Assessment of messenger RNA (mRNA) of Mycobacterium tuberculosis as a marker of cure in patients with pulmonary tuberculosis

Made available in DSpace on 2015-06-12T13:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 462.pdf: 1936396 bytes, checksum: 04bba025d07d06eee03a3b5eb14ad34e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, BrasilA tuberculose (TB) é um dos grandes problemas de saúde pública mundial devido às suas altas taxas de morbimortalidade e índices de transmissão, apesar de existir tratamento e medidas eficazes de controle da doença. O diagnóstico precoce associado a uma terapêutica adequada é essencial para a eficácia dos programas públicos de controle. As técnicas diagnósticas, baciloscopia e cultura, utilizadas de rotina para a detecção do Mycobacterium tuberculosis em amostras clínicas são falhas em sensibilidade e na demora da obtenção dos resultados, respectivamente. A cultura é considerada o método padrão-ouro para avaliar a viabilidade do bacilo em pacientes com tuberculose em vigência de tratamento específico, porém, por ser laboriosa e necessitar de pelo menos 4 semanas para o crescimento do bacilo, dificulta bastante o monitoramento clínico e a resposta do paciente às drogas tuberculostáticas. Neste contexto, os métodos moleculares vêm sendo desenvolvidos com destaque para a tecnologia da reação em cadeia da polimerase (PCR) destacando a Transcrição Reversa seguida de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR) utilizando o RNA mensageiro que expressa bem a viabilidade bacilar. Neste trabalho foi analisado o desempenho da RT-qPCR utilizando como alvo o gene 85B do Mycobacterium tuberculosis na detecção e resposta ao tratamento específico da tuberculose pulmonar. Foi realizada uma padronização com diferentes concentrações dos primers e sonda desenhados por Desjardin et al, (1999). Construiu-se uma curva padrão de DNA plasmidial gerando um limite de detecção de 10pg/1x10 e-6 (7x10 e7 cópias/reação), epson = 106, R2= 0,98 por cento, e slope= -3,18. O sistema foi avaliado em 98 pacientes com suspeita de TB pulmonar apresentando uma sensibilidade de 91,07 por cento e especificidade de 97,61 por cento, quando comparado à cultura. Em 56 pacientes com tuberculose pulmonar acompanhados durante 30 dias de tratamento específico verificou-se que a RT-qPCR e a cultura apresentaram uma excelente concordância, tendo sido observado um declínio de bacilos viáveis nos dias 15 e 30 após o início da terapêutica na maioria deles. Desta forma, os resultados encontrados sugerem que a RT-qPCR é uma ferramenta que pode ser utilizada no monitoramento clínico e terapêutico, como sinalizador de resistência bacteriana e indicador do período de transmissibilidade do M. tuberculosis em pacientes com TB pulmonar submetidos a tratamento específic

Performance of the IS6110-TaqMan® assay in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis from different biological samples

Submitted by Ana Beatriz Oliveira ([email protected]) on 2019-04-22T13:04:15Z No. of bitstreams: 1 Performance of the IS6110-TaqMan® assay in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis from different biological samples..pdf: 1052057 bytes, checksum: 7aee4b7c7f3946a2f4d18ba85f388dfb (MD5)Approved for entry into archive by Ana Beatriz Oliveira ([email protected]) on 2019-04-22T13:30:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Performance of the IS6110-TaqMan® assay in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis from different biological samples..pdf: 1052057 bytes, checksum: 7aee4b7c7f3946a2f4d18ba85f388dfb (MD5)Made available in DSpace on 2019-04-22T13:30:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Performance of the IS6110-TaqMan® assay in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis from different biological samples..pdf: 1052057 bytes, checksum: 7aee4b7c7f3946a2f4d18ba85f388dfb (MD5) Previous issue date: 2018Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de Imunologia. Recife, PE, Brasil.Introduction: This study evaluated the performance of the IS6110-TaqMan® assay in different types of biological samples and tissues for laboratory diagnosis of extrapulmonary tuberculosis. Methods: 143 biological samples and tissues from patients with suspected extrapulmonary tuberculosis from the health services of Recife/Pernambuco/Brazil were evaluated with the IS6110-TaqMan® assay. Results: The sensitivities of the IS6110-TaqMan® assay calculated for blood, urine, both blood and urine samples, tissue biopsies, extrapulmonary body fluid samples, and all samples from patients calculated together were 55.9%, 33.3%, 68.8%, 43.8%, 29.6%, and 73.7%, respectively, and the specificities were 80%, 100%, 78.6%, 100%, 100%, and 84.2%, respectively. Conclusions: The accuracy of qPCR was high in various clinical sample types. The analysis of more than one type of clinical sample collected from the same patient with extrapulmonary tuberculosis enhances the diagnostic power of the IS6110-TaqMan® assay when compared with the use of only one clinical sample

The performance of an in-house nested-PCR technique for pleural tuberculosis diagnoses

Submitted by Kamylla Nascimento ([email protected]) on 2017-12-11T12:03:54Z No. of bitstreams: 1 art. The Performance - montenegro.pdf: 788710 bytes, checksum: 78b6665e69363b833df61e5eb1eb9977 (MD5)Approved for entry into archive by Kamylla Nascimento ([email protected]) on 2017-12-11T12:20:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 art. The Performance - montenegro.pdf: 788710 bytes, checksum: 78b6665e69363b833df61e5eb1eb9977 (MD5)Made available in DSpace on 2017-12-11T12:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 art. The Performance - montenegro.pdf: 788710 bytes, checksum: 78b6665e69363b833df61e5eb1eb9977 (MD5) Previous issue date: 2013Este estudo recebeu apoio financeiro do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães - FIOCRUZ e do Programa de Desenvolvimento Tecnológico em Suprimentos de Saúde (PDTIS).Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de imunologia. Recife, PE, Brasil.Hospital Barão de Lucena. Departamento de Clínica Médica. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de imunologia. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de imunologia. Recife, PE, Brasil.Hospital Geral Otávio de Freitas. Recife, PE, Brasil.Hospital Barão de Lucena. Departamento de Clínica Médica. Recife, PE, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Departamento de imunologia. Recife, PE, Brasil.This study evaluated the performance of an in-house nested-PCR system for the detection of the Mycobacterium tuberculosis complex in pleural fluid, blood and urine samples from pleural effusion tuberculosis patients by health services physicians in Pernambuco, Brazil

Desempenho da técnica nested PCR na detecção específica do complexo Mycobacterium tuberculosis em amostras sanguíneas de pacientes pediátricos

OBJETIVO: Avaliar o desempenho da técnica nested PCR (nPCR) para detectar o complexo Mycobacterium tuberculosis em amostras de sangue de pacientes com suspeita de TB para sua possível utilização como uma ferramenta auxiliar no diagnóstico laboratorial da doença em crianças. MÉTODOS: Detecção do complexo M. tuberculosis em amostras de sangue usando como alvo a sequência de inserção IS6110 do DNA genômico do bacilo. Foram avaliados 120 pacientes, menores de 15 anos de idade, de ambos os sexos, provenientes de hospitais públicos do Recife (PE), no período entre janeiro de 2003 e agosto de 2005. O diagnóstico de TB foi realizado pelo médico assistente do serviço de saúde de acordo com os critérios da Sociedade Torácica Americana. A nPCR amplificou um fragmento de 123 pb com oligonucleotídeos externos (IS1/IS2) e, na reação subsequente, com oligonucleotídeos internos (IS3/IS4), gerando um amplicon de 81 pb. RESULTADOS: A TB ativa ou latente esteve presente em 65 pacientes, foi descartada em 28 suspeitos e 27 não tinham a doença (controles). A sensibilidade da nPCR foi de 26,15%, sendo significativamente maior na forma extrapulmonar (55,56%) em relação à pulmonar (18,18%), e a especificidade foi de 92,73%. CONCLUSÕES: Diante das dificuldades diagnósticas da TB infantil e do baixo número de casos estudados, a nPCR em sangue demonstrou ser uma técnica rápida e específica, mas com baixa sensibilidade. Para saber a sua real utilidade no diagnóstico de formas paucibacilares, sobretudo as extrapulmonares, novas pesquisas devem ser desenvolvidas com uma casuística maior de crianças e com outros espécimes biológicos além do sangue

Bone tuberculosis: a case report on child

The authors report a case of a 12-year-old child with a complaint of pain and deformity in the lower thoracic region that had lasted for two years. Clinical, epidemiological and laboratory characteristics associated with images of apparent damage in the T9-T10 and T11-T12 vertebrae taken by radiography of the thoracic spine and nuclear magnetic resonance in addition to the positivity of the molecular test based on the polymerase chain reaction, led to tuberculous spondylitis being diagnosed and specific therapy was started. Culture of vertebral biopsy was positive for Mycobacterium tuberculosis after thirty days

Performance of the IS6110-TaqMan® assay in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis from different biological samples

Abstract INTRODUCTION: This study evaluated the performance of the IS6110-TaqMan® assay in different types of biological samples and tissues for laboratory diagnosis of extrapulmonary tuberculosis. METHODS: 143 biological samples and tissues from patients with suspected extrapulmonary tuberculosis from the health services of Recife/Pernambuco/Brazil were evaluated with the IS6110-TaqMan® assay. RESULTS: The sensitivities of the IS6110-TaqMan® assay calculated for blood, urine, both blood and urine samples, tissue biopsies, extrapulmonary body fluid samples, and all samples from patients calculated together were 55.9%, 33.3%, 68.8%, 43.8%, 29.6%, and 73.7%, respectively, and the specificities were 80%, 100%, 78.6%, 100%, 100%, and 84.2%, respectively. CONCLUSIONS The accuracy of qPCR was high in various clinical sample types. The analysis of more than one type of clinical sample collected from the same patient with extrapulmonary tuberculosis enhances the diagnostic power of the IS6110-TaqMan® assay when compared with the use of only one clinical sample