PERFIL DE RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE Staphylococcus aureus ISOLADOS DE GRANJAS E FRIGORÍFICOS DE SUÍNOS

Microrganismos da espécie S. aureus são responsabilizados por diversos problemas clínicos em suinocultura e humanos. Estudos epidemiológicos comprovam o potencial deste microrganismo em adquirir resistência a antibióticos. Atualmente, estirpes resistentes a meticilina conhecida pela sigla MRSA derivada do inglês (Meticilin Resistant Staphylococcus aureus), responsabilizados por casos de infecções nosocomiais, são as mais estudadas uma vez que o MRSA encontra-se disseminado em ambientes extra-hospitalares e frenquentemente tem sido isolado de vários animais domésticos inclusive suínos. O objetivo desde trabalho foi determinar a presença de S. aureus em granjas de suínos, identificar a ocorrência dos genes mecA, icaA e icaD e o perfil de resistência a antimicrobianos. Ao todo colheram-se 458 amostras de cinco granjas e dois frigoríficos. As amostras foram semeadas em ágar Braid - Parker e ágar sangue seguido de provas bioquímicas. As amostras sugestivas, foram submetidas a PCR para confirmação de espécie, detecção do gene coa para confirmação da espécie, mecA para avaliar a resistência a meticilina além dos genes de virulência icaA e  icaD que expressam capacidade para formação de biofilmes. Na sequência, realizou-se o antibiograma para a avaliação de 11 antimicrobianos.  Ao todo foram identificados 81 (79%) S. aureus isolados de todas as granjas e frigoríficos incluindo quatro amostras isoladas de funcionários das granjas. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. Em relação aos genes icaA e icaD, observou predomínio do gene icaD e que 41% das amostras foram positivas para os dois genes. O antibiograma demonstrou grande resistência às penicilinas e tetraciclinas, além de grande quantidade de S aureus multirresistentes.

Associação das técnicas anatômicas de desidratação por insuflação com plastinação em pulmões de animais / Association of anatomical techniques of dehydration by insufflation with plastination in animal lungs

1 INTRODUÇÃOA conservação de peças anatômicas em meios líquidos é comumente realizada, utilizando-se para tanto combinações de soluções fixadoras, formaldeído e glicerina, sendo um passo importante para a preservação (RODRIGUES, 2010). No entanto, a agência internacional de pesquisas sobre O cancêr afirmou que a exposição crônica a substâncias tóxicas podem ser deletérias ao organismo, contribuindo com o aparecimento de neoplasias malignas (VISCUSO, 2011; STERLING & WEINKAM, 1989; KILBURN et al., 1989).Dentre as alternativas para confecção de peças secas, incluem-se a insuflação-desidratação pulmonar e a plastinação. Na primeira obtém-se pulmões permanentemente insuflados, introduzindo-se ar comprimido na traqueia e possibilitando uma dessecação gradual em um tempo variado (VISCUSO, 2011). Já na plastinação, para se manter a estrutura e características originais das peças, utiliza-se a impregnação com polímero sob pressão. Para melhorar a qualidade e o tempo de vida útil das peças anatômicas, pode ser utilizada a combinação das técnicas de insuflação-desidratação e finalização com polímeros curáveis (HENRY & BUTLER, 1990; MCKIERNAN & KENELLER 1983).  A confecção de peças antômicas secas vem ganhando cada vez mais espaço nos laboratórios. Apesar de ainda não existir um número signicativo de trabalhos com esse enfoque, há uma tendência da não utilização de líquidos tóxicos para conservação de peças, visando melhorar a salubridade do ambiente de trabalho e estudo, proporcionando peças com maior qualidade e durabilidade. 2 BASE TEÓRICAExistem duas maneiras de obter insuflação pulmonar: aplicando pressão positiva nas vias aéreas ou pressão negativa ao redor dos pulmões. Assim, a pressão intrapulmonar ou a complacência do pulmão determinarão o grau de expansão. A tensão superficial ao nível do alvéolo altera a relação pressão/volume. Quando a insuflação é feita com líquido, a complacência é quase o dobro em relação ao ar. Quando é utilizado um fixador líquido ou gasoso para insuflar o pulmão, a complacência se altera à medida em que houver a fixação do tecido (SÁ,1988).Para melhor observação da peça insuflada é preciso manter o pulmão como se estivesse pausado no meio da inspiração. O tempo necessário para insuflação irá depender de qual espécie animal está sendo utilizada para trabalhar. De acordo com Mckiernan & Keneller (1983), para pulmões de gatos, é necessário um período de 3 a 4 dias de insuflação; para cachorros, ao redor de 7 dias; e para espécies de grande porte (equinos e bovinos) precisa-se de um tempo de até 2 semanas para insuflação.Na técnica de plastinação, os espaços intracelulares e extracelulares dos tecidos são incorporados com polímeros. Uma das etapas é a desidratação com acetona ou etanol, sendo a água celular atraída para o meio mais concentrado através da difusão. Após isso, ela é substituída com vácuo por materiais plásticos, como por exemplo as resinas, ocorrendo o preenchimento gradual dos tecidos (ANDREOLI, 2012). Contudo, essa técnica pode ter alto valor para sua realização, além de ser necessário longo período para impregnação, tornando de difícil acesso para a comunidade acadêmica das universidades públicas (CORTEZ, 2016; ABUMANDOUR & EL-BAKERY, 2019). 3 OBJETIVOSCom o presente trabalho objetivou-se a confecção de peças pulmonares pela associação das técnicas de desidratação-insuflação e plastinação, com adaptações para exemplares maiores. Além disso, buscou-se o desenvolvimento de metodologias salubres e de baixo custo para fabricação de peças secas. 4 METODOLOGIAPara o desenvolvimento dessa associação de técnicas foram utilizadas três exemplares de pulmões, sendo 2 bovinos e 1 suíno, obtidos por doação do Matadouro Municipal para o Laboratório de Anatomia Veterinária - LANVET da Universidade Federal de Jataí - UFJ. As adaptações das técnicas para confecção das peças foram baseadas nas aplicações feitas por Viscuso (2011) associadas à finalização com polímero, como proposto por Henry & Butler (1990) e Gomez & Aburto (2006), combinando assim as técnicas de plastinação com insuflação. Porém, os trabalhos anteriores utilizaram substâncias químicas nocivas, como formol, xilol e peróxido de hidrogênio. Assim, para atender à necessidade da aplicação de antissépticos e fixadores, no presente estudo foram realizados os processos iniciais e finais descritos por Fontana et al. (2019 A), Fontana et al. (2019 B) e Helrigle et al. (2019).Após a morte do animal foi necessária a remoção imediata dos pulmões para sua utilização. A extração foi iniciada na cavidade torácica, procedendo-se sua dissecação. Ao nível da união costocondral e ao redor da união costovertebral realizaram-se cortes que seccionaram, respectivamente, as pregas ventral e dorsal do ligamento pulmonar. Foi necessário a remoção das veias e artérias pulmonares, coração, tecido conjuntivo, nódulos linfáticos associados e coágulos. Realizaram-se pequenas incisões para o desprendimento da pleura visceral do parênquima pulmonar, permitindo maior secagem dos lobos.Na sequência os pulmões foram lavados com água corrente, sendo esta administrada através da traqueia para expansão das vísceras, possibilitando também a saída de sangue e coágulos. Na limpeza dos órgãos foi necessário realizar a massagem deles durante a introdução da água corrente, facilitando a distensão homogênea dos lobos pulmonares.Antes da etapa de insuflação-desidratação introduziu-se etanol a 96% no interior dos pulmões até o preenchimento do espaço traqueobronquial. Esse procedimento permitiu a fixação da peça, além da desidratação durante sua volatilização no órgão expandido (insuflado).Para realização da técnica de insuflação-desidratação pulmonar, através da traqueia aplicou-se ar comprimido a uma determinada pressão, permitindo a secagem gradual com as peças em insuflação permanente. Os pulmões utilizados permaneceram insuflados por períodos suficientes para se atingir a total desidratação, mantendo-se uma expansão intermediária da inspiração.Foi utilizado um compressor elétrico. Incialmente com uma pressão mais baixa, para que os pulmões inflassem de forma lenta, sem causar danos à peça. Assim que a desidratação atingiu maior grau, essa pressão foi aumentada. Posteriormente, conforme os órgãos mantinham o tamanho, essa pressão era novamente reduzida. Através de manômetros foi possível regular a pressão desejada no tanque e também a pressão de saída do tanque. O ar comprimido foi introduzido na traqueia com auxílio de um tubo de silicone, sendo os pulmões mantidos na horizontal sobre uma superfície lisa, virando-se as peças a cada 12 horas. Após 52 horas as peças foram fixadas na posição vertical, por 24 horas, em continua pressão, para não deformar os lobos craniais e proporcionar a distribuição uniforme do ar.A desidratação foi realizada previamente, na etapa da insuflação-desidratação, sem o uso de acetona ou etanol como na técnica de origem. Para melhor proteção e durabilidade da peça anatômica, foi aplicado resina poliéster, que além de melhorar o aspecto estético, também tornou a peça mais resistente à continua manipulação e umidade das mãos, principalmente por ser utilizada como material de estudo para acadêmicos de medicina veterinária e zootecnia. 4 RESULTADOS E DISCUSSÃOObservou-se que os resultados foram satisfatórios, pois os pulmões com a técnica de insuflação-desidratação, em conjunto com uma adaptação da plastinação, apresentaram um aspecto de maior durabilidade e melhoria na textura, além de proporcionar fácil manipulação da peça, sem necessidade de manutenção. Vale lembrar que a utilização de líquidos conservantes, como por exemplo o formol, é prejudicial à saúde devido a sua alta toxicidade. Materiais secos também facilitam o manuseio para o estudo, já que dispensam o uso de luvas e facilitam a identificação de detalhes anatômicos do órgão, deixando o aspecto visual com melhor qualidade estética.O tempo necessário de insuflação-desidratação nos pulmões de bovinos foi de 96 horas. Já para os pulmões suínos foi de 72 horas. Para ocorrer uma insuflação satisfatória, inicialmente foi aplicada uma pressão de 2,0 bar para os pulmões bovinos e, assim que a peça ficou mais desidratada, introduziu-se uma pressão de até 3,0 bar. Após o pulmão se estabilizar, a pressão foi diminuída para 2,0 bar. O mesmo procedimento foi seguido no pulmão de suíno, sendo as pressões de 1,5 bar; 2,0 bar e 1,6 bar, respectivamente (Figuras 1, 2 e 3). Figura 1: Pulmões bovinos de 4,0 kg. A- Processo de lavagem com pressão; B- 24 h pós lavado com pressão e introdução de álcool etílico a 96% e iniciando insuflação com 2,0 bar; e C- 72 h de insuflação com 3,0 bar. Figura 2: Pulmões suínos de 2,0 Kg. A- inflado por 24 h a uma pressão de 1,5 bar; B- inflado por 52 h a uma pressão de 2,0 bar; e C- inflado por 72 h a uma pressão de 1,6 bar.  Figura 3: Pulmões bovinos 3,035 kg. A- descongelado e lavado com água corrente; B- pesagem; C- lavado com pressão e introdução de álcool etílico a 96% e iniciando insuflação com 2,0 bar.  As peças finalizadas, após aplicação da resina poliéster, podem ser observados na Figura 4. Após a finalização de todo o procedimento observou-se que a etapa de lavagem sob pressão deverá ser melhorada, aumentando o tempo de lavagem com água corrente nas peças maiores pois, devido à dimensão, ainda foram identificados resíduos de sangue. Adicionalmente, vale lembrar que quando a dissecação foi realizada de maneira adequada, o tempo de secagem dos pulmões foi menor, assim como sugerido por GOMEZ & ABURTO (2006).    5 CONCLUSÃO/CONSIDERAÇÕES FINAISA adaptação das técnicas para as possibilidades financeiras das universidades públicas trouxeram efeitos muito positivos para a confecção de peças anatômicas secas, uma vez que, além da redução de custos, facilitou o manuseio e a manutenção das mesmas, sem o cheiro forte característico. Adicionalmente, proporcionou facilidade para transporte do material e facilitou a observação de detalhes na peça, melhorando a qualidade no estudo dos graduandos. Desta forma, podemos concluir que devemos continuar com as pesquias nessas técnicas anatômicas, buscando aperfeiçoamento e adquirindo assim um alto nível de qualidade, mesmo com orçamento racionado

Mananoligossacarídeo em dietas para leitões desmamados

Foi realizado um ensaio com o objetivo de avaliar o uso de mananoligossacarídeo (MOS) em dietas para leitões na fase de creche, quanto ao desempenho, incidência de  diarreia e parâmetros sanguíneos. Foram comparados diferentes níveis de MOS (0, 0,1 e 0,2%) em dietas para leitões desmamados aos 21 dias de idade com peso de 5,28 ± 0,90 kg, sendo utilizados 72 animais da linhagem comercial Topigs (36 machos castrados e 36 fêmeas). Utilizou-se o delineamento em blocos ao acaso para controlar diferenças iniciais de peso. Os resultados demonstraram que a inclusão de MOS nas dietas de leitões recém desmamados não promoveu melhoras no ganho diário de peso, no consumo diário de ração e na conversão alimentar. Embora tenha sido observada redução na incidência de diarreia nos animais alimentados com dieta contendo 0,2% de MOS, a adição deste prebiótico não proporcionou melhores desempenho e resposta imunológica dos leitões. Com estes resultados, não é possível recomendar a adição de nenhum nível do produto avaliado.An assay was carried out to evaluate the use of mannanoligosaccharide (MOS) in piglet diets on performance, diarrhea incidence and blood parameters. Different levels of MOS inclusion (0, 0.1 and 0.2%) for pig diets were compared. A total of 72 piglets of Topigs lineage weaned at 21 days of age with 5.28 ± 0.90 kg of live weight were used. It was used a randomized block design to control differences between initial weights of replicates. The results show that MOS inclusion in weaning pig diets did not promote better results on daily weight gain, daily feed intake and feed conversion. Although reduction in diarrhea incidence was observed in animals fed with 0.2% MOS diet, this prebiotic did not improve the immune response of piglets. Any level of MOS evaluated is recommended for piglets

Staphylococcus aureus na cadeia produtiva de suínos e perfil de resistência a antimicrobianos

S. aureus é responsabilizado por diversos problemas clínicos em suinocultura e em humanos. Estudos epidemiológicos comprovam o potencial deste microrganismo em adquirir resistência a antibióticos. Atualmente estirpes resistentes a meticilina (MRSA), responsabilizados por casos de infecções nosocomiais, são as mais estudadas uma vez que o MRSA encontra-se disseminado em ambientes extra-hospitalares e frenquentemente tem sido isolado de vários animais domésticos inclusive suínos. O objetivo desde trabalho foi determinar a presença de S. aureus em granjas de suínos, identificar a ocorrência dos genes mecA, icaA e icaD e o perfil de resistência a antimicrobianos. Ao todo foram colhidas 458 amostras de cinco granjas e dois frigoríficos. As amostras foram semeadas em ágar Braid - Parker e ágar sangue seguido de provas bioquímicas. As amostras sugestivas, foram submetidas a PCR para confirmação de espécie, detecção do gene coa, mecA para avaliar a resistência a meticilina além dos genes de virulência icaA e icaD que expressam capacidade para formação de biofilmes. Na sequência, realizou-se o antibiograma para a avaliação de 11 antimicrobianos. Ao todo foram identificados 81 (79%) S. aureus isolados de todas as granjas e frigoríficos incluindo, três amostras isoladas de funcionários das granjas. Nenhuma amostra foi positiva para o gene mecA. Em relação aos genes icaA e icaD, observou predomínio do gene icaD e que 41% das amostras foram positivas para os dois genes. O antibiograma demonstrou grande resistência às penicilinas e tetraciclinas, além de grande quantidade de S aureus multirresistentesStaphylococcus aureus are involved in a wide range of clinical problems to swine industry as son in humans. Epidemiological researchs prove his potential to acquire resistantence to antibiotics. Nowadays, methicillin-resistant S. aureus (MRSA) are responsabilized for nosocomial infections and many studies are done because MRSA are spread to extra hospitalar enrivonment and frequentely isolated from domestic animals including pigs. The aim of this study was to determine the presence o S. aureus at swine farms and identify the mecA, icaA and icaD genes and the resistant proflife to antibiotics. Overal, 458 swabs were taked from five pigeris and two slautherhouses. All the samples were placed on Braid – Parker and blood agar follow by biochemical analyses. The suspect colonies were submitted to PCR to confirm the S. aureus species, by the detection of the coa gene, mecA to avaible meticillin-resistant as son to the virulence gens icaA and icaD that can determine slime production. Antibiogram were done to evaluate the response to 11 antibiotics. All pigeris and slautherhouse were positive and 81 (79%) samples were S. aureus positive including three isolates from pigs employeers. The mecA gene was not detected. The icaD gene was most frequent and 41% were positive to both genes. The antibiogram show a lot of samples penicillin and tetraciclin resistant. Most of the samples were multirestantCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES

Infecção experimental por Salmonella enterica subspécie enterica sorotipo Panama e tentativa de transmissão área em leitões desmamados

O objetivo deste trabalho foi avaliar infecção por Salmonella enterica subespécie enterica sorotipo Panama e a possibilidade de transmissão aérea de entre leitões desmamados. Seis leitões recém-desmamados e sadios foram igualmente distribuídos na formação dos três grupos experimentais – o grupocontrole, o grupo infectado e o grupo-sentinela. Os animais foram alojados dois a dois em três câmaras de isolamento especialmente projetadas para o estudo, que garantiam não apenas que os animais fossem mantidos completamente isentos de contacto com o ambiente externo mas que o fluxo de ar unidirecional, no sentido animais-controle - animais infectados – animais-sentinela, fosse a única maneira de disseminação do agente. Salmonella Panama com resistência induzida ao ácido nalidíxico (Salmonella PanamaNal+) foi utilizada na preparação do inóculo. Análises microbiológicas de suabes retais dos animais foram realizadas diariamente em todos os animais durante os 14 dias subseqüentes à inoculação, após o que os animais foram eutanasiados e necropsiados, visando análises microbiológicas de amostras de órgãos internos. As análises bacteriológicas iniciaram-se pelo pré-enriquecimento das amostras, em caldo GN-Hajna para as amostras de fezes e a água peptonada tamponada para os órgãos internos. Prosseguiram pelo enriquecimento em caldo Rappaport-Vassiliadis e em Tetrationato Müller Kaufmann para então serem semeadas nos ágares xilose lisina tergitol 4 (XLT4) e verde-brilhante modificado, ambos suplementados com ácido nalidíxico. Colônias características foram submetidas às provas bioquímicas, em ágar tríplice açúcar ferro (TSI) e ágar ferro lisina (LIA) e posteriormente a avaliação sorológica. Amostras de sangue foram colhidas de todos os animais e, submetidas ao teste ELISA...The aim of this study was to evaluate the experimental infection wich Salmonella serotype Panama and the airborne transmission of among weaned piglets. Six weaned piglets were used and distributed in three groups of animals - group 1 (control), group 2 (infected) and group 3 (sentinels). All animals were housed in three stainless-steel glass isolation cabinets connected by unidirectional airflow air ducts. Animals didn't have contact with the external environment, guaranteeing that airflow was the unique way of the agent's spread. An induced nalidixic acid resistant strain of Salmonella Panama (Salmonella Panama Nal+) were used to induce infection in one of the groups. Bacteriological analyses of rectal swabs were implemented daily within 14 days after inoculation. For bacteriological exams of internal organs animals were euthanized and necropsied. A pre-enrichment in broth GN-Hajna for the fecal samples and in buffered peptone water for the internal organs samples were conducted. Subsequently, samples were transferred to Rappaport-Vassiliadis and Tetrationato Müller Kaufmann. The samples were transferred to the agar xylose-lysine-tergitol 4 (XLT4) and to a modified brilliant green media, both supplemented with nalidixic acid. Characteristic colonies were submitted to the biochemical tests triple sugar iron agar (TSI) and lysine iron agar (LIA) and later to the serological prove. Samples of blood were taken twice - before Salmonella inoculation and before euthanasia of the piglets. Sera was submitted to the ELISA test. Results showed a Salmonella systemic infection in the inoculated animals (infected group), but there were no evidence of Salmonella transmission to the sentinel group

PERFIL DE RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE Staphylococcus aureus ISOLADOS DE GRANJAS E FRIGORÍFICOS DE SUÍNOS

Staphylococcus aureus are involved in a wide range of clinical problems to swine industry as son in humans. Epidemiological researchs prove his potential to acquire resistantence to antibiotics. Nowadays, methicillin-resistant S. aureus (MRSA) are responsabilized for nosocomial infections and many studies are done because MRSA are spread to extra hospitalar enrivonment and frequentely isolated from domestic animals including pigs. The aim of this study was to determine the presence o S. aureus at swine farms and identify the mecA, icaA and icaD genes and the resistant proflife to antibiotics. Overal, 458 swabs were taked from five pigeris and two slautherhouses. All the samples were placed on Braid - Parker and blood agar follow by biochemical analyses. The suspect colonies were submitted to PCR to confirm the S. aureus species, by the detection of the coa gene, mecA to avaible meticillin-resistant as son to the virulence gens icaA and icaD that can determine slime production. Antibiogram were done to evaluate the response to 11 antibiotics. All pigeris and slautherhouse were positive and 81 (79%) samples were S. aureus positive including four isolates from pigs employeers. The mecA gene was not detected. The icaD gene was most frequent and 41% were positive to both genes. The antibiogram show a lot of samples penicillin and tetraciclin resistant. Most of the samples were multirestant

Perfil de resistência a antimicrobianos de Staphylococcus aureus isolados de granjas e frigoríficos de suínos

Staphylococcus aureus are involved in a wide range of clinical problems to swine industry as son in humans. Epidemiological researchs prove his potential to acquire resistantence to antibiotics. Nowadays, methicillin-resistant S. aureus (MRSA) are responsabilized for nosocomial infections and many studies are done because MRSA are spread to extra hospitalar enrivonment and frequentely isolated from domestic animals including pigs. The aim of this study was to determine the presence o S. aureus at swine farms and identify the mecA, icaA and icaD genes and the resistant proflife to antibiotics. Overal, 458 swabs were taked from five pigeris and two slautherhouses. All the samples were placed on Braid - Parker and blood agar follow by biochemical analyses. The suspect colonies were submitted to PCR to confirm the S. aureus species, by the detection of the coa gene, mecA to avaible meticillin-resistant as son to the virulence gens icaA and icaD that can determine slime production. Antibiogram were done to evaluate the response to 11 antibiotics. All pigeris and slautherhouse were positive and 81 (79%) samples were S. aureus positive including four isolates from pigs employeers. The mecA gene was not detected. The icaD gene was most frequent and 41% were positive to both genes. The antibiogram show a lot of samples penicillin and tetraciclin resistant. Most of the samples were multirestant