Taller de resolución de problemas de la práctica profesional en el área de sanidad porcina : Propuesta de innovación en el marco de la carrera de Medicina Veterinaria de la UNLP

El siguiente proyecto abordará la problemática referida a la dimensión de la fragmentación curricular en la carrera de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional de La Plata (UNLP), con el objetivo de desarrollar una propuesta de innovación tendiente a su superación en el área de la práctica docente. Dicha fragmentación se hace evidente en la organización curricular, con asignaturas que se desarrollan predominantemente aisladas y en tiempos distintos. Asimismo, la distribución edilicia de la Facultad, donde existen numerosas edificaciones que se encuentran distribuidas dentro del predio sin tener conexión directa una con otra, da cuenta también de la escasa relación que suele existir entre docentes de diferentes asignaturas. La incorporación de talleres en la propuesta curricular tiene el propósito de promover en los estudiantes el aprendizaje a través problemas que simulen posibles situaciones laborales una vez graduado, desde una perspectiva interdisciplinaria a través de la realización de actividades que permitan la integración horizontal y vertical de contenidos y prácticas. Es por eso que esta propuesta de innovación radica en el diseño de un taller de resolución de problemas de la práctica profesional en el área de sanidad porcina, en el cual se genere un espacio de integración de contenidos de los cursos de Enfermedades de Rumiantes y Cerdos, Inmunología Animal Aplicada y Clínica y Sanidad de los cerdos. La intención es generar un dispositivo que intente romper con el paradigma preponderante en la Facultad de Ciencias Veterinarias, mediante una reestructuración de las formas en que los estudiantes experimentan los contenidos curriculares y el aprendizaje en el aula, especialmente en los recorridos finales de la carrera, donde la fragmentación curricular influye directamente con el ejercicio de la práctica. Se apunta a lograr una experiencia interdisciplinaria con el aporte de los docentes de los tres cursos mencionados en forma simultánea en referencia a la resolución de problemas contextualizados en relación al manejo de la especie porcina. La modalidad de trabajo a partir de una situación problemática real en un espacio de taller constituye una herramienta potente que permitirá revisitar a los estudiantes conceptos tratados previamente en otros años de la carrera para así integrar conocimientos adquiridos en diferentes contextos, y por otro lado presentar casos que puedan recrearse en el trabajo profesional futuro.Asesora pedagógica: Mag. Verónica Mancini.Facultad de Ciencias Veterinaria

Rol de los animales silvestres como reservorios de virus patógenos

El jabalí es, posiblemente, la especie de la fauna silvestre con mayor relevancia sanitaria para los humanos y los animales domésticos. Ello se debe a su amplia distribución geográfica y su abundancia creciente, pero sobre todo al hecho de tratarse de la especie que le dio origen al cerdo doméstico cuya carne es aprovechada para el consumo humano.Trabajo publicado en Cagliada, Maria del Pilar Lilia y Galosi, Cecilia Mónica (comps.). I Congreso de Microbiología Veterinaria. Libro de resúmenes. La Plata: Facultad de Ciencias Veterinarias, 2021.Facultad de Ciencias Veterinaria

Evaluation of apoptosis markers in different cell lines infected with equine arteritis virus

Equine arteritis virus (EAV) induces apoptosis in infected cells. Cell death caused by EAV has been studied mainly using three cell lines, BHK-21, RK-13 and Vero cells. The mechanism of apoptosis varies among cell lines and results cannot be correlated owing to differences in EAV strains used. We evaluated different markers for apoptosis in BHK-21, RK-13 and Vero cell lines using the Bucyrus EAV reference strain. Acridine orange/ethidium bromide staining revealed morphological 10 changes in infected cells, while flow cytometry indicated the extent of apoptosis. We also observed DNA fragmentation, but the DNA ladder was detected at different times post-infection depending on the cell line, i.e., 48, 72 and 96 h post-infection in RK-13, Vero and BHK-21 cells, respectively. Measurement of viral titers obtained with each cell line indicated that apoptosis causes interference with viral replication and therefore decreased viral titers. As an unequivocal 15 marker of apoptosis, we measured the expression of caspase-3 and caspases-8 and −9 as extrinsic and intrinsic markers of apoptosis pathways, respectively. Caspase-8 in BHK-21 cells was the only protease that was not detected at any of the times assayed. We found that Bucyrus EAV strain exhibited a distinctive apoptosis pathway depending on the cell line.Facultad de Ciencias Veterinaria

Evaluation of apoptosis markers in different cell lines infected with equine arteritis virus

Equine arteritis virus (EAV) induces apoptosis in infected cells. Cell death caused by EAV has been studied mainly using three cell lines, BHK-21, RK-13 and Vero cells. The mechanism of apoptosis varies among cell lines and results cannot be correlated owing to differences in EAV strains used. We evaluated different markers for apoptosis in BHK-21, RK-13 and Vero cell lines using the Bucyrus EAV reference strain. Acridine orange/ethidium bromide staining revealed morphological 10 changes in infected cells, while flow cytometry indicated the extent of apoptosis. We also observed DNA fragmentation, but the DNA ladder was detected at different times post-infection depending on the cell line, i.e., 48, 72 and 96 h post-infection in RK-13, Vero and BHK-21 cells, respectively. Measurement of viral titers obtained with each cell line indicated that apoptosis causes interference with viral replication and therefore decreased viral titers. As an unequivocal 15 marker of apoptosis, we measured the expression of caspase-3 and caspases-8 and −9 as extrinsic and intrinsic markers of apoptosis pathways, respectively. Caspase-8 in BHK-21 cells was the only protease that was not detected at any of the times assayed. We found that Bucyrus EAV strain exhibited a distinctive apoptosis pathway depending on the cell line.Facultad de Ciencias Veterinaria

CIRCULACIÓN Y CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE ROTAVIRUS Y CORONAVIRUS ASOCIADOS A CUADROS ENTERICOS EN CERDOS DE MATERNIDAD DE SISTEMAS INTENSIVOS

Las diarreas neonatales constituyen uno de los problemas sanitarios más importantes durante la etapa de lactancia en explotaciones porcinas intensivas a nivel mundial ya que resultan en grandes pérdidas económicas. Las causas de diarrea neonatal son multifactoriales y multietiológicas y en muchas ocasiones la presentación de los cuadros entéricos en las granjas es endémica. Dentro de los agentes más frecuentemente asociados con diarrea neonatal podemos mencionar a: rotavirus y coronavirus, Escherichia coli, Clostridium perfringens tipos A y C, Clostridium difficile, Cryptosporidium spp. y Cystoisospora suis (Aguirre y col., 2000; Sanz y col., 2007; Cappuccio y col., 2009). El plan de investigación propuesto se encuentra dirigido al estudio de las causas virales de los cuadros entéricos de maternidad y tiene como objetivo investigar la presencia y diversidad genética de rotavirus (RV) y coronavirus (CoV) de la gastroenteritis trasmisible (TGE) en lechones nacidos en granjas confinadas de ciclo completo de la República Argentina. Para esto se realizará en primer lugar la selección de 4 granjas porcinas de sistema intensivo que presenten cuadros clínicos de diarrea en maternidad compatible con infección viral. Se realizarán muestreos en cada estación del año (invierno, primavera, verano y otoño) que consistirán en la obtención de datos de bioseguridad mediante una encuesta, evaluación clínica poblacional, recolección de 30 muestras de materia fecal y realización de necropsias de 3-5 lechones con obtención de muestras de intestino y otros órganos con lesión macroscópica para estudios histopatológicos. En una segunda etapa, se realizará la detección molecular del genoma viral a partir de las muestras de materia fecal obtenidas, utilizando para la misma la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de rotavirus A, B, C y coronavirus de la gastroenteritis transmisible (TGEv). A partir de estas detecciones se realizará la posterior secuenciación del genoma para estudios filogenéticos y técnicas complementarias para evidenciar la presencia de estos agentes: electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), visualización mediante microscopía electrónica y aislamiento viral. Por otro lado, a partir de las muestras obtenidas de las necropsias se realizarán estudios histopatológicos mediante muestras de rutina y tinción con hematoxilina y eosina. Se observará la presencia de lesiones compatibles con enteritis viral y posteriormente se realizarán estudios inmunohistoquímicos para la identificación de TGEV y Rotavirus A en cortes de intestino delgado. Finalmente se realizará el análisis de los datos obtenidos mediante una regresión lineal para evaluar la asociación entre el porcentaje de animales positivos hallados a las pruebas implementadas y el cuadro clínico presente y se realizará una descripción de la bioseguridad externa e interna de las granjas estudiadas

Expression of M Protein from LP02/C Equine Arteritis Virus Inhibits Growth of <i>Escherichia Coli</i> M15-pQE30 System

Our objective was to obtain Equine Arteritis Virus M protein in prokaryotic system to test it as immunogen. LP02/C Equine Arteritis Virus cDNA was used as template to obtain and clone this protein. Equine Arteritis M protein was cloned in the expression vector pQE30 and the recombinant plasmid pQE30/M was transformed in Escherichia Coli M15 cells. The OD600 values of the IPTG-induced M15-pQE30/M culture showed an inhibition of the kinetics growth compared with the non-induced M15-pQE30/M and positive M15-pQE40/DHFR cultures. Several factors such as growth temperature, IPTG concentration and different inductors were analyzed but any of them showed an improvement in protein expression. Instead of E. coli M15strain, a new strain (E. coli BL21) was used and transformed with the pQE30/M. This resolved in part the growth inhibition observed in E. coli M15 cells, but no the recovery yield of the protein. So, as all gene products that affect cells kinetics growth are considered to be toxic, we argue that the lower yields in M protein recovery could be attributed to an associated toxicity of EAV-M protein from LP02/C strain in this expression system.Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV

Equine arteritis virus gP5 protein induces apoptosis in cultured insect cells

Equine Arteritis Virus (EAV) has been shown to induce apoptosis in vitro but the induction of this mechanism has not been previously associated with any viral gene product. In this work, we found a cytotoxicity effect of the EAV gP5 protein on baculovirus-insect cells and a low yield of protein recovery. Besides, different morphological features by electron transmission microscopy, DNA fragmentation in agarose gel, TUNEL analysis and caspase 3 activity were found. All these findings indicate that the EAV gP5 protein induces apoptosis in insect cells.Instituto de Genética VeterinariaFacultad de Ciencias Veterinaria

Caracterización de cepas de campo de <i>Herpesvirus suino 1</i> aisladas en Argentina

Se caracterizaron cepas argentinas de herpesvirus suino tipo 1 (HVS-1) mediante corte con las enzimas de restricción BamHI, BstEII y XhoI. La presencia del tipo genómico II había sido reportada en la Argentina una sola vez y, hasta el momento, no se han informado nuevos casos. Este estudio reveló una homogeneidad de los sitios BamHI, acorde con el número y el tamaño de los fragmentos. La presencia del fragmento BamHI #7 en los aislamientos argentinos analizados sugiere que éstos pertenecen al tipo salvaje (wild-type). Además, se caracterizó el principal dominio inmunogénico de la glicoproteína E de todas las cepas argentinas y se lo comparó con los de las cepas de referencia y con las secuencias disponibles en la base de datos GenBank. Los porcentajes de similitud obtenidos oscilaron entre 99 y 100%.The genomic characterization of Suid herpesvirus 1 (SHV-1) isolates from Argentina was accomplished by restriction pattern analysis using the BamHI, BstEII and XhoI enzymes. Type II genome has been described only once in Argentina. This study revealed considerable homogeneity of BamHI endonuclease sites in all the strains analyzed, according to the number and size of the fragments. No deletion of BamHI fragment #7 among the Argentinean isolates suggests that these strains are wild-type. In addition, the main antigenic domain of glycoprotein E of all the Argentinean strains, as well as the reference strains and sequences available in the GenBank, were characterized. The similarity percent oscillated between 99 and 100%.Facultad de Ciencias Veterinaria

Caracterización de cepas de campo de <i>Herpesvirus suino 1</i> aisladas en Argentina

Se caracterizaron cepas argentinas de herpesvirus suino tipo 1 (HVS-1) mediante corte con las enzimas de restricción BamHI, BstEII y XhoI. La presencia del tipo genómico II había sido reportada en la Argentina una sola vez y, hasta el momento, no se han informado nuevos casos. Este estudio reveló una homogeneidad de los sitios BamHI, acorde con el número y el tamaño de los fragmentos. La presencia del fragmento BamHI #7 en los aislamientos argentinos analizados sugiere que éstos pertenecen al tipo salvaje (wild-type). Además, se caracterizó el principal dominio inmunogénico de la glicoproteína E de todas las cepas argentinas y se lo comparó con los de las cepas de referencia y con las secuencias disponibles en la base de datos GenBank. Los porcentajes de similitud obtenidos oscilaron entre 99 y 100%.The genomic characterization of Suid herpesvirus 1 (SHV-1) isolates from Argentina was accomplished by restriction pattern analysis using the BamHI, BstEII and XhoI enzymes. Type II genome has been described only once in Argentina. This study revealed considerable homogeneity of BamHI endonuclease sites in all the strains analyzed, according to the number and size of the fragments. No deletion of BamHI fragment #7 among the Argentinean isolates suggests that these strains are wild-type. In addition, the main antigenic domain of glycoprotein E of all the Argentinean strains, as well as the reference strains and sequences available in the GenBank, were characterized. The similarity percent oscillated between 99 and 100%.Facultad de Ciencias Veterinaria

Extended phylogeny of the equine arteritis virus sequences including South American sequences

Objective: To perform genetic analysis of the ORF5 of equine arteritis virus (EAV) may provide new insights into the genetic evolution and origin of the Argentinean EAV sequences. Methods: A total of 76 sequences were analyzed by neighbor joining (NJ), maximum parsimony and maximum likelihood algorithms. The analysis of the selective pressures was performed using the Tajima's test. Results: The trees showed similar topologies. Two clades were identified: the first clade was formed by strains isolated mainly from a donkey, whereas the second clade presented four large groups from different geographic regions exclusively from Equus caballus. In this clade, we identified a group formed by South African and another one by South American and European sequences. In the latter, the monophyletic group was formed by seven Argentinean sequences. In the NJ tree, we identified a group formed by six Argentinean sequences. The Tajima's test showed a D value of 1.73663, indicating that the sequences analyzed follow a neutral evolution model. Conclusion: We concluded that the Argentinean sequences have a paraphyletic origin and that the fixation of point mutation might follow the neutral model evolution; however, we identified purifying pressures that may be involved in the differentiation of the EAV sequences.Facultad de Ciencias Veterinaria