Sequenciamento parcial do gene Citocromo C oxidase (COI) para determinação de espécies de morcegos enviados para diagnóstico de raiva no Instituto Pasteur

Os morcegos são mamíferos de grande diversidade, amplamente distribuídos no mundo. Apesar da importância desses animais na manutenção dos ecossistemas, estes também representam uma preocupação na saúde pública, uma vez que atuam como reservatórios ou hospedeiros de diferentes patógenos, principalmente vírus. A identificação das espécies de morcegos é essencial para melhor compreensão da origem e da epidemiologia de diversas doenças. Além disso, o entendimento sobre a interação vírus/hospedeiro e o papel dos morcegos na disseminação das doenças é essencial para a manutenção da diversidade e consequente conservação desses animais, permitindo assim, o controle racional dos patógenos albergados por estes. Desta forma, é imprescindível realizar a identificação correta das espécies de morcegos recebidas nos laboratórios, a fim de implantar medidas adequadas de vigilância. Neste sentido, este estudo teve como objetivo identificar geneticamente as espécies de morcegos enviados para diagnóstico de raiva no Instituto Pasteur através do sequenciamento genético parcial do gene citocromo C oxidase subunidade I (COI). Para este estudo foram selecionadas 127 amostras de pulmão de morcegos negativos para raiva obtidos em 2015. As amostras foram submetidas a extração de DNA e PCR tendo como alvo o COI e sequenciamento genético. Como resultado, foram identificadas oito espécies: Artibeus lituratus, Cynomops planirostris, Eumops glaucinus, Glossophaga soricina, Lasiurus ega, Molossus molossus, Molossus rufus e Myotis riparius, distribuídas em três famílias (Phyllostomidae, Molossidae e Vespertilionidae) comumente encontradas no Brasil. O sequenciamento parcial do gene COI foi eficaz na identificação das espécies de quirópteros podendo ser uma ferramenta auxiliar na identificação morfológica e facilmente implantada em laboratórios de biologia molecular

Diagnosis of rabies and eastern and western equine viral encephalitides in equids by multiplex Hemi-Nested RT-PCR technique

Financial support: CNPq and Pasteur Institute of São PauloTrabalho apresentado à 23ª Reunião Internacional da Raiva nas Américas, 2012, São Paulo

A review of the classification of rabies virus lineages maintained by insectivorous bats in Brazil

Trabalho apresentado à 23ª Revista de Educação Continuada em Medicina Veterinária e Zootecnia, 2012, São Paul

Digoxigenin-labeled probe for rabies virus nucleoprotein gene detection

A digoxigenin-labeled probe was produced from the Pasteur virus strain for the detection of the rabies virus N gene. The probe hybridization was performed from amplified N gene obtained by reverse transcription polymerase chain reaction and the results by RT-PCR and hybridization showed 100% agreement. The hybridization, when carried out in products amplified by RT-PCR, increases the sensitivity of this technique even more and confers specificity to the diagnosis. The technique described in this work will be useful in rabies diagnosis laboratories, once the cost is compatible with traditional rabies diagnostic techniques

Species determination of Brazilian mammals implicated in the epidemiology of rabies based on the control region of mitochondrial DNA

Identification of animals that are decomposing or have been run over or burnt and cannot be visually identified is a problem in the surveillance and control of infectious diseases. Many of these animals are wild and represent a valuable source of information for epidemiologic research as they may be carriers of an infectious agent. This article discusses the results obtained using a method for identifying mammals genetically by sequencing their mitochondrial DNA control region. Fourteen species were analyzed and identified. These included the main reservoirs and transmitters of rabies virus, namely, canids, chiroptera and primates. The results prove that this method of genetic identification is both efficient and simple and that it can be used in the surveillance of infectious diseases which includes mammals in their epidemiologic cycle, such as rabies

Epidemiologia molecular de surto de raiva bovina na região central do Rio Grande do Sul, 2012

A raiva é uma doença infecciosa do sistema nervoso central de mamíferos causada pelo vírus da raiva (RabV), geralmente, transmitido pela mordedura de animais infectados. No Brasil, os morcegos hematófagos Desmodus rotundus são as principais fontes de infecção do RabV para bovinos e equinos. Este artigo descreve uma investigação epidemiológica e molecular de surtos de raiva ocorridos na região central do Rio Grande do Sul, entre maio e agosto de 2012. Nesse período, 45 casos suspeitos de raiva foram relatados em 22 pequenos rebanhos, localizados dentro de um raio de 4,7km, no município de Pinhal Grande. Desses, 32 amostras foram submetidas para diagnóstico da raiva, sendo que o RabV e/ou antígenos virais foram identificados em 27 amostras. Em um segundo momento, 11 amostras foram submetidas à transcrição reversa/reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) para o gene da nucleoproteína (N) do RabV, seguido de sequenciamento nucleotídico e análise filogenética. Sete das 11 amostras apresentaram sequências nucleotídicas idênticas e uma apresentou mutação sinônima, não-codificante, indicando uma provável origem comum dos vírus. Por outro lado, três amostras apresentaram mutações que resultaram em alterações de aminoácidos, sugerindo uma origem diferente do vírus. Esses resultados sugerem que RabV de diferentes origens/linhagens co-circulam na região e foram envolvidos nos surtos descritos. Investigações sobre a circulação de ambos os genótipos em morcegos na região estão em andamento

Detection of rabies virus antibodies in Brazilian free-ranging wild carnivores

Rabies virus is a pathogen of major concern in free-ranging wild carnivores in several regions of the world, but little is known about its circulation in Brazilian wild carnivores. Sera from 211 free-ranging wild carnivores, captured from 2000 to 2006 in four locations of two Brazilian biomes (Pantanal and Cerrado), were tested for rabies antibodies. Twenty-six individuals (12.3%) had neutralizing antibody titers ≥0.10 IU/ml. The four sampled locations had antibody-positive animals, suggesting that Rabies virus circulates in all of these regions. Results underscore the risk posed by rabies for conservation of Brazilian carnivores and the possibility of the animals acting as reservoirs for the Rabies virus. Key words: Brazil, conservation, free-ranging wild carnivores, public health, rabies, serolog