Estudio del área corticotropa del perro en relación al sexo y variaciones estacionales

The morphological and functional sexual dimorphism of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis (HPA) has been described in various species. There are also some reports about the seasonal variations of this axis. However there are no studies about sexual dimorphism and seasonal variations of this axis in the dog. Thus the objective of this study was to determine whether there are variations in the dog´s HPA hormones (adrenocorticotrophin [ACTH], alfa-melanocyte-stimulating hormone [?-MSH] and cortisol) according to the sex, gonadal status (neutered or not) and photoperiod (positive or negative) in basal condition (like anoestrus) and along the oestrous cycle.\nFurthermore, this study evaluated if the dog shows morphological sexual dimorphism of the corticotroph area of the pituitary gland and zona fasciculata of the adrenal gland; and determined whether these tissues show seasonal variations. The expression of oestrogen receptor alpha (ER?) in the corticotroph cells and zona fasciculata was also evaluated, as well as the progesterone receptor (PR) in the fasciculate zone.\nIn the hormonal assay, the population under study consisted in intact females (n=11), intact males (n=6), neutered males (n=5) and neutered females (n=6).\nThe morphological study was performed by means of an immunohistochemical analysis of pituitary and adrenal glands obtained in negative photoperiod (females [n = 7] and males [n = 7]) and positive photoperiod (females [n = 7] and males [n = 7]) for ACTH in the pituitary gland and for ER?, PR and for the ACTH receptor (melanocortin-2-receptor, MC2R) in the adrenal gland. Double immunofluorescence was performed to identify ER? in corticotrophs. The pituitary gland analysis included the proportion of corticotrophs per field, corticotroph cellular, nuclear, and cytoplasmic area, and their optical density. The RE? and PR expression was evaluated by the proportion of positive cells per field, and MC2R expression was evaluated through the optical density. In basal condition (intact males, neutered males, neutered females and intact females in anestrus) ACTH, ?-MSH and cortisol were not affected by the sex or the gonadal status. By contrast, cortisol showed greater values in negative photoperiod than in positive in all the studied groups (P<0.05) except for the intact females in anestrus. Along the oestrous cycle, all the studied hormones showed variations (P<0.0001). The greatest concentrations of ACTH were observed at proestrus, while ?-MSH and cortisol showed their greatest concentrations at oestrus. The three hormones decreased in diestrus. ACTH and cortisol concentrations were higher at negative photoperiod (P=0.04 and P<0.0001, respectively), while ?-MSH concentrations were higher at positive photoperiod (P=0.012), In the group of females oestradiol and progesterone correlated with ACTH (r=0.75, P<0.0001; r=0.34, P<0.01, respectively), ?-MSH (r=0.49, P<0.0001; r=0.52, P<0.0001, respectively) and cortisol (r=0.33, P<0.01; r=0.5, P<0.0001, respectively). The morphological study revealed that females had a greater proportion of corticotroph cells/total cells per field (p < 0.01). Both cellular and cytoplasmic areas of these cells were greater in females than in males in both photoperiods (p < 0.001). No significant differences were found for these parameters between photoperiods in either sex. Optical density of corticotrophs was greater in females than males in both photoperiods (p < 0.001) and greater in negative photoperiod than in positive photoperiod for both sexes (p < 0.001). ER? was identified in the adrenal zona fasciculata and expressed at higher levels in females than in males (p < 0.001). The optical density of MC2R immunostaining was greater in females than in males (p < 0.001). Immunostaining for PR was not found. The expression of both receptors was greater in negative photoperiod in both males and ?Estudio del ára corticotropa del perro en relación al sexo y variaciones estacionales? Página 12\nfemales (p < 0.001). ER? was identified in some corticotrophs; however, a quantitative analysis was not conducted because of low expression. These results provide evidence that the dog shows both morphological and functional sexual dimorphism of the HPA axis. Furthermore, these findings are the first to demonstrate ER? expression in corticotrophs and the adrenal cortex in this species, suggesting a site for oestradiol action. Binding to its receptor, oestradiol could exert a regulatory action on the HPA axis. There are also hormonal and morphological differences between photoperiods, which could be related to climatic or metabolic adaptations that remain to be studied.Fil: Gallelli, María Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaEl dimorfismo sexual tanto morfológico como funcional del eje hipotalamo-hipofisario-adrenal ha sido descripto en diversas especies; así como también existen reportes acerca de la influencia de la estacionalidad sobre dicho eje. Sin embargo, no existen estudios que analicen estas caracteristicas en el perro. Por lo tanto el objetivo del presente estudio fue determinar si en el perro existen variaciones en las hormonas del eje HHA (adrenocorticotrofina [ACTH], melanotrofina-alfa [?-MSH] y cortisol) de acuerdo al sexo, estatus gonadal (castrado o no) y al fotoperiodo (positivo o negativo) en condiciones basales (anestro) y durante el ciclo estral. Asimismo se propuso evaluar si en el perro existe dimorfismo sexual morfológico del área corticotropa de la hipófisis y de la zona fascicular de la corteza adrenal; y si el mismo se ve afectado por la estacionalidad. Además se evaluó si el receptor de estrógenos alfa (RE?) se expresa en los tejidos mencionados y si el receptor de progesterona (RP) se expresa en la zona fascicular adrenal.\nEn el caso del análisis hormonal, la población de estudio consistió en perras no castradas (n=11), perros machos no castrados (n=6), machos castrados (n=5) y hembras castradas (n=6).\nEl estudio morfológico se realizó mediante un análisis inmunohistoquímico en hipófisis y adrenales obtenidas en fotoperiodo negativo (hembras [n=7] y machos [n=7]) y en fotoperiodo positivo (hembras [n=7] y machos [n=7]), para ACTH en hipófisis, y para RE?, el RP y el receptor para ACTH (melanocortin-2-receptor, MC2R) en la glándula adrenal. Se realizó una doble inmunofluorescencia para poder co-localizar al RE? y a la ACTH (para poder identificar si las células corticotropas expresan dicho receptor). En hipófisis se analizó la proporción de células corticotropas por campo, su área celular, citoplasmática y nuclear, y la densidad óptica de su inmunomarcación. La expresión del RE? y RP se analizó mediante la proporción de células positivas por campo y la del MC2R mediante la densidad óptica. En condiciones basales (machos castrados y no castrados, hembras castradas y hembras en anestro) la ACTH, la ?-MSH y el cortisol no se vieron afectados por el sexo ni el estatus gonadal. Por el contrario, el cortisol se encontró más elevado en el fotoperiodo negativo que en el positivo en todos los grupos (P<0.05), excepto en las hembras en anestro. Durante el ciclo estral, todas las hormonas estudiadas presentaron variaciones (P<0.0001). Las mayores concentraciones de ACTH se observaron en el proestro, mientras que la ?-MSH y el cortisol presentaron las máximas concentraciones en el estro. Las tres hormonas disminuyeron en el diestro. La ACTH y el cortisol se encontraron más elevadas en el fotoperiodo negativo (P=0.04 and P<0.0001, respectivamente), mientras que la ?-MSH fue mayor en el fotoperiodo positivo (P=0.012). En el grupo de perras no castradas, el estradiol y la progesterona correlacionaron con la ACTH (r=0.75, P<0.0001; r=0.34, P<0.01, respectivamente), ?-MSH (r=0.49, P<0.0001; r=0.52, P<0.0001, respectivamente) y el cortisol (r=0.33, P<0.01; r=0.5, P<0.0001, respectivamente). A partir del análisis morfológico se encontró que las hembras presentaron mayor cantidad de células corticotropas/totales por campo en ambos fotoperiodos (p<0.01). El área celular y citoplasmática de las mismas fue mayor en hembras que en machos en ambos fotoperiodos (p<0.001). No se encontraron diferencias significativas en estos parámetros entre estaciones para ninguno de los sexos. La densidad óptica de las células corticotropas fue mayor en hembras que en machos en ambos fotoperiodos (p<0.001); así como también fue mayor en fotoperiodo negativo que en fotoperiodo positivo en ambos sexos (p<0.001). El RE? fue identificado en la zona fascicular adrenal, siendo su expresión mayor en hembras que en machos (p<0.001). La densidad óptica de la inmunomarcación para MC2R fue mayor en hembras que en machos (p<0.001). No se encontró inmunomarcación para RP. En ambos sexos la expresión de los dos receptores fue mayor en fotoperiodo negativo (p<0.001). El RE? fue identificado en algunas células corticotropas, pero dada su baja expresión no se realizó un análisis cuantitativo.\nEstos resultados evidencian que existe dimorfismo sexual tanto morfológico como funcional del eje HHA en el perro. Asimismo es la primera vez que se identifica la expresión del RE? en las corticotropas y corteza adrenal en dicha especie, postulándose un sitio de acción para el estradiol. De esta forma el estradiol podría tener un rol regulador sobre el eje HHA. Asimismo se obsevaron variaciones morfológicas y hormonales entre fotoperiodos, que podrían relacionarse con adaptaciones climáticas o metabólicas; las cuales quedan pendientes de estudio

Cushing pituitario dependiente: estudio comparativo del corticotropinoma y la secreción de ACTH y a-MSH según sexo y edad en el perro

Existen pocos reportes acerca de la distribución de la Enfermedad de Cushing según edad y sexo en el perro, así como de las características morfológicas y funcionales del corticotropinoma en esta especie. Por lo tanto se realizó un estudio retrospectivo transversal en base a historias clínicas de perros con EC confirmada, atendidos en el periodo 2003-2008 en la Unidad de Endocrinología del Hospital Escuela de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires.Trabajo galardonado con el Premio "Prof. Dr. Osvaldo A. Eckell", versión 2009Academia Nacional de Agronomía y Veterinari

Cushing pituitario dependiente: estudio comparativo del corticotropinoma y la secreción de ACTH y a-MSH según sexo y edad en el perro

Existen pocos reportes acerca de la distribución de la Enfermedad de Cushing según edad y sexo en el perro, así como de las características morfológicas y funcionales del corticotropinoma en esta especie. Por lo tanto se realizó un estudio retrospectivo transversal en base a historias clínicas de perros con EC confirmada, atendidos en el periodo 2003-2008 en la Unidad de Endocrinología del Hospital Escuela de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires.Trabajo galardonado con el Premio "Prof. Dr. Osvaldo A. Eckell", versión 2009Academia Nacional de Agronomía y Veterinari

Plasma ACTH, α-MSH and cortisol variations in the dog during the oestrous cycle in different photoperiods

The hypothalamic-pituitary-adrenal axis (HPA) is a complex system regulated by multiple factors.Sexual dimorphism of this axis has been described in different species under physiological conditions and it hasbeen proposed that sexual hormones could have an effect on it. There are only a few reports about sex-linkedvariations in HPA axis hormones in the dog. Thus, studying the impact of sexual hormones on the HPA axis wouldbroaden the knowledge about its function in this species. Therefore, the objective of this study was to determinewhether there are variations in HPA plasma hormones (ACTH, alfa-melanocyte-stimulating hormone [α-MSH]and cortisol) according to the sex and photoperiod (positive or negative photoperiod were considered when theduration of the light hours of the day was more than 12 or less than 12, respectively) under basal conditions (likeanoestrus) and throughout the oestrous cycle in the female dog. The population under study consisted of 11 intactfemale and 14 intact male dogs. Under basal conditions neither ACTH nor α-MSH concentrations showed differencesbetween sexes and different photoperiods. Cortisol showed greater values in the negative photoperiod thanin the positive, both in females and males (P = 0.03 and P = 0.015, respectively). Throughout the oestrous cycle,all the studied hormones showed variations (P < 0.0001). The greatest concentrations of ACTH were observed atproestrus, while α-MSH and cortisol showed their greatest concentrations at oestrus. The three hormones decreasedin diestrus. ACTH and cortisol concentrations were higher in the negative photoperiod (P = 0.04 and P < 0.0001,respectively), while α-MSH concentrations were higher in the positive photoperiod (P = 0.012). In the group offemales oestradiol and progesterone correlated with ACTH (r = 0.75, P < 0.0001; r = 0.34, P < 0.01, respectively),α-MSH (r = 0.49, P < 0.0001; r = 0.52, P < 0.0001, respectively) and cortisol (r = 0.33, P < 0.01; r = 0.5, P < 0.0001,respectively). These results show that in females, HPA axis hormones vary during the oestrous cycle in relation tooestradiol and progesterone fluctuations. The ACTH, α-MSH and cortisol concentrations also showed differencesbetween photoperiods in females, but only cortisol did so in males. These findings suggest that sexual hormonescould have an effect on the HPA axis. Further research needs to be done to fully understand this interaction andthe mechanisms involved.Fil: Gallelli, María Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Monachesi, N.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Miceli, Diego Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Cabrera Battler, M. F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Gomez, N. V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Meikle, A.. Universidad de Montevideo; UruguayFil: Castillo, V, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Uterine and corpus luteum blood flow evaluation prior to uterine flushing in llama embryo donors

The aim of this study was to assess the uterine blood flow (UBF) and corpus luteum blood flow (CLBF) in llamas 8 days post-mating, using color-Doppler ultrasonography (CDU), to determine the possible relationship between vascularization and the presence of an embryo. Adult females (n = 25) were used to monitor ovarian dynamics by palpation and transrectal ultrasonography until detection of a ≥6 mm growing follicle. Females were randomly assigned to one of two groups: Group I (n = 19), were mated and ovulation was induced by a single dose of buserelin (GnRH analog) that same day (Day 0); and Group II (n = 6), only ovulation was induced (control). On Day 8, UBF and CLBF were evaluated transrectally in both groups. The color-flow images obtained were analyzed with Image J1.52a software to determine the vascularization area and the percentage of corpus luteum with blood flow emission (CLBF%) together with the percentage for each uterine horn (UBF%). Statistical analysis was performed using an ANOVA test. In Group I, uterine flushing was performed to obtain the embryos, thus dividing the females into Group I+ (n = 10), when an embryo was recovered and Group I- (n = 9), when no embryo was recovered. Embryo recovery rate was 52.63% (10/19). In Group I+, UBF% was significantly higher compared to Group I- and Group II (P 0.05). In conclusion, it is possible to detect a local increase of UBF in the presence of an embryo on day 8 post-mating in llamas. This could be useful to achieve an early pregnancy diagnosis or to decide whether to carry out the uterine flushing in a llama embryo transfer program.Fil: Zampini, Enzo German. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Deborah M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo H.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentin

Transfer of cooled llama embryos obtained from synchronized females

This study evaluated the efficiency of a synchronization protocol based on GnRH and PGF2α on embryo donor llamas for fixed timed mating and assessed the viability of embryos maintained at 5 ◦C and 15 ◦C for 24 h, using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices respectively. Llamas were divided into four follicular wave groups: growth, dominance, static and regression; they received a GnRH analogue on day 0 followed by a second dose plus cloprostenol on day 8 and 15 and mating was indicated in females with a follicle ≥ 6 mm. Embryos were recovered 8 days post mating. Synchronization rate was 80% for the treated embryo donors, with no significant differences among groups. Uterine flushing was performed in 70% of the treated females (87.5% of mated llamas) and an embryo was recovered in 50%. Fourteen embryos were assigned randomly to 5 ◦C (Equitainer® group) and 15 ◦C (Botu-BOX® group) preservation for 24 h to be transferred later. In the Equitainer® group, we obtained 14% pregnancies and a female offspring was born. In the Botu-BOX® group, 28% resulted pregnant but subsequently pregnancies were lost. This protocol was effective for synchronizing follicles in growth phase in 80% of embryo donor llamas. In addition, cooling llama embryos using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices to 5 ◦C and 15 ◦C respectively, preserves its morphology and viability for 24 h.Fil: Zampini, Enzo German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Fernanda Veiga, María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Moncalvo, Carla Evangelina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin

Hormone Concentrations and Semen Parameters in Criollo Breed Stallions Under Training

The stress associated with training may reduce reproductive efficiency in Criollo stallions. The objective of this study was to compare semen quality and hormone concentrations in Criollo stallions under training or under regular field conditions. Criollo breed stallions (n ¼ 18) were evaluated during the spring. The exercise group (n ¼ 9) performed 1 hour of exercise per day and participated in competitions during the experimental period. The control group (n ¼ 9) neither performed exercise nor participated in competitions. Serum and semen samples were obtained every 15 days (two separate ejaculates an hour apart). Sperm motility, velocity, and morphology were evaluated with a phase-contrast microscope and concentration by a hemocytometer. Diff-Quik stain was used to identify polymorphonuclear cells, and the degree of chromatin condensation was evaluated with the toluidine blue stain. The sperm survival test was performed at a room temperature of 22C. Semen evaluation was performed in raw samples and in samples diluted in a skim milk and glucose-based extender. Cortisol, testosterone, and estradiol were measured using radioimmunoassay. There was no effect of exercise on testosterone and estradiol concentrations (P ¼ .28 and P ¼ .97, respectively). However, in the exercise group, cortisol concentration was higher after exercise (P ¼ .004). There was an effect of exercise on the following semen parameters: gelfree volume (P < .001), sperm motility (P < .0001), total number of sperm (P ¼ .0001), normal sperm morphology (P < .0001), and total number of morphologically normal and motile sperm (P < .001). No effect of exercise was found in the following semen parameters: color, pH, and sperm concentration. This study showed that exercise had a negative impact on seminal quality; nevertheless, semen parameters were within the normal ranges established for the equine species.Fil: Rosseto, Liliana. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Producción Animal. Cátedra de Reproducción Animal; ArgentinaFil: Farcey, Maria Florencia. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Producción Animal. Cátedra de Reproducción Animal; ArgentinaFil: Bilbao, María Guillermina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Producción Animal. Cátedra de Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Confluencia; ArgentinaFil: Bartolome, Julian. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Producción Animal. Cátedra de Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Patagonia Confluencia; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Leptin receptor expression in alpaca (Vicugna pacos) ovaries with or without corpus luteum

La función ovárica es regulada por gonadotropinas y otras hormonas como leptina. En distintas especies sereportó que esta hormona ejercería su acción en el ovario mediante su receptor (ObR), presente en distintos tipos celulares; no habiendo reportes al respecto en camélidos. El objetivo del presente estudio fue evaluar la expresión del ObR en ovarios dealpaca y analizar si la misma se ve afectada por la presencia del cuerpo lúteo (CL). La expresión del ObR se evidenció mediante una técnica inmunohistoquímica. La inmunomarcación fue evaluada por dos observadores independientes. El ObR, se expresó en folículos primarios, secundarios, células de la granulosa y teca interna de folículos terciarios y en cuerpo lúteo de todos los ovarios. El área positiva para ObR fue mayor en células de la teca interna en ovarios con CL respecto a aquellos sin CL; al igual que en células de la granulosa respecto a células de la teca interna sólo en ovarios sin CL. La presencia del ObR en el ovario propone un sitio de acción para la leptina en este tejido. La diferente expresión de ObR en ovarios con o sin CL sugiere una posible regulación del mismo por parte de los esteroides sexuales.Fil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Bianchi, Carolina Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Lombardo, Daniel Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaVIII Congreso Mundial de CamélidosOruroBoliviaGobierno Autónomo Departamental de OruroMinisterio de Desarrollo Rural y TierrasUniversidad Técnica de Oruro. Facultad de Ciencias Agrarias y Naturale

Procesamiento histológico de embriones de llamas

Se considera que el reconocimiento materno de la preñez en llamas estaría asociado a una señal secretada por el embrión para evitar la luteólisis, la cual ocurriría entre los días 8 y 12 post-servicio. Por esto, para estudiar los aspectos relacionados a la preñez temprana, es necesario realizar estudios sobre embriones de este período, tales como técnicas inmunohistoquímicas. Sin embargo, la manipulación de embriones de tan temprana edad dificulta el procesamiento histológico y hay un faltante de protocolos de inclusión en parafina para embriones de camélidos en particular. En este trabajo, presentamos un protocolo de procesamiento histológico de blastocistos de llama a partir de una adaptación de metodologías probadas en roedores de laboratorio. Se trabajó con embriones de 8 días post-servicio, obtenidos mediante flushing transcervical. Estos fueron inmersos en formol bufferado al 10% en crioviales por 24 horas a 4 °C para su fijación y remitidos al laboratorio en alcohol 70°. El procesamiento consistió en baños en placas de 2 pocillos, cuyos cambios se realizaron con micropipetas. Los baños comenzaron con: 500 µl de PBS con 5% de suero fetal bovino (SFB) por 1 minuto, impermeabilización de la zona pelúcida con 500 μl de PBS con 0.2% de Triton X-100 por 20 minutos, y 500 µl PBS con 5% SFB por 1 minuto. Luego, siguió una deshidratación con baños de alcohol etílico de graduación ascendente (70°, 96°, 100° y 100°) de 10 minutos cada uno y un baño de butanol de 5 minutos. Cada embrión fue transferido con un pincel y una espátula a un pocillo en una placa de hemaglutinación precalentada, que se llenó inmediatamente con parafina líquida. La placa fue dejada en estufa a 62 °C por 15 minutos para permitir la penetración de la parafina en el tejido embrionario y, luego, se dejó enfriar en la mesada. Una vez endurecida la parafina, se obtuvieron los pellets con los embriones, y se colocaron en moldes histológicos que se llenaron de parafina líquida y se cubrieron con una celdilla para obtener el bloque final. Se cortaron secciones de 5 µm, las cuales fueron revisadas para confirmar la presencia de tejido embrionario. Se pudieron obtener secciones completas de 8 embriones, 7 con morfología adecuada, en los cuales se apreció el trofoectodermo compuesto de una línea de células epiteliales cuboidales y, en la mayoría de los embriones, una línea interna de células epitelioides del hipoblasto en expansión. En algunos, se pudo observar el macizo celular interno o epiblasto. Este procedimiento tiene las características de ser fácil y rápido, y de requerir pocos insumos. A diferencia de otros protocolos, este método no requiere inclusión previa de los embriones en gelatina, lo cual muchas veces deriva en artefactos. Con esta metodología, logramos obtener secciones de buena calidad para tinciones histológicas (por ejemplo, hematoxilina-eosina, alcian blue, picrosirius red) e inmunohistoquímicas.Fil: Herrera, Juan Manuel. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Rossetto, Liliana. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Herrera, María Fernanda. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Bianchi, Carolina Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaJornadas de Investigación y Posgrado: El desafío de visibilizar la CienciaTandilArgentinaUniversidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinaria