The eastward enlargement of the eurozone: social and policy aspects in Portugal, Spain and Italy

This report explores some features of the social dimension of enlargement regarding the Southern EU-Member countries, namely Portugal, Spain and Italy. Economic theory suggests that integration may affect wages, employment and income distribution through changes on trade, FDI and migration flows. By removing all barriers to the free movement of goods and services, capital and labour, Eastward Enlargement will affect the location of economic activities, innovation, and technology. Subsequently, the need for economic readjustments will impose extra difficulties at national, regional and sector levels. These aspects have been analysed in several studies, stressing that the regional and social dimension of enlargement as well as the effects on cohesion, have to be taken into account when conceiving EU policies

Estudo e implementação da metodologia SMED-Up na empresa Britefil, S.A.

Na globalização dos mercados económicos, as empresas têm uma enorme necessidade de reduzir os custos produtivos e aumentar a sua produtividade face à forte concorrência dos países emergentes. É neste contexto político e económico que as empresas têm de adotar estratégias para assegurar a sua sustentabilidade e competividade. O paradigma Lean Production distingue-se no meio industrial, e tem como principal objetivo reduzir os custos e eliminar os desperdícios associados ao sector. Este paradigma é apoiado em distintas ferramentas, nomeadamente, SMED. A metodologia SMED foi criada e aplicada pela primeira vez nos finais da década de cinquenta e, desde então, tem sido largamente utilizada nos setores industriais, pois permite obter vantagens ao nível da eficiência produtiva, através da redução dos custos de produção especificamente, no tempo total de mudança de ferramenta e no tamanho dos lotes, eliminando assim os custos associados a stock. A presente dissertação tem como objetivo a implementação do método proposto Single Minute Exchange of Die- Upgrade (SMED-Up). Esta metodologia é uma alteração ao método tradicional SMED, com o intuito de dar resposta à redução dos tempos de Setup, com tecnologia e métodos associados à realidade atual. Para aprovar este método, implementou-se na prensa hidráulica existente nas instalações da empresa Britefil, S.A. Fábrica Nacional de Bombas, S.A. Com base nos resultados obtidos nas quatro fases do método SMED-Up, foram desenvolvidas soluções e avaliados os respetivos impactos, a partir dos índices de desempenho do processo. Foi possível reduzir 53,0% do tempo total de mudança de molde face à situação inicial existente na empresa

Picturing Breast Cancer Brain Metastasis Development to Unravel Molecular Players and Cellular Crosstalk

Simple Summary Breast cancer is a devastating disorder affecting millions of women worldwide. With improved therapeutics for the primary tumor, the appearance of metastasis has been increasing. Breast cancer frequently metastasizes to the brain, constituting a major hurdle without cure and with a poor survival. It is imperative to better understand the mechanisms involved in malignant cell transposition of the brain microvasculature and parenchymal colonization by deciphering the alterations occurring in the tumor and microvascular cells, as well as the occurrence of intercellular communication during the process. We aimed to profile the process of the formation of breast cancer brain metastasis and the timeline of events governing it. We used a specific mouse model of the disease to perform extensive microscopic analyses. We identified phenotypic changes and the activation of relevant molecular players in tumorigenesis, together with vascular alterations, and the occurrence of crosstalk. Our findings unravel putative therapeutic targets to tackle breast cancer brain metastasis. With breast cancer (BC) therapy improvements, the appearance of brain metastases has been increasing, representing a life-threatening condition. Brain metastasis formation involves BC cell (BCC) extravasation across the blood-brain barrier (BBB) and brain colonization by unclear mechanisms. We aimed to disclose the actors involved in BC brain metastasis formation, focusing on BCCs' phenotype, growth factor expression, and signaling pathway activation, correlating with BBB alterations and intercellular communication. Hippocampi of female mice inoculated with 4T1 BCCs were examined over time by hematoxylin-eosin, immunohistochemistry and immunofluorescence. Well-established metastases were observed at seven days, increasing thereafter. BCCs entering brain parenchyma presented mesenchymal, migratory, and proliferative features; however, with time, they increasingly expressed epithelial markers, reflecting a mesenchymal-epithelial transition. BCCs also expressed platelet-derived growth factor-B, beta(4) integrin, and focal adhesion kinase, suggesting autocrine and/or paracrine regulation with adhesion signaling activation, while balance between Rac1 and RhoA was associated with the motility status. Intercellular communication via gap junctions was clear among BCCs, and between BCCs and endothelial cells. Thrombin accumulation, junctional protein impairment, and vesicular proteins increase reflect BBB alterations related with extravasation. Expression of plasmalemma vesicle-associated protein was increased in BCCs, along with augmented vascularization, whereas pericyte contraction indicated mural cells' activation. Our results provide further understanding of BC brain metastasis formation, disclosing potential therapeutic targets

Fármacos antiparasitários: a realidade actual nas farmácias hospitalares e comunitárias portuguesas

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2013As doenças parasitárias constituem um grave problema de saúde pública, principalmente nos países subdesenvolvidos localizados em áreas tropicais. As parasitoses causadas por protozoários atingiram mais de metade da população mundial, estando associadas a significativas taxas de morbilidade e mortalidade. Os estudos de prevalência das parasitoses intestinais em Portugal são escassos, tendo-se verificado uma diminuição do seu número na década de 80. A implementação de programas de diagnóstico, tratamento e profilaxia representou uma importante ferramenta para reduzir as repercussões das infecções parasitárias. Esta revisão bibliográfica focou-se na terapêutica farmacológica das principais infecções parasitárias humanas causadas por protozoários. Dada a importância do tema na área da saúde humana, a presente monografia teve como objectivos fazer uma revisão da literatura científica dos fármacos antiparasitários, nomeadamente, os fármacos antiprotozoários, comercializados a nível mundial e efectuar uma comparação à realidade vivida nas farmácias hospitalares e comunitárias portuguesas. Esta informação foi retirada da base de dados de referência internacional, nomeadamente o CDC entre outros artigos científicos. Este trabalho permitiu o conhecimento mais aprofundado da terapêutica farmacológica antiparasitária disponível em Portugal relativamente à existente a nível mundial. Além disso, concluiu-se que o arsenal farmacológico dirigido aos protozoários comercializado no nosso país é inferior face à realidade norte-americana.Parasitic diseases are a very serious public health problem, mainly in developing countries such as tropical areas. Parasitosis caused by protozoa affect more than half of the world’s population, and it has been associated with high significant rates of morbidity and mortality. The prevalence studies of intestinal parasitosis in Portugal are scarce, plus there has been a decrease in their statistics in the 80´s. The implementation of diagnosis, treatment and prophylaxis programs represented an important tool to reduce the impact of parasitic infections. This review has focused on the pharmacological therapeutic against human parasitic infections caused by protozoa. Since these parasitic infections, are so important to human health, this thesis aimed to make a review on pharmacological treatment (antiparasitic drugs, including antiprotozoa drugs, marketed worldwide) and compare the reality in the Portuguese community and hospital Pharmacies. For that purpose data were collected from the international reference database of CDC, and various scientific papers. In conclusion, this work provides a deeper knowledge on the anti-parasitic drugs available in Portugal, regarding the existing worldwide, and the pharmacological armamentarium against protozoa infections, available in our country, is lower regarding to North American reality

Estimating nitrogen mineralization from soils and organic wastes

Mestrado em Engenharia do Ambiente - Instituto Superior de AgronomiaWith the objective to predict the availability of nitrogen (N) to the plants from the mineralization of soil organic matter and from organic residues applied to the soils, a quick and easy to perform waterlogged incubation experiment was developed, to investigate the mineralization of organic matter in 20 different soils, with and without application of two different organic residues (poultry manure and secondary pulp mill sludge). Soils tested, differed in texture, organic matter content as well as in pH and nutrients contents. A mild solubilizing agent (H2O) was used to extract easily mineralizable N both from soils and from mixtures of soils and residues. A ten days anaerobic incubation at 37ºC was performed for 10 days and sampled over this period. At each sampling time, a one hour extraction with 2M KCl was also done. A first-order kinetic model was fitted to the data, to predict N mineralization behavior in soils and mixtures. A quick chemical method using KCl 2M at 100ºC was also correlated to the model equations obtained, to better predict N mineralization. The results from both anaerobic incubation method and chemical extraction were promising in some soils, especially when soil texture was lighter. Poultry manure showed a similar mineralization pattern regardless of the soil to which it was added

Breast cancer brain metastasization: new players and potential biomarkers

Tese de mestrado, Biologia Molecular e Genética, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2020Com as recentes melhorias nos tratamentos do cancro da mama, as metástases cerebrais tornaram-se uma grande preocupação na área de oncologia. Visto que não há meios de diagnóstico precoce e as metástases são detetadas apenas quando surgem os primeiros sintomas neurológicos, o cancro metastático tornou-se a principal causa de morte nos doentes de cancro da mama, conferindo-lhes um pior prognóstico. Deste modo, é essencial um melhor esclarecimento de todo o processo metastático cerebral de forma a se poder descobrir novos alvos de modulação e potenciais biomarcadores que permitam a deteção precoce das metástases no encéfalo. O tal processo metastático exige a transmigração das células cancerígenas através da barreira hematoencefálica, uma estrutura composta por juncões intercelulares, incluindo as junções comunicantes, hemidesmossomas e adesões focais. As junções comunicantes são constituídas maioritariamente por conexinas e são responsáveis pela comunicação entre células adjacentes, enquanto os hemidesmossomas e as adesões focais permitem a ancoragem das células endoteliais (ECs) à membrana basal e são formadas principalmente por integrinas e pela proteína cinase de adesão focal (FAK), respetivamente. Após o extravasamento e à medida que se formam as metástases, as células tumorais sofrem uma completa ou parcial transição mesenquimal-epitelial para adquirirem um fenótipo epitelial que recapitula o de origem. Sabe-se que a progressão metastática induz uma expressão aberrante de microRNAs (miRNAs ou miRs) e a libertação de vesículas extracelulares (EVs), s que têm sido sugeridos como potenciais biomarcadores de doenças oncológicas. Devido à sua especificidade, estabilidade e fácil quantificação em fluidos biológicos, como o plasma, é possível usar um método não invasivo, como as biópsias líquidas, no diagnóstico e prognóstico de doenças oncológicas. Estudos prévios realizados pela nossa equipa mostraram uma expressão aberrante de um conjunto específico de miRNAs, incluindo miR-802-5p e o miR-92a-1-5p, no plasma de ratinhos antes da formação de metástases cerebrais de cancro da mama triplo negativo (TN). Posteriormente, através de uma análise bioinformática de previsão de alvos destes miRNAs, o fator intensificador de miócitos 2C (MEF2C) surgiu como um alvo interessante de ambos. A expressão deste fator de transcrição foi observada em células malignas isoladas e em metástases cerebrais com um aumento da sua translocação nuclear em estadios mais avançados do desenvolvimento tumoral. Estudos descreveram que tal translocação promove a transcrição de vários genes associados a vias de sinalização tumorais, como é o caso do gene fator de crescimento endotelial vascular (vegf). Foi ainda descrito que o MEF2C nuclear induz a formação de novos vasos e a migração tumoral através da via de sinalização VEGF enquanto o MEF2C citosólico bloqueia a sinalização Wnt/ß-catenina, inibindo o crescimento tumoral. Portanto, tendo em conta todas estas informações, nesta tese propomos testar a hipótese de que o extravasamento das células do cancro da mama e a sua colonização no encéfalo induzem alterações nas proteínas das junções comunicantes, dos hemidesmossomas e das adesões focais e no fenótipo das células tumorais, e promovem a expressão alterada de miR-802-5p e miR-92a-1-5p no parênquima encefálico bem como a libertação de EVs para a corrente sanguínea. Além disso, propomos ainda avaliar a expressão de MEF2C em amostras de metástases cerebrais humanas provenientes de pacientes com cancro da mama. Com este intuito, inocularam-se ratinhos com células 4T1 ou com solução salina, como controlo, sacrificando os ratinhos e colhendo os seus encéfalos a diferentes tempos após inoculação (5 horas, 3, 7 e 10 dias). As análises do parênquima encefálico foram determinadas por ensaios de imunofluorescência da expressão de conexina 43 (Cx43), FAK, ß4 integrina, subunidade da α6ß4 integrina, dos marcadores mesenquimais (neural caderina, N-caderina) e de astrócitos (proteína fibrilar ácida da glia, GFAP) assim como por ensaios de hibridização in situ do miR-802-5p e de miR-92a-1-5p. O plasma também foi analisado relativamente à presença de EVs através do NanoSight. Além disso, para o estudo do MEF2C, foram realizados estudos de imunofluorescência de amostras de metástases cerebrais humanas provenientes de pacientes com cancro da mama. Foi observada a expressão da proteína das junções comunicantes, Cx43, nos locais de contacto entre ECs e células malignas durante o extravasamento e, posteriormente, entre células malignas já em metástases formadas. Astrócitos reativos, identificados pela expressão de GFAP, também apresentaram expressão de Cx43, presumivelmente devido à resposta inflamatória. Estes resultados demonstram o papel das junções comunicantes na promoção da comunicação entre células tumorais e o microambiente encefálico permitindo a sua proliferação e sobrevivência. Em relação aos hemidesmossomas e adesões focais, a expressão de FAK foi observada nas células endoteliais, aumentando durante o extravasamento. As células malignas também exibiram um impressionante aumento de expressão tanto de FAK como de ß4 integrina, indicando o envolvimento da sinalização mediada pelo complexo integrina/FAK no desenvolvimento de metástases. Além disso, observou-se que as células malignas sofreram uma transição mesenquimal-epitelial pois apresentam uma diminuição da expressão do marcador mesenquimal, N-caderina, seguida de um aumento da expressão de proteínas associadas ao fenótipo epitelial como a lectina e a pan citoqueratina durante os estadios mais avançados do tumor cerebral de cancro da mama. Durante o processo de extravasamento ocorreu um aumento da quantidade de EVs secretadas para o plasma, sugerindo um papel destas vesículas na comunicação entre as células e os seus alvos, promovendo, assim, a tumorigénese. Como mencionado anteriormente, a expressão dos miR-802-1-5p e miR-92a-1-5p encontrava-se desregulada no plasma dos ratinhos durante os estadios inicias do cancro da mama metastático. O miR-802-5p e miR-92a-1-5p apresentavam os seus níveis de expressão diminuídos e aumentados, respetivamente, na fase que antecede a formação de metástases, evidenciando o seu potencial como biomarcadores da doença oncológica metastática. O mesmo padrão da expressão destes dois miRNAs foi observado nas células cerebrais ao longo da progressão tumoral, o que sugere que as células cerebrais poderão estar a modular as expressões destes miRNAs de forma a criar um ambiente favorável à formação de tumores. Uma semelhante sobreexpressão do MEF2C foi observada nas amostras humanas, porém vários padrões da marcação do MEF2C consoante a sua localização celular foram detetados. Isto levou a uma categorização dos pacientes em três fenótipos diferentes: marcação extracelular de MEF2C, fenótipo 1; 50% das células com localização extranuclear e 50% das células tanto com marcação extranuclear como nuclear, fenótipo 2; marcação de MEF2C pela célula toda, fenótipo 3. Verificou-se também que a translocação nuclear deste fator de transcrição está associada ao aumento de tamanho e do número de metástases cerebrais e, consequentemente à progressão da doença. Também se observou um aumento do recetor 2 do VEGF (VEGFR-2) nos casos que apresentam o fenótipo 1, o que aponta para uma possível promoção da expressão de MEF2C através da via de sinalização de VEGF/VEGFR-2. Em relação aos casos com o fenótipo 3, observou-se um aumento da ß-catenina nuclear e Ki-67, um marcador da proliferação, nas células malignas, sugerindo, assim, um potencial papel do MEF2C na progressão tumoral pela via de sinalização Wnt/ß-catenina. Este fator de transcrição foi ainda estudado em amostras humanas de tumor primário, revelando a expressão do MEF2C em células tumorais com caraterísticas mesenquimais localizadas fora do ducto mamário que possivelmente estariam a invadir e a migrar para a corrente sanguínea. Em suma, este trabalho demonstrou que ao longo da migração transendothelial das células tumorais pela barreira hematoencefálica e da colonização das mesmas no encéfalo, ocorrem alterações tanto nas proteínas de junção como no fenótipo das células malignas. Tudo isto permitiu esclarecer alguns eventos celulares e moleculares que acontecem durante a progressão metastática, evidenciando novos alvos com potencial para modulação com vista à inibição da formação e desenvolvimento de metástases. Este estudo também corroborou o potencial do miR-802-1-5p e do miR-92a-1-5p como potenciais biomarcadores do tumor metastático proveniente do cancro da mama, e revelou ainda as EVs como outros potencial biomarcadores com potencial utilidade no diagnóstico de metástases cerebrais. Por último, o MEF2C surge como um possível biomarcador de prognóstico do cancro mama e um potencial alvo de modulação para o desenvolvimento de novas terapias para as metástases cerebrais provenientes do cancro da mama.With the growing improvement of breast cancer (BC) therapies, brain metastases have become a major problem. Until today, there are no means of early diagnosis and metastases are only detected when the first neurologic problems appear, which account for the poor prognosis of BC patients. Therefore, there is an unmet need for better clarification of the brain metastasization process in order to discover new key players for modulation and potential biomarkers of brain metastases development. The brain metastasization requires the transmigration of cancer cells through the blood-brain barrier (BBB), which is characterized by elaborate intercellular junctions including gap junction (GJ), hemidesmosomes and focal adhesions. GJ is responsible for the communication between adjacent cells, while hemidesmosomes and focal adhesions anchor the endothelial cells (ECs) to the basement membrane. Upon extravasation, the cancer cells undergo a complete or partial mesenchymal-epithelial transition (MET) to acquire the epithelial phenotype that allows them to establish and form metastases. It is known that metastatic progression induces the aberrant expression of microRNAs (miRNAs or miRs), and the release of extracellular vesicles (EVs), which suggests them as potential biomarkers for cancer detection. Previous studies from our lab in a mouse model of brain metastasization from triple negative BC (TNBC) showed a downregulation of miR-802-5p and upregulation of miR-92a-1-5p in plasma prior to brain metastases detection. Further, myocyte enhancer factor 2C (MEF2C) appeared as an interesting target of the altered miRNAs, presenting a nuclear translocation at late stages of brain metastasization, associated to the transcription of several genes related to cancer signalling pathways as vascular endothelial growth factor (VEGF) and Wnt/β-catenin. Therefore, we hypothesized that the BC cells (BCCs) extravasation and colonization may induce alterations in proteins of GJs, hemidesmosomes and focal adhesions such as connexin 43 (Cx43), α6β4, integrin and focal adhesion kinase (FAK), respectively, and promote the aberrant expression of miR-802-5p and miR-92a-1-5p in brain parenchyma as well as the release of EVs into the bloodstream. In parallel, we aimed to assess the MEF2C expression in patients’ BC brain metastases (BCBM) and relate it with VEGF and Wnt/β-catenin signalling pathways. To this end, brain and plasma samples were collected from vehicle (control) and 4T1 cells-injected mice, at different timepoints during the metastatic progression (5 hours, 3, 7 and 10 days) for immunofluorescence (IF), in situ hybridization (ISH) and Nanoparticle tracking analysis (NTA). Moreover, for the MEF2C study, IF analysis of resected brain metastases from BC patients was performed. During brain metastasization, it was observed the expression of Cx43, at malignant-ECs’ contacts as early as malignant cells were extravasating, and later at malignant-malignant cells contacts, reflecting a role of intercellular communication along tumour progression. Reactive astrocytes also expressed Cx43 probably due to an inflammatory response. Both ECs and BCCs presented FAK expression during tumour development. The β4 integrin, a subunit of α6β4 integrin, was also impressively overexpressed in malignant cells, indicating the involvement of integrin-mediated signalling as a key player in metastasis development. Moreover, the BCCs underwent a MET by presenting a decreased expression of a mesenchymal maker, neural-cadherin (N-cadherin) followed by an increased expression of epithelial markers as pan Cytokeratin at late stages of tumour development. During the extravasation process, it occurred an increasing release of EVs into the plasma, which suggests their potential as a biomarker of BCBM. In line with the altered pattern of miRNAs in plasma, a decreased expression of miR-802-5p and an increased presence of miR-92a-1-5p were observed in the brain parenchyma along BCBM development, indicating their putative role as a disease biomarker. A similar MEF2C overexpression was observed in humans BCBM, although several MEF2C cellular locations were detected. This led to the categorization of patients in three putative phenotypes (P): P1, with an extranuclear location of MEF2C; P2, where 50% cells presented only extranuclear location and 50% presented nuclear staining; and P3, where all cells presented a nuclear location of MEF2C. MEF2C nuclear translocation showed to be associated with disease severity. Moreover, P1 presented a higher VEFGR-2 immunoreactivity, suggesting that the VEGF signalling may promote the MEF2C expression. Regarding the P3, it was observed an increase in ß-catenin nuclear- and Ki-67-positive cancer cells, pointing to the potential role of MEF2C in the tumour progression through Wnt/ß-catenin signalling. Human primary BC samples also presented MEF2C expression, showing its importance in the first steps of the metastatic cascade. Altogether, these results allowed the clarification of several cellular and molecular events, highlighting potential targets for modulation in order to prevent metastasis formation and development. Besides, the discovery of miR-802-5p, miR-92a-1-5p and EVs as specific biomarkers of BCBM, will be useful for BCBM future diagnostic and the development of effective therapies. It also revealed MEF2C as an emerging biomarker of BC prognosis as well as its potential as a target for modulation in order to abrogate BCBM development

Portugal e o alargamento da União Europeia:alguns impactos sócio-económicos

O processo de integração europeia na próxima década será marcado pela interacção de duas importantes alterações institucionais: a consolidação da união económica e monetária (UEM) e o recente alargamento aos países do Centro e Leste europeu (PECO).Neste artigo, tendo como pano de fundo os impactos económicos e sociais do alargamento, analisaremos algumas questões relacionadas com o mercado de trabalho, como é o caso do desemprego, da pobreza e da desigualdade, assim como aspectos das políticas laborais e sociais a eles associados. Procuraremos, por um lado, identificar as principais características do mercado do trabalho e das políticas sociais em Portugal e, por outro, faremos uma síntese dos principais impactos esperados em Portugal na sequência do alargamento a leste. Da conjugação destes vectores resultará a convicção de que a dimensão social poderá revelar-se de uma enorme vulnerabilidade, fundamentalmente devido às debilidades estruturais em que funciona o mercado laboral, às situações de pobreza e de exclusão e às restrições impostas ao uso da política fiscal e orçamental para acomodar os custos sociais inerentes ao processo de reajustamento