Comparação entre o sistema automatizado e PCR na identificação e susceptibilidade de isolados clínicos de Enterococcus spp

Enterococci are increasingly responsible for nosocomial infections worldwide. This study was undertaken to compare the identification and susceptibility profile using an automated MicrosScan system, PCR-based assay and disk diffusion assay of Enterococcus spp. We evaluated 30 clinical isolates of Enterococcus spp. Isolates were identified by MicrosScan system and PCR-based assay. The detection of antibiotic resistance genes (vancomycin, gentamicin, tetracycline and erythromycin) was also determined by PCR. Antimicrobial susceptibilities to vancomycin (30 µg), gentamicin (120 µg), tetracycline (30 µg) and erythromycin (15 µg) were tested by the automated system and disk diffusion method, and were interpreted according to the criteria recommended in CLSI guidelines. Concerning Enterococcus identification the general agreement between data obtained by the PCR method and by the automatic system was 90.0% (27/30). For all isolates of E. faecium and E. faecalis we observed 100% agreement. Resistance frequencies were higher in E. faecium than E. faecalis. The resistance rates obtained were higher for erythromycin (86.7%), vancomycin (80.0%), tetracycline (43.35) and gentamicin (33.3%). The correlation between disk diffusion and automation revealed an agreement for the majority of the antibiotics with category agreement rates of >; 80%. The PCR-based assay, the van(A) gene was detected in 100% of vancomycin resistant enterococci. This assay is simple to conduct and reliable in the identification of clinically relevant enterococci. The data obtained reinforced the need for an improvement of the automated system to identify some enterococci.Os enterococos são cada vez mais responsáveis por infecções hospitalares em todo o mundo. Este estudo foi realizado para comparar a identificação e perfil de suscetibilidade entre o sistema automatizado MicrosScan e a técnica molecular de PCR em espécies de Enterococcus spp. Foram avaliados 30 isolados clínicos de Enterococcus spp. Os isolados foram identificados pelo sistema MicrosScan® e pela técnica de PCR. A detecção de genes de resistência a antibióticos (vancomicina, gentamicina, tetraciclina e eritromicina) foi determinada por PCR. Suscetibilidades antimicrobianas à vancomicina (30 µg), gentamicina (120 µg), tetraciclina (30 µg) e eritromicina (15 µg), foram testados pelos métodos automatizados e pelo disco difusão, de acordo com as orientações do CLSI. No que diz respeito à identificação de Enterococcus em geral entre os dados obtidos pelo método de PCR e pelo sistema automático foi de 90,0% (27/30). Para todos os isolados de E. faecium e E. faecalis observamos concordância de 100%. Freqüências de resistência foi maior em E. faecium do que em E. faecalis. As taxas de resistência obtidas foi maior para eritromicina (86,7%), vancomicina (80,0%), tetraciclina (43,35%) e gentamicina (33,3%). A correlação entre a técnica de disco difusão e automação revelou-se de acordo para maioria dos antibióticos com taxas >; 80%. O gene van(A) foi detectado em 100% dos Enterococcus resistentes á vancomicina. O ensaio baseado em PCR é de simples realização e de confiança para identificação de enterococos clinicamente relevantes. Os dados obtidos reforçam a necessidade de melhoria no sistema automatizado para identificar alguns enterococos

not available

No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimáticaIn this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration

not available

No presente trabalho foram realizados estudos genéticos em Trichoderma pseudokoningii e verificada a atividade celulolítica da linhagem selvagem, mutante e recombinantes obtidos de heterocários. Com o objetivo de se obter mutantes auxotrófico, testou-se dois agentes mutagênicos, a luz ultravioleta e o ácido nitroso. Através de irradiação com luz ultravioleta foram obtidos dezenove mutantes autotróficos simples e dezoito com dupla deficiência, e dois mutantes morfológicos com ácido nitroso. Sete mutantes com dupla marcas autotróficas e morfológicas foram utilizados para a obtenção de heterocários. Colônias recombinantes foram obtidas diretamente dos heterocários em diferentes meios seletivo, sugerindo a ocorrência de parameiose nesta espécie. Colônias protróficas crescidas em MM eram binucleadas e de coloração verde, indicando um sistema não autônomo para a pigmentação de conídios. Estas colônias dicarióticas formaram setores em MC acrescido de benomyl, sugerindo a ocorrência de uma fase diplóide altamente instável e parassexualidade. Foi descrito um método para a obtenção e fusão de protoplastos. Colônias recombinantes foram recuperadas diretamente de produtos de fusão, numa freqüência aproximadamente 1000 vezes superior em relação às obtidas à partir de heterocário. Quanto a atividade celulolítica da linhagem selvagem e mutantes, observou-se que os valores de índices enzimáticos foram diretamente proporcionais ao maior ou menor grau de compactação das colônias. Colônias de linhagem selvagem originadas de protoplastos regenerados apresentaram índices de atividade celulolítica inferiores em relação às colônias originadas de conídios, indicando um efeito negativo da protoplastização sobre a atividade enzimáticaIn this work genetic studies were carried out in Trichoderma pseudokoningii in order to test the cellulolitic activity in wild and mutant strains and recombinants obtained from heterokaryons. Two mutagenic agents were tested aiming to obtain auxotrophic mutants-Utraviolet light and nitrous acid. Through UV light were obtained 19 simple auxotrophic mutants and 18 double mutants and through nitrous acid two morphological mutants. Seven color mutants carrying two auxotrophic markers were used to get heterokaryons. Recombinant colonies were directly recovered from heterokaryons onto different seletive media, indicating the occurrence of parameiosis. Prototrophic colonies grown in minimal medium were binucleated and green coloured, revealing a non autonomous system for conidia pigmentation. These dikaryotic colonies gave rise to sectors in complete medium plus benomyl suggesting the occurrence of a highly unstable diploid phase and parassexuality. It was described as well a method for protoplasts obtention and fusion. Recombinant colonies were directly recovered from fusion products in a frequency almost 1000 times higher than the recombinants from heterokaryons. For cellulolitic activity in wild and mutant strains it was shown that the enzymatic indexes were directly proportional to the higher or smaller degree of colony compactation. Colonies regenerated from protoplasts of the wild strain showed worst cellulolitic activity than colonies rosen from conidia. This is a negative effect of protoplastization on the cellulolitic activity. Electrophoretic patterns for esterase of the wild and mutant strains showed different profiles according to number and band position. It might be suggested a relation between band patterns and conidia coloration

Estudo da incidência de amostras clínicas do gênero Candida isoladas de diversos sítios anatômicos = Study of the incidence of clinical samples belonging to the genus Candida obtained from different anatomic sites

A candidíase, principal infecção fúngica do ser humano, é provocada por leveduras do gênero Candida, que fazem parte da microbiota endógena e exógena do corpo humano. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença das espécies de Candida spp, em diversos sítiosanatômicos. Um total de 90 amostras clínicas foram isoladas em ágar Sabouraud contendo antibióticos e identificadas em meio cromogênico CHROMagar Candida®. Deste total, 58 amostras foram provenientes de secreção vaginal, 17 de raspado de unha, 8 de escarro e 7 deraspado de pele. Das amostras de secreção vaginal, 89% corresponderam a espécie C. albicans, seguido de espécies de Candida não-albicans, sendo 5,1% de C. krusei e 1,7% de C. glabrata, C. tropicalis e Candida sp., individualmente. Para as amostras isoladas de raspado de pele não foi observada prevalência de C. albicans (28%). As espécies Candida não-albicans corresponderam a 70% das amostras, sendo distribuídas em C. glabrata (14%), C. krusei (28%) e demais espécies de Candida (28%). A prevalência de espécies Candida não-albicans foi também observada para as amostras isoladas de raspado de unha, sendo que 29% foram caracterizadas como C. glabrata, 23% C. krusei e Candida sp., individualmente e 11% de C. tropicalis. Amostras de C. albicans, isoladas neste sítio anatômico, representaram somente 11%. Em amostras obtidas de escarro foi observada somente duas espécies, com prevalência de C. albicans (75%) seguida de C. tropicalis (25%). As amostras identificadas como C. albicans em meio CHROMagar Candida®, foram confirmadas quanto ao crescimento a 42ºC e pelo emprego da técnica de seminested PCR.Candidiasis is the main human fungal infection caused by yeasts of the genus Candida which are part of endogenous microflora of thehuman body. The aim of this study was to analyze the incidence of Candida species obtained from different infection processes. A total of 90 clinical samples were isolated in Sabouraud agar supplemented with antibiotics, and identified by CHROMagar Candida®. Among them, 58samples were isolated from vaginal secretion, 17 samples were from nail, 8 were from sputum and 7 were from skin. From the former, 89% were identified as C. albicans, followed by non albicans species, being 5.1% C. krusei, 1.7% C. glabrata, 1.7% C. tropicalis and 1.7% Candida sp. For samples isolated from nail it was not observed prevalence of C. albicans (28%); species nonalbicans corresponded to 70% of the samples, being 14% C. glabrata, 528% C. krusei and 28%Candida sp. The prevalence of non albicans species was also observed from samples isolated from nail, being 29% C. glabrata, 23% C. krusei, 23% Candida sp and 11% C. tropicalis. C. albicans in thisinfection site represented only 11%. Only two species were present in samples from sputum, being 75% C. albicans and 25% C. tropicalis. Samples identified as C. albicans in CHROMagar Candida® agar were confirmed by growth at 42ºC and by seminested PCR approach