БЫСТРЫЙ СПОСОБ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ЭКСТРАКЦИИ ГИНСЕНОЗИДОВ ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ПРОДУКТОВ НА ОСНОВЕ ЖЕНЬШЕНЯ ДЛЯ ВЭЖХ-МС/МС АНАЛИЗА

PURPOSE OF THE ARTICLE. In the past decades a number of extraction methods for biologically active compounds of ginseng coupled with different detection techniques were created. For HPLC-MS profiling of these compounds in plant material and related products a fast non-destructive way to extract ginsenosides from plant materials and ginseng products based on ultrasound-assisted extraction was developed.FINDINGS. Calculated by means of "Added-Found" approach recoveries of ginsenosides Rg1, Rb1, Rc from ginseng root and model sample known to be free of analytes ranged from 80 to 110 %. The effect on the recovery of the following factors: the composition of the extracting mixture, the volume of the mixture and the number of successive extractions was studied. The extraction in case of using 50-70 % methanol/ethanol water mixtures was 1.5-2 times more effective than with 10-20 % mixtures.CONCLUSIONS. After optimization developed method of extraction without subsequent evaporation and reconstitution of the extract was used in combination with HPLC-MS determination of ginsenosides in various objects with a complex matrix.Keywords: ultrasound-assisted extraction, ginsenosides, Panax ginseng, HPLC- MS/MS(Russian)DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2013.17.4.012A.N. Stavrianidi, I.A. Rodin, A.V. Braun, O.A. Shpigun Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian FederationЦЕЛЬ СТАТЬИ. Разработка удобного, быстрого и неразрушающего метода извлечения гинсенозидов из объектов со сложной матрицей, совместимого с чувствительным ВЭЖХ-МС детектированием этих соединений.МЕТОДОЛОГИЯ. Использовали ультразвуковую экстракцию при 30 °С. В качестве экстрагента были выбраны различные смеси воды и органических растворителей (метанола и этанола). Детектирование и определение структуры гинсенозидов проводили с помощью ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектированием на третьем квадруполе, работающем в режиме линейной ионной ловушки.НАУЧНАЯ ЦЕЛЬ. Исследовали влияние на эффективность экстракции следующих факторов: состав экстрагирующей смеси, объем смеси и число последовательных актов экстракции. Проверена возможность химического превращения исходных гинсенозидов Rg1, Rb1 и Rc в гинсенозиды более простой структуры во время экстракции.РЕЗУЛЬТАТЫ. Рассчитанные способом «введено-найдено» степени извлечения гинсенозидов Rg1, Rb1, Rc лежат в диапазоне от 80 до 110 %. Показано отсутствие разрушения структуры данных веществ при проведении экстракции.ВЫВОДЫ. Выбраны оптимальные условия проведения экстракции гинсенозидов. Разработанный способ экстракции без последующего упаривания и перерастворения экстракта применяли в комбинации с ВЭЖХ-МС определением гинсенозидов в различных объектах со сложной матрицей.Ключевые слова: ультразвуковая экстракция, гинсенозиды, Panax ginseng, ВЭЖХ-МС/МСDOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2013.17.4.01

ХРОМАТОМАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛИЦИРРИЗИНА В ЭКСТРАКТАХ ИЗ КОРНЯ СОЛОДКИ И ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Dietary supplements and food products quality control methods are mainly based on the chromatographic fingerprint as a feasible technique for species authentication and qualitative ratio determination of individual biomarkers. The application of this approach allows detecting a number of closely related compounds unique for a particular plant genus. Highly informative methods such as HPLC-MS and HPLC-MS/MS are used for the separation and selective determination of chosen biomarkers in the case of their poor absorbance at the non-selective wavelength. Present study demonstrates the advantages and disadvantages of the different types of MS detection for the determination of characteristic saponins of different plant species with a sweet taste and aroma ‑ ginseng, abrus and licorice. It is shown that the multiple reaction monitoring for the licorice root biomarker – glycyrrhizin – can provide its selective determination in complex matrixes of plant material, but the presence of other plant components might interfere with the analysis. As an alternative, a technique of selected ion monitoring of sapogenin fragmentation pattern ions was developed. The combination of retention time and the presence of several characteristic fragment ions provided more informative and reliable analysis of the related compounds. Unlike molecular ion detection technique, this approach can unambiguously distinguish compounds with different sapogenin but identical molecular mass in complex mixtures. Applicability of the developed technique was tested during the analysis of unidentified food product – ginseng oolong tea.Keywords: high performance liquid chromatography/mass spectrometry, saponins, licorice, food supplements DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2017.21.3.009 A.N. Stavrianidi, E.A. Stekolshchikova, I.A. Rodin, O.A. Shpigun Lomonosov Moscow State University, Leninskie gory, 1, Moskow, 119991, Russian Federation Современные способы идентификации компонентов биологически активных добавок и продуктов питания основаны, главным образом, на применении способа распознавания «отпечатков пальцев» разных видов растений путем определения присутствия и количественного соотношения отдельных соединений – биомаркеров этих растений. Такой подход оправдывает себя, поскольку часто группа близких по структуре соединений является уникальной для одного рода растений. Для селективного определения выбранных биомаркеров и их структурных аналогов необходимо применение высокоинформативных способов разделения и детектирования компонентов пробы, таких как ВЭЖХ-МС и ВЭЖХ-МС/МС. В проведенном исследовании были предложены и сопоставлены разные варианты МС детектирования для определения сапонинов, характерных для разных видов растений, обладающих сладким привкусом и ароматом – женьшеня, абруса и солодки. Показано, что наиболее распространенный способ определения биомаркера корня солодки – глицирризина с использованием режима регистрации выбранных ионных переходов может обеспечить его селективное детектирование в сложных объектах, однако не полностью гарантирует отсутствие мешающего влияния близких по структуре компонентов других растений. Разработан способ получения профилей сапонинов по выбранным ионам паттернов фрагментации сапогенинов, обеспечивающий достаточную информативность анализа, и проведено его опробование на примере анализа пищевого продукта неустановленного состава – ароматизированного женьшеневого чая (улуна).Ключевые слова:высокоэффективная жидкостная хроматография/масс-спектрометрия, сапонины, солодка, пищевые добавкиDOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2017.21.3.00

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭНАНТИОМЕРНОЙ ЧИСТОТЫ ПЕМЕТРЕКСИДА НА СОРБЕНТАХ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ МАКРОЦИКЛИЧЕСКИМИ АНТИБИОТИКАМИ

The enantioseparation of Pemetrexed on chiral sorbents with macrocyclic glycopeptide antibiotics as chiral selectors was investigated. The pharmacological group of Pemetrexed is antimetabolites with antitumor activity. Pemetrexed is a structural analog of folic acid. IUPAC name of this drug is disodium (2S)-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate heptahydrate. The mechanism of Pemetrexed antitumor action is based on the inhibition of the synthesis of purine and pyrimidine. Chiral stationary phases with antibiotics of different structures were used. Columns with silica modified antibiotic eremomycin (commercial column Nautilus-E, Bio-Chem-Mac, Russia) and silica with teicoplanin aglycone (ChirobioticTAG, Astec, USA) were applied. The separation of the enantiomers was carried out by the reversed-phase and polar-ion chromatography modes.  The mobile phase in the reversed-phase chromatography mode was a mixture of ammonium dihydrogenphosphate solution and organic solvents (methanol, acetonitrile), and in polar-ion mode – organic solvents (methanol, acetonitrile) with additives of acids (acetic acid, formic acid) and bases (triethylamine, diethylamine). The influence of the components’ nature and concentration in the mobile phase, their composition and pH on the separation of Pemetrexed enantiomers was investigated using the silica modified eremomycin and teicoplanin aglycone. The resolution of Pemetrexed enantiomers was 2.8 - 3.3 in the reverse phase mode on the column with eremomycin. In the polar-ion mode chromatography, Pemetrexed eluted with dead volume (capacity factor k` = 0.1 ÷ 0.3) independently of the additives concentrations in the mobile phase. The enantiomers of Pemetrexed were not separated on the column with teicoplanin aglycone. Teicoplanin aglycone has one amino-group only, whereas eremomycin has three amino-groups. Electrostatic interactions between teicoplanin aglycone and Pemetrexed were less than interactions between eremomycin and Pemetrexed. Eremomycin has more chiral centers than teicoplanin aglycone. In addition, hydrophobic interactions, hydrogen bonds and dipolar interactions with amide and hydroxyl groups of eremomycin provide high enantioselectivity of sorbent with eremomycin. The determination of enantiomeric purity of Pemetrexed drug on the column with eremomycin was conducted.  Mobile phase was (55:15:30) MeOH:ACN:NH4H2PO4 (50mM, pH = 2.5). The time of analysis was less than 10 minutes. D-isomer was not detected in the drug. The limit of detection of Pemetrexed D-enantiomer was 0.0003 mg/ml (assumed 3:1 signal to noise ratio) which constituted 0.12 % from the total amount drug.Keywords: macrocyclic glucopeptides, chiral selector, enantiomers, enantiomeric purity of the pharmaceutical substances(Russian)DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2016.20.2.002 E.N. Shapovalova, I.A. Fedorova, A.A. Priporova, I.A. Ananieva, O.A. ShpigunM.V.Lomonosov Moscow State University, 1-3 Leninskie gory,  Moscow, ,  119991, Russian FederationИсследовано энантиоразделение пеметрекседа на сорбентах с иммобилизованными на поверхности силикагеля макроциклическими гликопептидными антибиотиками. Пеметрексед относится к фармакологической группе антиметаболидов, обладающих противоопухолевой активностью; структурный аналог фолиевой кислоты. Систематическое (ИЮПАК) наименование динатриевая соль (2S)-2-[[4-[2-(2-амино-4-оксо-4,7-дигидро-1H-пиррол[2,3-d]пиримидин-5-ил)этил]бензоил]-глутаминовой кислоты гептагидрат, действующее вещество ‒ L-изомер пеметрекседа. Механизм противоопухолевого действия пеметрекседа обусловлен ингибированием синтеза пуринов и пиримидинов. Для того чтобы выявить, как влияет структура антибиотика, взятого в качестве хирального селектора, на энантиоразделение веществ, для разделения энантиомеров использовали неподвижные фазы с отличающимися по своей структуре антибиотиками ‒ эремомицином (коммерческая колонка Nautilus-E (ЗАО «Био-Хим-Мак», Россия)) и агликоном тейкопланина (ChirobioticTAG (Astec, США)). Разделение энантиомеров проводили в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии. Для разделения энантиомеров в обращенно-фазовом режиме хроматографии в качестве подвижной фазы использовали смесь раствора дигидрофосфата аммония (NH4H2PO4) и органических растворителей – метанол (MeOH), ацетонитрил (ACN), в полярно-ионном режиме – органические растворители (метанол, ацетонитрил) с добавками кислот (ледяная уксусная кислота и муравьиная кислота) и оснований (триэтиламин и диэтиламин). Исследовали влияние природы и концентрации компонентов подвижной фазы, ее состава и pH на разделение энантиомеров пеметрекседа на силикагеле, модифицированном эремомицином и агликоном тейкопланина. Энантиомеры пеметрекседа удалось разделить с разрешением 2.8-3.3 на колонке Nautilus-E в обращенно-фазовом режиме. Полярно-ионный режим хроматографии не дал положительных результатов, разделить энатиомеры не удалось: пеметрексед практически не удерживался на колонке (значение фактора удерживания k` = 0.1 ÷ 0.3) независимо от концентрации добавки кислоты и амина в подвижную фазу. Проведенные исследования энантиоразделения пеметрекседа на сорбенте с агликоном тейкопланина в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии показали, что энантиомеры пеметрекседа невозможно разделить с данным селектором. Агликон тейкопланина содержит только одну аминогруппу, по сравнению с тремя у эремомицина, что уменьшает электростатические взаимодействия между макроциклическим антибиотиком и пеметрекседом, и на сорбенте, модифицированным агликоном тейкопланина, он удерживается слабо. Эремомицин содержит значительно больше хиральных центров по сравнению с агликоном тейкопланина Кроме того, лучшая селективность разделения энантиомеров реализуется за счет образования водородных связей и дипольных взаимодействий с амидными и гидроксильными группами эремомицина и за счет гидрофобных взаимодействий. Показана возможность определения энантиомерной чистоты фармацевтического препарата на колонке Nautilus-E при элюировании подвижной фазой: (55 : 15 : 30) % об. MeOH : ACN : NH4H2PO4 (50 мM, pH = 2.5), время анализа составляет меньше 10 минут, D-изомер не обнаружен. Предел обнаружения соединения, оцененный по отношению сигнал/фон = 3 : 1 составил 0.0003 мг/мл, что соответствует 0.12 % мас. D-формы по отношению к общему количеству препарата.         Ключевые слова: макроциклические гликопептидные антибиотики, хиральные селекторы, энантиомеры, оптическая чистота лекарственных формDOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2016.20.2.00

Determination of the enantiomeric purity of Pemetrexed on the macrocyclic glycopeptides bonded phases

Исследовано энантиоразделение пеметрекседа на сорбентах с иммобилизованными на поверхности силикагеля макроциклическими гликопептидными антибиотиками. Пеметрексед относится к фармакологической группе антиметаболидов, обладающих противоопухолевой активностью; структурный аналог фолиевой кислоты. Систематическое (ИЮПАК) наименование динатриевая соль (2S)-2-[[4-[2-(2-амино-4-оксо-4,7-дигидро-1H-пиррол[2,3-d]пиримидин-5-ил)этил]бензоил]-глутаминовой кислоты гептагидрат, действующее вещество - L-изомер пеметрекседа. Механизм противоопухолевого действия пеметрекседа обусловлен ингибированием синтеза пуринов и пиримидинов. Для того чтобы выявить, как влияет структура антибиотика, взятого в качестве хирального селектора, на энантиоразделение веществ, для разделения энантиомеров использовали неподвижные фазы с отличающимися по своей структуре антибиотиками - эремомицином (коммерческая колонка Nautilus-E (ЗАО «Био-Хим-Мак», Россия)) и агликоном тейкопланина (ChirobioticTAG (Astec, США)). Разделение энантиомеров проводили в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии. Для разделения энантиомеров в обращенно-фазовом режиме хроматографии в качестве подвижной фазы использовали смесь раствора дигидрофосфата аммония (NH₄H₂PO₄) и органических растворителей - метанол (MeOH), ацетонитрил (ACN), в полярно-ионном режиме - органические растворители (метанол, ацетонитрил) с добавками кислот (ледяная уксусная кислота и муравьиная кислота) и оснований (триэтиламин и диэтиламин). Исследовали влияние природы и концентрации компонентов подвижной фазы, ее состава и pH на разделение энантиомеров пеметрекседа на силикагеле, модифицированном эремомицином и агликоном тейкопланина. Энантиомеры пеметрекседа удалось разделить с разрешением 2.8-3.3 на колонке Nautilus-E в обращенно-фазовом режиме. Полярно-ионный режим хроматографии не дал положительных результатов, разделить энатиомеры не удалось: пеметрексед практически не удерживался на колонке (значение фактора удерживания k` = 0.1 ÷ 0.3) независимо от концентрации добавки кислоты и амина в подвижную фазу. Проведенные исследования энантиоразделения пеметрекседа на сорбенте с агликоном тейкопланина в обращенно-фазовом и полярно-ионном режимах хроматографии показали, что энантиомеры пеметрекседа невозможно разделить с данным селектором. Агликон тейкопланина содержит только одну аминогруппу, по сравнению с тремя у эремомицина, что уменьшает электростатические взаимодействия между макроциклическим антибиотиком и пеметрекседом, и на сорбенте, модифицированным агликоном тейкопланина, он удерживается слабо. Эремомицин содержит значительно больше хиральных центров по сравнению с агликоном тейкопланина Кроме того, лучшая селективность разделения энантиомеров реализуется за счет образования водородных связей и дипольных взаимодействий с амидными и гидроксильными группами эремомицина и за счет гидрофобных взаимодействий. Показана возможность определения энантиомерной чистоты фармацевтического препарата на колонке Nautilus-E при элюировании подвижной фазой: (55 : 15 : 30) % об. MeOH : ACN : NH₄H₂PO₄ (50 мM, pH = 2.5), время анализа составляет меньше 10 минут, D-изомер не обнаружен. Предел обнаружения соединения, оцененный по отношению сигнал/фон = 3 : 1 составил 0.0003 мг/мл, что соответствует 0.12 % мас. D-формы по отношению к общему количеству препарата.The enantioseparation of Pemetrexed on chiral sorbents with macrocyclic glycopeptide antibiotics as chiral selectors was investigated. The pharmacological group of Pemetrexed is antimetabolites with antitumor activity. Pemetrexed is a structural analog of folic acid. IUPAC name of this drug is disodium (2 S )-2-[[4-[2-(2-amino-4-oxo-4,7-dihydro-1 H -pyrrolo[2,3- d ]pyrimidin-5-yl)ethyl]benzoyl]amino]pentanedioate heptahydrate. The mechanism of Pemetrexed antitumor action is based on the inhibition of the synthesis of purine and pyrimidine. Chiral stationary phases with antibiotics of different structures were used. Columns with silica modified antibiotic eremomycin (commercial column Nautilus-E, Bio-Chem-Mac, Russia) and silica with teicoplanin aglycone (ChirobioticTAG, Astec, USA) were applied. The separation of the enantiomers was carried out by the reversed-phase and polar-ion chromatography modes. The mobile phase in the reversed-phase chromatography mode was a mixture of ammonium dihydrogenphosphate solution and organic solvents (methanol, acetonitrile), and in polar-ion mode - organic solvents (methanol, acetonitrile) with additives of acids (acetic acid, formic acid) and bases (triethylamine, diethylamine). The influence of the components’ nature and concentration in the mobile phase, their composition and pH on the separation of Pemetrexed enantiomers was investigated using the silica modified eremomycin and teicoplanin aglycone. The resolution of Pemetrexed enantiomers was 2.8 - 3.3 in the reverse phase mode on the column with eremomycin. In the polar-ion mode chromatography, Pemetrexed eluted with dead volume (capacity factor k ` = 0.1 ÷ 0.3) independently of the additives concentrations in the mobile phase. The enantiomers of Pemetrexed were not separated on the column with teicoplanin aglycone. Teicoplanin aglycone has one amino-group only, whereas eremomycin has three amino-groups. Electrostatic interactions between teicoplanin aglycone and Pemetrexed were less than interactions between eremomycin and Pemetrexed. Eremomycin has more chiral centers than teicoplanin aglycone. In addition, hydrophobic interactions, hydrogen bonds and dipolar interactions with amide and hydroxyl groups of eremomycin provide high enantioselectivity of sorbent with eremomycin. The determination of enantiomeric purity of Pemetrexed drug on the column with eremomycin was conducted. Mobile phase was (55:15:30) MeOH:ACN:NH₄H₂PO₄ (50mM, pH = 2.5). The time of analysis was less than 10 minutes. D-isomer was not detected in the drug. The limit of detection of Pemetrexed D-enantiomer was 0.0003 mg/ml (assumed 3:1 signal to noise ratio) which constituted 0.12 % from the total amount drug.This work was supported by RFBR No15-03-05979a

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИКАРИИНА В МОЧЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В СОЧЕТАНИИ С ТАНДЕМНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЕЙ

 Using the liquid chromatography tandem mass spectrometry, the approach for the selective detection of icariin in urine samples was developed. Biological samples analysis was performed by the reversed-phase chromatography using the C18 sorbent. The method of tandem mass spectrometry with the multiple reaction monitoring (MRM) mode using the electrospray ionization technique in positive ion mode was used (the collision energy - 40 %, m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)). The sample preparation procedure comprising of the solid-phase extraction based on SUPELCO HLB cartridges, the evaporation of the organic extract in a stream of nitrogen and the reconstitution of residue was selected. The detection limit was 1 ng ml-1. During the method validation, the extraction of icariin from a biological fluid (97%), the selectivity and the specificity of the target compound as well as the matrix effects of ionization (4 %) were studied.Key words: high performance liquid chromatography, tandem mass spectrometry, Epimedium, icariin, solid-phase extraction, liquid-liquid extraction.(Russian)DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2015.19.4.006O.A. Shevlyakova1, K.J. Vasil’yev1, A.A. Ihalaynen1, A.M. Antokhin1, V.F. Taranchenko1, V.M. Goncharov1, A.V. Aksenov1, D.A. Mitrofanov1, I.A. Rodin2, O.A. Shpigun2 1Federal State Unitary Enterprise “Scientific Center “Signal”, Moscow, Russian Federation2Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russian FederationC использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии разработан способ селективного определения икариина в пробах мочи. Для анализа биологических проб использовали обращенно-фазовый вариант высокоэффективной хроматографии на сорбентах с привитыми C18 группами. Определение осуществляли методом тандемной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением в режиме регистрации выбранных ионных переходов для положительных ионов (энергия соударений – 40 %, ионный переход – с m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)).Выбрана процедура пробоподготовки, включающая в себя твёрдофазную экстракцию на картриджах SUPELCO HLB, концентрирование органического экстракта в токе азота и перерастворение сухого остатка. Предел детектирования составил 1 нг∙мл-1. При валидации методики оценивали степень извлечения икариина из биологической жидкости (97 %), селективность и специфичность определения целевого соединения, а также влияние матрицы на ионизацию (4 %).Ключевые слова: высокоэффективная жидкостная хроматография, тандемная масс-спектрометрия, Epimedium, икариин, твёрдофазная экстракция, жидкость-жидкостная экстракция. DOI: http://dx.doi.org/10.15826/analitika.2015.19.4.00

Liquid chromatography mass spectrometry identification and determination of glycyrrhizin in licorice root extracts and food products

Dietary supplements and food products quality control methods are mainly based on the chromatographic fingerprint as a feasible technique for species authentication and qualitative ratio determination of individual biomarkers. The application of this approach allows detecting a number of closely related compounds unique for a particular plant genus. Highly informative methods such as HPLC-MS and HPLC-MS/MS are used for the separation and selective determination of chosen biomarkers in the case of their poor absorbance at the non-selective wavelength. Present study demonstrates the advantages and disadvantages of the different types of MS detection for the determination of characteristic saponins of different plant species with a sweet taste and aroma ‑ ginseng, abrus and licorice. It is shown that the multiple reaction monitoring for the licorice root biomarker – glycyrrhizin – can provide its selective determination in complex matrixes of plant material, but the presence of other plant components might interfere with the analysis. As an alternative, a technique of selected ion monitoring of sapogenin fragmentation pattern ions was developed. The combination of retention time and the presence of several characteristic fragment ions provided more informative and reliable analysis of the related compounds. Unlike molecular ion detection technique, this approach can unambiguously distinguish compounds with different sapogenin but identical molecular mass in complex mixtures. Applicability of the developed technique was tested during the analysis of unidentified food product – ginseng oolong tea.Современные способы идентификации компонентов биологически активных добавок и продуктов питания основаны, главным образом, на применении способа распознавания «отпечатков пальцев» разных видов растений путем определения присутствия и количественного соотношения отдельных соединений – биомаркеров этих растений. Такой подход оправдывает себя, поскольку часто группа близких по структуре соединений является уникальной для одного рода растений. Для селективного определения выбранных биомаркеров и их структурных аналогов необходимо применение высокоинформативных способов разделения и детектирования компонентов пробы, таких как ВЭЖХ-МС и ВЭЖХ-МС/МС. В проведенном исследовании были предложены и сопоставлены разные варианты МС детектирования для определения сапонинов, характерных для разных видов растений, обладающих сладким привкусом и ароматом – женьшеня, абруса и солодки. Показано, что наиболее распространенный способ определения биомаркера корня солодки – глицирризина с использованием режима регистрации выбранных ионных переходов может обеспечить его селективное детектирование в сложных объектах, однако не полностью гарантирует отсутствие мешающего влияния близких по структуре компонентов других растений. Разработан способ получения профилей сапонинов по выбранным ионам паттернов фрагментации сапогенинов, обеспечивающий достаточную информативность анализа, и проведено его опробование на примере анализа пищевого продукта неустановленного состава – ароматизированного женьшеневого чая (улуна).This work was funded by the Russian Foundation for Basic Research (RFBR), according to the research project No. 16-33-60007 mol_а_dk

Determination of icariin in urine by high performance liquid chromatography with tandem mass-spectrometric detection

C использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии разработан способ селективного определения икариина в пробах мочи. Для анализа биологических проб использовали обращенно-фазовый вариант высокоэффективной хроматографии на сорбентах с привитыми C18 группами. Определение осуществляли методом тандемной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением в режиме регистрации выбранных ионных переходов для положительных ионов (энергия соударений - 40 %, ионный переход - с m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)). Выбрана процедура пробоподготовки, включающая в себя твёрдофазную экстракцию на картриджах SUPELCO HLB, концентрирование органического экстракта в токе азота и перерастворение сухого остатка. Предел детектирования составил 1 нг∙мл⁻¹. При валидации методики оценивали степень извлечения икариина из биологической жидкости (97 %), селективность и специфичность определения целевого соединения, а также влияние матрицы на ионизацию (4 %).Using the liquid chromatography tandem mass spectrometry, the approach for the selective detection of icariin in urine samples was developed. Biological samples analysis was performed by the reversed-phase chromatography using the C18 sorbent. The method of tandem mass spectrometry with the multiple reaction monitoring (MRM) mode using the electrospray ionization technique in positive ion mode was used (the collision energy - 40 %, m/z = 677.2433 → 313.0703 (100 %), 369.1330 (35 %)). The sample preparation procedure comprising of the solid-phase extraction based on SUPELCO HLB cartridges, the evaporation of the organic extract in a stream of nitrogen and the reconstitution of residue was selected. The detection limit was 1 ng ml⁻¹. During the method validation, the extraction of icariin from a biological fluid (97%), the selectivity and the specificity of the target compound as well as the matrix effects of ionization (4 %) were studied