Análise proteômica de citrumelo "swingle" ( Citrus paradisi Macfad. cv. Duncan x Poncirus trifoliata (l.) Raf. ) com alto acúmulo de prolina em situação de déficit hídrico

Resumo: A citricultura é uma das atividades mais importantes do agronegócio brasileiro e o uso de porta-enxertos está intimamente associado à competitividade dos pomares, pois influencia diversas características agronômicas de interesse da copa. O porta-enxerto citrumeleiro Swingle (Citrus paradisi Macfad. Cv. Duncan x Poncirus trifoliata (L.) Raf.) transformado com o gene mutante P5CSF129A de Vigna acontifolia que codifica para a enzima ?1-pirrolina-5-carboxilato sintetase (P5CS) proporciona alto acúmulo do aminoácido prolina e mostra-se mais tolerante a situações de déficit hídrico quando comparado com plantas não transformadas. O objetivo deste trabalho foi identificar proteínas diferencialmente expressas em plantas de citrumeleiro "Swingle" com alto acumulo de prolina, devido à expressão constitutiva do transgene P5CSF129A sob controle do promotor 35S CaMV, tanto em condições de déficit hídrico como em condições normais de suprimento de água. O estado hídrico nas folhas foi monitorado através de psicrômetros e as análises foram feitas em tecidos foliares de plantas transformadas e não transformadas com suprimento hidrico adequado (?t = -1,1 a -1,5 MPa) e em situacao de estresse (?t = de -3,0 a -3,5 MPa). A expressão diferencial de proteínas devido ao alto acúmulo de prolina foi feita comparando-se plantas controles e transgênicas em condições normais de suprimento de água. Já as comparações entre plantas transgênicas irrigadas e estressadas foram realizadas para identificar diferenças de expressão nas plantas com alto acúmulo de prolina devido ao estresse, enquanto comparações entre plantas controle em situação irrigada e estressada visaram identificar proteínas expressas em plantas não-transformadas devido ao estabelecimento de estresse hídrico. Os teores de prolina livre nas amostras foliares em condição irrigada mostraram-se cerca de 2,5 vezes maiores nas plantas transgênicas do que nas plantas controle. Com a imposição do estresse, os níveis de prolina mantiveram-se praticamente constantes nas plantas transgênicas (cerca de 350 ?mol g. MF-1) e aumentaram em media 40% nas plantas controle (175 ?mol g. MF-). Para análise proteômica, proteínas totais de tecido foliar, extraídas pelo método fenol/SDS, foram separadas por eletroforese bi-dimensional utilizando tiras IPG de 13 cm em pH 4- 7 na primeira dimensão para posterior separação por SDS PAGE. As imagens dos géis foram analisadas com programa ImageMaster Platinum 6.0 para identificação dos spots diferenciais devido ao acúmulo de prolina ou estresse hídrico. Estes spots foram digeridos com tripsina e os peptídeos analisados com espectrômetro de massa MALDI-TOF-TOF possibilitando a identificação de 17 proteínas por Peptide Mass Fingerprinting (PMF), sequenciamento de novo e MS/MS íon search. As buscas foram feitas no programa Mascot para análises de PMF e MS/MS íon search, ou a partir de comparações das seqüências geradas pelo sequenciamento de novo com dados do NCBI (National Center for Biotechnology Information). As comparações entre as plantas controle nas duas situações hídricas (irrigado e estressado) possibilitaram a identificação das proteínas ATP sintase subunidade b, taxano 2-alfa-O-benzoiltransferase, proteína de ligação a clorofila a/b, proteína de ligação ao RNA rica em glicina, álcool desidrogenase, promotor de crescimento independente de auxina e rubisco ativase. Quando comparadas as plantas transgênicas irrigadas e estressadas, identificaram-se as proteínas ATP sintase subunidades b e ?, fosfoglicerato quinase, receptor de etileno e complexo de evolução do oxigênio (OEC). Já ao se contrastar plantas controle e transgênicas em condições normais de suprimento hídrico foram identificadas as proteínas lectina, hemoglobina e miraculina

The Arabidopsis immune receptor EFR increases resistance to the bacterial pathogens Xanthomonas and Xylella in transgenic sweet orange

Citrus agribusiness faces major economic losses due to bacterial diseases (Caserta et al., 2020). Citrus canker (CC) and citrus variegated chlorosis (CVC) caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) and Xylella fastidiosa subsp. pauca (Xfp), respectively, are important threats in commercial citrus orchards. All sweet orange (Citrus sinensis) commercial varieties are susceptible to both pathogens, and no natural resistance has been found so far

Near-edge X-ray absorption spectroscopy signature of image potential states in multilayer epitaxial graphene.

Single layer behavior in multilayer epitaxial graphene has been a matter of intense investigation. This is due to the layer decoupling that occurs during growth of graphene on some types of substrates, such as carbonterminated silicon carbide. We show here that near-edge X-ray absorption spectroscopy can be used to observe the signature of this decoupling. To this end, samples of multilayer graphene from silicon carbide sublimation were grownwith different degrees of decoupling. Raman spectroscopy was used to infer the degree of structural decoupling. X-ray grazing-incidence diffraction and scanning tunneling microscopy showed that growth initiates with the presence of bilayer graphene commensurate structures, while layer decoupling is associated to the formation of incommensurate structures observed for longer sublimation time. Near-edge X-ray absorption spectroscopywas used to probe the electronic states above the Fermi energy. Besides the σ* and π* empty states, image potential states are observed and show a clear change of intensity as a function of incident angle. These image potential states evolve from a graphite- to graphene-like behavior as a function of growth time and can be used to infer the degree of structural coupling among layers

Synthesis of piplartine analogs and preliminary findings on structure–antimicrobial activity relationship

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2018-04-23T14:10:54Z No. of bitstreams: 1 Fregnam AM Synthesis of piplartine.pdf: 1853217 bytes, checksum: 194ed12d0c7b2d0823762280877833fa (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2018-04-23T14:32:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Fregnam AM Synthesis of piplartine.pdf: 1853217 bytes, checksum: 194ed12d0c7b2d0823762280877833fa (MD5)Made available in DSpace on 2018-04-23T14:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fregnam AM Synthesis of piplartine.pdf: 1853217 bytes, checksum: 194ed12d0c7b2d0823762280877833fa (MD5) Previous issue date: 2017FAPEMIG (APQ-01209-13), CAPES, CNPq and FINEP.Universidade Federal de Alfenas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Química. Alfenas, MG, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Hospital São Rafael. Centro de Biotecnologia e Terapia Celular. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Hospital São Rafael. Centro de Biotecnologia e Terapia Celular. Salvador, BA, BrasilFundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Ciências Biomédicas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Ciências Biomédicas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Ciências Biomédicas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Ciências Biomédicas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Ciências Biomédicas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Química. Alfenas, MG, BrasilUniversidade Federal de Alfenas. Instituto de Química. Alfenas, MG, BrasilAbstract In this work it is described the synthesis, characterization and antimicrobial and toxicity evaluation of a series of analogs of piplartine, a piperamide found in Piper sp. The compounds structures were confirmed by infrared spectroscopy, 1H, 13C nuclear magnetic resonance, high resolution mass spectroscopy and were evaluated against strains of Candida spp., Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. Derivative 24 was almost four-fold more potent (IC50: 48.83 μM) and five-fold less toxic (SI > 3) than piplartine (IC50: 189.2 μM; SI: 0.21) against Candida krusei, as well as two-fold more potent than fluconazole (IC50: 104.48 μM). This compound was also active against Candida tropicalis at 97.67 μM. Benzoyl derivative 17 was three-fold more potent (IC50: 85.2 μM) and more than five-fold less toxic (CC50: 231.71 μM) than piplartine (IC50: 315.33 μM and CC50: 41.14 μM) against Staphylococcus aureus. Given these findings, we have found analogs of piplartine which can be assumed as prototypes for the optimization and the development of new antimicrobial (compounds 24 and 17) agents

Correlation between DNA/HSA-interactions and antimalarial activity of acridine derivatives: Proposing a possible mechanism of action

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-02-04T12:52:10Z No. of bitstreams: 1 SILVA, M.M. Correlation between DNA-HSA...2018.pdf: 1799843 bytes, checksum: 61b5a53ca8fb1166e0656deb9687d441 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio ([email protected]) on 2019-02-04T13:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 SILVA, M.M. Correlation between DNA-HSA...2018.pdf: 1799843 bytes, checksum: 61b5a53ca8fb1166e0656deb9687d441 (MD5)Made available in DSpace on 2019-02-04T13:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SILVA, M.M. Correlation between DNA-HSA...2018.pdf: 1799843 bytes, checksum: 61b5a53ca8fb1166e0656deb9687d441 (MD5) Previous issue date: 2018Instituto de Química e Biotecnologia (UFAL), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), FAPEAL (Process number 60030 000863/2016), FAPESB, FAPESQ and FACEPE. This study was financed in part by the Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Finance Code 001.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Hospital São Rafael. Centro de Biotecnologia e Terapia Celular. Salvador, BA, Brasil.Universidade Estadual da Paraíba. Laboratório de Síntese e Vetorização de Moléculas. Departamento de Ciências Biológicas. João Pessoa, PB, Brasil.Universidade Estadual da Paraíba. Laboratório de Síntese e Vetorização de Moléculas. Departamento de Ciências Biológicas. João Pessoa, PB, Brasil.Universidade Estadual da Paraíba. Laboratório de Síntese e Vetorização de Moléculas. Departamento de Ciências Biológicas. João Pessoa, PB, Brasil.Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório de Planejamento e Síntese de Fármacos. Departamento de Antibióticos. Recife, PE, Brasil.Universidade Estadual da Paraíba. Laboratório de Síntese e Vetorização de Moléculas. Departamento de Ciências Biológicas. João Pessoa, PB, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil / Universidade Federal de Alagoas. Laboratório de Química Medicinal, Escola de Enfermagem e Farmácia. Macéio, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil / Universidade Federal de Alagoas. Laboratório de Química Medicinal, Escola de Enfermagem e Farmácia. Macéio, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Universidade Federal de Alagoas. Instituto de Química e Biotecnologia. Maceió, AL, Brasil.Acridines are considered an important class of compounds due to their wide variety of biological activities. In this work, we synthesized four acridine derivatives (1-4) and evaluated their biological activity against the Plasmodium falciparum W2 line, as well as studied the interaction with ctDNA and HSA using spectroscopic techniques and molecular docking. The acridine derivative 2 (IC50 = 0.90 ± 0.08 μM) was more effective against P. falciparum than primaquine (IC50 = 1.70 ± 0.10 μM) and similar to amsacrine (IC50 = 0.80 ± 0.10 μM). In the fluorescence and UV-vis assays, it was verified that the acridine derivatives interact with ctDNA and HSA leading to a non-fluorescent supramolecular complex formation. The non-covalent binding constants ranged from 2.09 to 7.76 × 103 M-1, indicating moderate interaction with ctDNA. Through experiments with KI, fluorescence contact energy transfer and competition assays were possible to characterize the main non-covalent binding mode of the acridines evaluated with ctDNA as intercalation. The binding constants obtained showed a high linear correlation with the IC50 values against the antimalarial activity, suggesting that DNA may be the main biological target of these molecules. Finally, HSA interaction studies were performed and all evaluated compounds bind to the site II of the protein. The less active compounds (1 and 3) presented the highest affinity to HSA, indicating that the interaction with carrier protein can affect the (bio)availability of these compounds to the biological target