Estandarización del modelo langendorff de corazón aislado para evaluar los daños inducidos por isquemia-reperfusión

El modelo de isquemia-reperfusión representa una vía experimental para reproducir las características de un evento isquémico cardiaco agudo. Nuestro objetivo era validar el modelo Langendorff en corazón aislado de rata. Extrajimos el corazón y lo conectamos a un sistema de perfusión para evaluar la viabilidad del tejido, en donde modificamos la velocidad de perfusión (10.5 y 12.0 mL/min) y por otra parte, la inducción de la isquemia, que se realizó mediante la suspensión de la perfusión o la deprivación del oxigeno en la solución perfundida. Los parámetros cardiacos controles se obtuvieron justo antes de generar la isquemia y los 70 y 120 minutos de iniciada la perfusión. En todos los casos, mantuvimos un grupo control donde la perfusión fue continua, igual que la oxigenación del tejido cardiaco. En la determinacion del % de área de infarto se encontró que este valor fue de aproximadamente 5% para ambos controles. En la isquemia inducida por la suspension de la perfusion la velocidad de 10.5 fue de 22% y un 38% en la velocidad de 12 mL/min. Cuando la isquemia fue inducida por deprivación de oxigeno los grupos de 10.5 y 12 ml/min indujeron un 44% y 58%, respectivamente.Logramos concluir que la viabilidad del tejido es más estable cuando se perfunde a una velocidad de 10.5 mL/min, y que la isquemia se alcanza con mayor fiabilidad cuando se interrupe de la oxigenación del tejido

Estudio de Bauhinia thonningii y el impacto de diferentes disolventes de extracción en el potencial antioxidante de la planta

Bauhinia thonningii (Milne-Redhead) forma parte de la medicina tradicional de África occidental, donde sus hojas se emplean para tratar enfermedades inflamatorias e infecciosas. Investigamos el efecto antioxidante de los extractos de hojas (BAFA), corteza (BACA) y raíz (BARA) de Bauhinia thonningii, realizando extracciones con diferentes disolventes. Valoramos la actividad antirradicalaria frente al radical DPPH, donde los extractos BARA-Acet y BARA-Eta desarrollaron una actividad antirradicalaria no inferior a Quercetina (73,1±0,8; 72,3±0,4 y 77,9±4,4 %, respectivamente). Otros cuatro extractos, BAFA y BARA en acetona y etanol, presentaron una inhibición de más del 65% del radical DPPH. La actividad antirradicalaria del patrón Quercetina frente radical óxido nítrico (NO) fue de 57,7±1,2%, valores superiores al 50% también fueron obtenidos con BACA-Hex, BACA-Acet y BARA-Acet. Fueron los extractos obtenidos a partir de las hojas de Bauhinia thonningii, BAFA-Acet y BAFA-Eta, junto con BACA-Eta, los que presentaron mayor actividad frente al radical anión superóxido (●O2−) (50,1±3,8, 51,9±2,5 y 50,1±3,7%, respectivamente), siendo similares a la eficacia demostrada por Quercetina (53,0±0,8%). Ninguno de los extractos hexánicos desarrolló actividad antioxidante frente al radical ●O2−. En los ensayos de peroxidación lipídica, todos los extractos obtenidos de las hojas y la corteza de Bauhinia thonningii presentaron un efecto inhibitorio máximo superior al 90%, sin diferencias significativas cuando se compara frente al patrón Curcumina. Concluimos que las tres partes de la planta evaluada poseen constituyentes con poder antioxidante y, además, que la mayor eficacia se obtiene cuando se emplean los disolventes etanol y acetona para la obtención de los extractos

Estandarización de modelo de perfusión renal en ratones

La técnica de riñón ex vivo permite valorar la respuesta renal intrínseca permitiendo que las variables experimentales puedan ser controladas por el investigador. En los laboratorios del CIPFAR trabajamos para poner a punto el modelo de riñón aislado y perfundido, para lo cual empleamos ratones C57BL/6 y CD-1 machos. Realizamos laparatomía abdominal, localizamos y ligamos la sección aórtica, seguidamente, realizamos una incisión en la arteria renal izquierda e introdujimos una cánula acoplada a un microtubo de polietileno. A través de la cánula, los riñones aislados son conectados a un sistema de perfusión y expuestos a los contracturantes KCl (80mM) y fenilefrina (FE 10-5 M). También obtuvimos curvas concentración respuesta frente a acetilcolina (ACh 10-8–10-4M). Nuestros resultados revelan valores de presión basal de 36.8 ± 4.8 mmHg y 30.7 ± 14.2 mmHg para las cepas CD-1 y C57BL/6, respectivamente. La despolarización con KCl desarrolló un efecto contracturante máximo de 25.7 ± 16.0 mmHg para CD-1 y 63.8 ± 34.8 mmHg en ratones C57BL/6. El agente adrenérgico FE, produjo contracciones máximas de 53.0 ± 29.6 mmHg en CD-1 y 66.1 ± 4.7 mmHg en C57BL/6. El efecto vasodilatador máximo inducido por ACh fue de 35.7 % ± 3.5 y 46.9 % ± 18.7 en CD-1 y C57BL/6, respectivamente.A la luz de este resultado, tanto el tiempo de exposición, la manipulación excesiva, la perfusión inadvertida de burbujas y la formación de coágulos, pueden ser factores que disminuyan la viabilidad del endotelio renal. En cualquier caso, los datos de perfusión basal, así como la reactividad frente a agentes contracturantes son pruebas de la viabilidad del tejido en ambos grupos de animales

ALCHORNEA CORDIFOLIA: ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y TOXICIDAD

Alchornea cordifolia es una importante droga cruda en el sistema indígena africano para el tratamiento del dolor. Por lo tanto, hemos decidido determinar la actividad antioxidante y el perfil de toxicidad de los extractos obtenidos utilizando disolventes con diferente polaridad (hexano, acetona y etanol) y diferentes partes de la planta (hojas, corteza y raíces). Para determinar la actividad antioxidante se utilizaron concentraciones entre (0,48-125 μg/ml) frente a: DPPH, óxido nítrico (NO·), anión superóxido no enzimático (●O2−), TBARS, mientras que la toxicidad se evaluó mediante el bioensayo con el modelo Artemia salina.Frente a DPPH, los extractos de hojas, raíces y corteza obtenidos con etanol y acetona desarrollaron actividad antirradical entre 70 y 80%, muy similares a nuestro estándar quercetina (77,9±4,4%). A bajas concentraciones, los extractos obtenidos de la raíz muestran una actividad antirradical frente al NO· entre 50 y 60%, próxima a la registrada por Quercetina (74,8±3,5%). Los extractos obtenidos de la corteza mostraron una actividad significativa frente a ●O2− (Hex=61,6%, Acet=61,2% y Eta=50,1%), muy similar a Quercetina (53,0±0,8%). La formación de TBARS fue inhibida significativamente por los extractos etanólico y acetónico de las hojas (95,5% y 94,6%, respectivamente), y se observó un efecto similar con la Curcumina (97,2%). Al evaluar la toxicidad de los extractos a una concentración de 1000 μg/ml, observamos que los obtenidos de las hojas mostraron el mayor % de letalidad (Hex=88%; Acet=76%; Eta=42%).A. cordifolia es una planta con interés biológico, cuyas actividades antioxidantes y perfil toxicológico fueron descritas en este estudio