfered on the isolation of Aspergillus genus and/or Aspergillus fumigatus specie, such as incubation temperature, seasonality and population density. This study showed Aspergillus spp. is present in the water, being one of the possible sources of infections for penguins in rehabilitation

Aspergilose pulmonar crónica: os desafios para o diagnóstico e aplicabilidade de ferramentas auxiliares - relato de caso

Abstract publicado em: Braz J Infect Dis. 2021 Jan;25(S1):101078. doi:10.1016/j.bjid.2020.101446.Introdução: Estima‐se que anualmente 3 milhões de pessoas em todo o mundo desenvolvam aspergilose pulmonar crônica (CPA), no entanto, seu diagnóstico é desafiador. Objetivo: Relatar o caso de um paciente com repetidos isolamentos de A. fumigatus em amostras respiratórias desde 2013, e diagnóstico de CPA confirmado somente em 2019. Metodologia: Homem, 73 anos, diagnóstico de HIV em 2000 (desde 2010 supressão virológica), ex‐usuário de drogas, tabaco e álcool (abstêmio desde 2008), timoma em 2002, com ressecção cirúrgica. Em 2006 e 2009, apresentou infecção por Mycobacterium avium. Desde 2010, em uso de corticóide inalatório e β2‐agonista para DPOC, infecções respiratórias de repetição e deterioração progressiva de parênquima pulmonar em exames de imagem. Realizadas cerca de 10 investigações para micobacteriose, após tratamento, todas negativas. Em 2013 e 2015, A. fumigatus foi isolado de escarro e LBA, respectivamente. Interpretado como colonização, não houve tratamento antifúngico em ambas ocasiões. Em 2018, A. fumigatus foi novamente isolado de escarro, sendo realizada investigação sorológica, que permitiu o diagnóstico por detecção de anticorpos (IDGA ‐ IMMY®; e ELISA IgG Aspergillus Bio‐Rad®) e antígeno (LFA Aspergillus GM, IMMY®). Paciente não tolerou a terapia com anfo B, recebendo itraconazol (ITC) (200 mg; 12/12 h). Após 6 meses de tratamento, teve melhora clínica e estabilização do quadro radiológico; e IDGA negativou, sendo indicada manutenção do ITC por mais 6 meses. A análise genotípica pela técnica de microssatélites (alto poder discriminatório: 0,9968), comprovou que três isolados de A. fumigatus obtidos em diferentes momentos eram a mesma estirpe. Discussão/Conclusão: O diagnóstico da CPA é um desafio pela dificuldade em interpretar o isolamento de A. fumigatus de amostra respiratória, podendo ser contaminação, colonização ou, de fato, uma infecção ativa. Nosso caso ilustra este contexto, no qual esse diagnóstico foi considerado somente após diversos isolamentos fúngicos. O fato de tratar‐se de mesma cepa fúngica isolada nos diferentes anos, sugere a associação deste agente com a deterioração progressiva do parênquima pulmonar; ou ainda uma colonização prévia que culminou com progressão para doença ativa após danos por outras etiologias e/ou uso de corticóide. Em ambos os casos, cabe ressaltar a importância de investigar um paciente com comprometimento pulmonar crônico cujas amostras respiratórias resultem em isolamento de A. fumigatus.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Diphenyl diselenide and its interaction with antifungals against Aspergillus spp

Given the few antifungal classes available to treat aspergillosis, this study aimed to evaluate the in vitro antifungal activity of diphenyl diselenide (PhSe)2 alone and in combination with classical antifungals against Aspergillus spp., and its in vivo activity in a systemic experimental aspergillosis model. We performed in vitro broth microdilution assay of (PhSe)2 against 32 Aspergillus isolates; and a checkboard assay to test the interaction of this compound with itraconazole (ITC), voriconazole (VRC), amphotericin B (AMB), and caspofungin (CAS), against nine Aspergillus isolates. An experimental model of invasive aspergillosis in mice was studied, and survival curves were compared between an untreated group and groups treated with 100 mg/kg ITC, or (PhSe)2 in different dosages (10 mg/kg, 50 mg/kg and 100 mg/kg). All Aspergillus non-fumigatus and 50% of A. fumigatus were inhibited by (PhSe)2 in concentrations ≤ 64 µg/ml, with significant differences in MICs between the sections. Synergism or additive effect in the in vitro (PhSe)2 interaction with VRC and CAS was observed against the majority of isolates, and with ITC against the non-fumigatus strains. In addition to the inhibitory interaction, (PhSe)2 was able to add a fungicidal effect to CAS. Survival curves from the systemic experimental aspergillosis model demonstrated that the inoculum caused an acute and lethal infection in mice, and no treatment applied significantly prolonged survival over that of the control group. The results highlight the promising activity of (PhSe)2 against Aspergillus species, but more in vivo studies are needed to determine its potential applicability in aspergillosis treatment.Lay summary: The activity of diphenyl diselenide (PhSe)2 alone and in combination with itraconazole, voriconazole, and caspofungin, is described against three of the most pathogenic Aspergillus sections. (PhSe)2 may prove useful in therapy of infection in future; further study is required.This study was supported by the International Cooperation Program financed by Brazilian Federal Agency for Support and Evaluation of Graduate Education within the Ministry of Education of Brazil (CAPES), under the Capes-Print Program and PDSE Program - Finance Code 001.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Molecular epidemiology of aspergillosis in Magellanic penguins and susceptibility patterns of clinical isolates

Aspergillus section Fumigati is reported in up to 99% of aspergillosis cases in penguins. So far, no data regarding molecular epidemiology and azole resistance are available for A. fumigatus isolates collected from Magellanic penguins. The aim of this work was to perform molecular identification of Aspergillus section Fumigati at species level, to genotype those isolates using microsatellite markers, to evaluate the in vitro susceptibility patterns of A. fumigatus sensu stricto, and to characterize the cyp51A gene in clinical A. fumigatus strains isolated from Magellanic penguins with proven aspergillosis. All 34 isolates included in the study were identified as A. fumigatus sensu stricto. Analyzing the genetic diversity of the isolates of A. fumigatus sensu stricto, we identified two possible outbreaks in the rehabilitation center and we also observed the maintenance of clonal strains through the years. One A. fumigatus sensu stricto isolate was resistant to posaconazole, but the mutations found in the cyp51A gene of this isolate have not been described as conferring phenotypic resistance, suggesting that other mechanisms of resistance could be involved in the resistance of this isolate. With this study, we were able to understand the molecular diversity of Aspergillus fumigatus isolates collected from Magellanic penguins, to characterize them and to associate them with the described global population of Aspergillus fumigatus.Plain Language Summary: A. fumigatus sensu stricto is of great importance in penguins’ aspergillosis. We could identify two outbreaks in the rehabilitation center and the maintenance of clonal strains through the years. Regarding antifungal prophylaxis, it may proceed, but preferably with surveillance for azole resistance.This study was supported by the International Cooperation Program financed by the Brazilian Federal Agency for Support and Evaluation of Graduate Education within the Ministry of Education of Brazil (CAPES), under the PDSE Program - Finance Code 001.info:eu-repo/semantics/publishedVersio