Virus de las abejas

A nivel mundial, Argentina es un importante productor de miel y subproductos, destinándose más del 90% de su producción al mercado externo.El principal problema que acarrean los productores del mundo entero está relacionado con las enfermedades que provocan innumerables pérdidas, desde una disminución en la producción hasta la muerte de las colonias. Se ha estimado que millones de colmenas mueren anualmente a causa de las enfermedades. Entre los agentes patógenos, los virus juegan un rol fundamental siendo un claro ejemplo es el “Síndrome del Colapso de las Colmenas” que ha llegado a afectar al 90% de colmenares de EEUU.Los principales virus que afectan a las abejas se distribuyen mundialmente. En Sudamérica, se ha reportado presencia de virus en Brasil y Uruguay pero en nuestro país no se conoce nada respecto a la prevalencia de estos virus.Los objetivos a desarrollar en este proyecto son:»»Implementación de tecnología diagnóstica para detección de las principales virosis.»»Desarrollo de técnicas de RT- PCR para: 1. Virus de alas deformadas (DWV), 2. Virus de la cría ensacada (SBV), 3. Virus de Kashmir (KBV), 4. Virus de la parálisis aguda de las abejas (ABPV), 5. Virus de la parálisis israelí de las abejas (IAPV), 6. Virus de la parálisis crónica de las abejas (CBPV), 7. Virus de las celdas reales negras (BQCV).»»Desarrollo de cultivos celulares susceptibles a virus de las abejas.»»Evaluación de prevalencia de agentes virales en distintas regiones y sistemas del país.»»Evaluación de asociación entre presencia del virus y enfermedad.»»Evaluación de presencia de enfermedad asociada a otros agentes (Varroa sp., Nosema sp.)»»Evaluación de asociación entre presencia del virus y desabejado

Reduction of foot-and-mouth disease virus transmission in cattle vaccinated one or two weeks before challenge using a commercial polyvalent vaccine

Immediate vaccination of the most susceptible and epidemiological relevant animals is a crucial part of control measures that facilitate virus elimination in case of entry of foot-and-mouth disease (FMD). The objective of this study was to evaluate the effect of cattle vaccination 7 and 14 days prior challenge using a vaccine commonly applied in systematic vaccination campaigns against transmission of FMD virus (FMDV). Transmission of FMDV was investigated in three groups of ten cattle each: one non-vaccinated group and two groups that were either vaccinated 7 days (−7/vaccinated group) or 14 days (−14/vaccinated group) before intranasal (IN) inoculation. Five cattle heads from each group were inoculated using the IN-route with the A/Argentina/2001 FMDV strain, while the remaining five cattle heads of each group were contact-exposed to inoculated cattle. Clinical signs were recorded; virus isolation and genome detection by RT-PCR were carried out on oesophageal–pharyngeal fluid (OPF) and blood. Neutralizing antibody titers and antibodies against non-structural proteins (NSP) of FMDV were also determined. Results suggest that the experimental design, virus challenge dose, and virus infectivity were appropriate and that the virus had been transmitted to naïve calves. Under the outlined experimental conditions, vaccination 7 and 14 days prior to challenge induced full clinical protection against virus inoculation. Moreover, −7/ or −14/vaccinated calves that had been contact-exposed to −7/ or −14/vaccinated IN-challenged calves, did not become infected. Consequently, no virus transmission occurred from vaccinated and subsequently infected calves to cohabitating vaccinated calves (R = 0). According to our results, early vaccination during an outbreak is effective as virus transmission can be significantly reduced using a vaccine commercially available, routinely applied in systematic vaccination campaigns.Instituto de PatobiologíaFil: Duffy, Sergio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Fondevila, Norberto Antonio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Galdo Novo, Sabrina. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA); ArgentinaFil: Aznar, Maria Natalia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Garro, Carlos Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Smitsaart, Eliana N. Biogénesis Bagó S.A.; ArgentinaFil: Monti, Gustavo. Universidad Austral de Chile. Facultad de Ciencias Veterinarias; Chil

Prevalence of honey bee (Apis mellifera) viruses in temperate and subtropical regions from Argentina

In Argentina, bee virus studies are still incipient, and there are no studies regarding the climatic effect. The aim of this study was to assess and compare the presence of honeybee viruses in different climatic regions from Argentina. A total of 385 colonies distributed in five Argentinean eco-regions were examined to evaluate the percentage of infestation with Varroa destructor and the presence of seven virus species (Deformed wing virus, DWV; Acute bee paralysis virus, ABPV; Chronic bee paralysis virus, CBPV; Black queen cell virus, BQCV; Kashmer bee virus, KBV; Israeli acute bee paralysis virus, IAPV; and Sacbrood bee virus, SBV) after honey yield. Two viruses, KBV and IAPV, were not detected. The other five viruses were found in different prevalences: DWV (35%), ABPV (21.5%), BQCV (8.0%), CBPV (2.2%), and SBV (1.1%). We found double and triple viral associations in approximately 25% of the sampled colonies. The mean V. destructor infestation in the colonies prior to the acaricide treatment was 7.12% ± 8.7%. The knowledge of the prevalence of these viruses in the region and their relation with the mite and other possible influencing factors is important for preventing colony losses. Further studies are necessary to identify the risk factors associated with virus presence and its relationship with other pathogens such as V. destructor.En Argentina, los estudios sobre prevalencia de virus en abejas continúan siendo incipientes y no existen reportes acerca de cómo inciden sobre dicha prevalencia las variables climáticas. El objetivo de este estudio fue evaluar y comparar la presencia de virus en abejas melíferas en diferentes regiones agroecológicas de Argentina. A tal fin se evaluaron 385 colmenas distribuidas en 5 regiones agroecológicas de las provincias de Chaco y Santa Fe; en ellas se analizó el porcentaje de infestación con Varroa destructor (ácaro patógeno de abejas) y la presencia de 7 especies de virus (DWV, virus de las alas deformadas; ABPV, virus de la parálisis aguda de la abeja; CBPV, virus de la parálisis crónica de la abeja; BQCV, virus de celda negra de la reina; KBV, virus de la abeja de Cachemira; IAPV, virus israelí de la parálisis aguda y SBV, virus de la cría ensacada). luego de la cosecha de miel. Dos virus (KBV y IAPV) no fueron detectados. Las otras 5 especies de virus se encontraron con prevalencias variables: DWV (35%), ABPV (21,5%), BQCV (8%), CBPV (2,2%) y SBV (1,1%). Fue posible identificar la presencia de 3 y hasta 3 virus simultáneamente en el 25% de las colmenas evaluadas. El promedio de infestación por V. destructor en las colmenas luego de la cosecha de miel y antes del tratamiento con acaricidas fue de 7,12% (±8,7). Conocer la prevalencia de virus en las diferentes regiones agroecológicas y su relación con la presencia del ácaro V. destructor e identificar otros posibles factores que podrían influir en su presencia es relevante para definir estrategias que reduzcan la mortandad de colmenas. Es necesario realizar estudios adicionales para identificar los factores de riesgo asociados a la presencia de virus en las colmenas y su relación con otros patógenos, como V. destructorEEA RafaelaFil: Fondevila, Norberto Antonio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Pietronave, Hernan Pablo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Bulacio Cagnolo, Natalia Veronica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Merke, Julieta. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Orellano, Emanuel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Bertozzi, Ezequiel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Ferrufino, Cecilia Gabriela. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Zago, Luis Fernando Basili. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Sáenz Peña; ArgentinaFil: Molineri, Ana Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Aignasse, Andrea María Elisa. Formosa (provincia). Ministerio de la Producción. Programa para el Desarrollo Apícola; ArgentinaFil: Signorini, Marcelo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Giacobino, Agostina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pacini, Adriana Cecilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Characterization of BoHV-5 field strains circulation and report of transient specific subtype of bovine herpesvirus 5 in Argentina

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is a member of the subfamily <it>Alphaherpesvirinae </it>responsible for meningo-encephalitis in young cattle. The first case of bovine meningo-encephalitis associated with a herpesvirus infection was reported in Australia. The current geographical distribution of BoHV-5 infection is mainly restricted to South America, especially Brazil and Argentina. Outbreaks of BoHV-5 are regularly observed in Argentina suggesting the circulation of the virus in the bovine population.</p> <p>Results</p> <p>Seventeen field strains of BoHV-5 isolated from 1984 to now were confirmed by differential PCR and subjected to restriction endonuclease analysis (REA). Viral DNA was cleaved with BstEII which allows the differentiation among subtypes a, b and non a, non b. According to the REA with BstEII, only one field strain showed a pattern similar to the Argentinean A663 strain (prototype of BoHV-5b). All other isolates showed a clear pattern similar to the Australian N569 strain (prototype of BoHV-5a) consistent with the subtypes observed in Brazil, the other South-American country where BoHV-5 is known to be prevalent. The genomic region of subtype b responsible for the distinct pattern was determined and amplified by PCR; specifically a point mutation was identified in glycoprotein B gene, on the BstEII restriction site, which generates the profile specific of BoHV-5b.</p> <p>Conclusions</p> <p>This is the first report of circulation of BoHV-5a in Argentina as the prevailing subtype. Therefore the circulation of BoHV-5b was restricted to a few years in Argentina, speculating that this subtype was not able to be maintained in the bovine population. The mutation in the gB gene is associated with the difference in the restriction patterns between subtypes "a" and "b".</p

Selection of highly susceptible cell lines to Foot and Mouth disease virus infection

Different non-established cultures were examined to find those that showed high sensitivity to Foot and Mouth Disease Virus (FMDV). Ovine kidney cultures showed high sensitivity to types A, O and C, and were suitable to detect viral infection in samples of animal, as well as cell culture origin. The level of detection in this system was up to ten times higher than in BHK21 cells, which were commonly used for FMDV isolation and production. Viral production levels in ovine kidney cultures ranged from similar to twice as high as in BHK21. Ovine kidney cultures maintained these characteristics for at least 18 passages, allowing their use as an alternative system for FMDV diagnoses.Instituto de VirologíaFil: Zabal, Osvaldo Alfredo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología: Argentina.Fil: Fondevila, Norberto Antonio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentin

Validación de una técnica de RT-PCR en tiempo real para la detección del virus de fiebre aftosa y evaluación de su desempeño en la infección aguda

ResumenSe validó una técnica de RT-PCR en tiempo real utilizando el termociclador y los reactivos del LightCycler 2.0 de Roche, según las recomendaciones de la Organización Mundial de Sanidad Animal, y se evaluó su desempeño para la detección del virus de fiebre aftosa en la infección aguda de bovinos vacunados e infectados experimentalmente con virus A Argentina/2001 o A24 Cruzeiro. La técnica demostró ser robusta, presentó coeficientes de variación menores del 4 % al considerar días, extracciones y repeticiones diferentes y logró detectar hasta 0,4 DICT50%, o hasta 100 moléculas de ARN. La sensibilidad diagnóstica en líquido esófago-faríngeo (LEF) fue 93,1 (IC95%: 86,5–96,6) y la especificidad diagnóstica fue 100 (IC95%: 96,3–100). Se observó protección total en lo referido a aparición de síntomas clínicos tras la infección aguda experimental con virus A Argentina/2001 o A24 Cruzeiro en animales multivacunados o vacunados 7 o 14 días antes de la exposición viral, y se pudo detectar la presencia viral por RT-PCRtr en LEF desde el primer día y hasta por lo menos el día 9 posexposición en todos los animales expuestos. Los títulos virales en estos bovinos fueron de hasta 2 log 10 inferiores que los observados en los animales con signos clínicos.AbstractA specific real time reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCRrt) for the detection of foot-and-mouth disease virus was validated using the LightCycler thermocycler 2.0 and its reagents as recommended by the World Organization for Animal Health and was assessed for the detection of the virus in acute infection of cattle experimentally vaccinated and challenged with virus A Argentina/2001 or A24 Cruzeiro. The technique proved to be robust, showing coefficients of variation lower than 4% for different ARN extractions, days or repetitions and was able to detect up to 0,4 TCID 50%, and/or up to 100 RNA molecules. In probang samples, diagnostic sensitivity was 93.1 (95% CI 86.5–96.6) and diagnostic specificity 100 (95% CI 96.3-100). The results of the challenge in vaccinated or multivaccinated bovines showed that although there were high levels of clinical protection in the vaccinated group, FMDV could be detected in all challenged groups. However, detection was 100 times lower in immunized animals

Ensayos de vacunación simultánea a campo

Bovinos adultos fueron vacunados en forma simultánea con vacuna trivalente oleosa inactivada contra Fiebre Aftosa (A-O-C) y vacunados y revacunados (0-30 días posvacunación) con vacuna contra la Diarrea Neonatal de los Terneros, inactivada y oleosa, conteniendo Rotavirus Bovino G6/P6 y Escherichia Coli enteropatogénica (K99), sin demostrarse modificaciones en la inocuidad de cada una de las vacunas administradas solas o en forma simultánea hasta los 90 días posvacunación.La respuesta serológica a los antígenos utilizados en cada grupo, fue evaluada mediante la detección de anticuerpos circulantes detectados por ELISA-FL y demostró que no se produce interferencia en la respuesta a cada antígeno, independientemente del procedimiento utilizado en la vacunación simple o simultánea.Palabras claves: Vacunación simultánea,  vacunas  combinadas,  Fiebre  Aftosa, Rotavirus, Diarreas Neonatal de los terneros, inocuidad.AbstractAdult cattle were vaccinated simultaneously with an inactivated trivalent (A-O-C) oil adjuvanted foot-and-mouth disease (FMD) vaccine and vaccinated and re-vaccinated at 0 and 30 days, with an inactivated oil adjuvanted vaccine against neonatal calf diarrhea, containing bovine rotavirus G6/P6 and enteropathogenic Escherichiad coli (K99). No changes in the inocuity of each vaccine or combined treatment were detected in cattle during the 90 days observation period.The serological response of the three groups, evaluated by detection of circulating antibodies by Liquid Phase (LP)-ELISA showed that, there is no interference in the antibody response to each antigen, regardless the treatment employed.Key words: Simultaneous vaccination, vaccines, combined vaccines, Foot and Mouth Disease, Rotaviruses, neonatal calf diarrhea, inocuity.

Ensayos de vacunación simultánea a campo

Bovinos adultos fueron vacunados en forma simultánea con vacuna trivalente oleosa inactivada contra Fiebre Aftosa (A-O-C) y vacunados y revacunados (0-30 días posvacunación) con vacuna contra la Diarrea Neonatal de los Terneros, inactivada y oleosa, conteniendo Rotavirus Bovino G6/P6 y Escherichia Coli enteropatogénica (K99), sin demostrarse modificaciones en la inocuidad de cada una de las vacunas administradas solas o en forma simultánea hasta los 90 días posvacunación.La respuesta serológica a los antígenos utilizados en cada grupo, fue evaluada mediante la detección de anticuerpos circulantes detectados por ELISA-FL y demostró que no se produce interferencia en la respuesta a cada antígeno, independientemente del procedimiento utilizado en la vacunación simple o simultánea.Palabras claves: Vacunación simultánea,  vacunas  combinadas,  Fiebre  Aftosa, Rotavirus, Diarreas Neonatal de los terneros, inocuidad.AbstractAdult cattle were vaccinated simultaneously with an inactivated trivalent (A-O-C) oil adjuvanted foot-and-mouth disease (FMD) vaccine and vaccinated and re-vaccinated at 0 and 30 days, with an inactivated oil adjuvanted vaccine against neonatal calf diarrhea, containing bovine rotavirus G6/P6 and enteropathogenic Escherichiad coli (K99). No changes in the inocuity of each vaccine or combined treatment were detected in cattle during the 90 days observation period.The serological response of the three groups, evaluated by detection of circulating antibodies by Liquid Phase (LP)-ELISA showed that, there is no interference in the antibody response to each antigen, regardless the treatment employed.Key words: Simultaneous vaccination, vaccines, combined vaccines, Foot and Mouth Disease, Rotaviruses, neonatal calf diarrhea, inocuity.

Early protection against foot-and-mouth disease virus in cattle using an inactivated vaccine formulated with Montanide ESSAI IMS D 12802 VG PR adjuvant

Foot and mouth disease is an acute disease of cattle with a broad distribution around the world. Due to the fast spread of FMDV infections, control measures must be applied immediately after an outbreak, such as the use of vaccines that induce fast protection. Previously, it was shown that mice vaccinated with FMD inactivated virus (iFMDV) formulated with Montanide™ ESSAI IMS D 12802 VG PR adjuvant (802-iFMDV) were protected when they were challenged 4 and 7 days post-vaccination (dpv) with homologous virus. In this work, we describe the successful use of this formulation in cattle. In addition, adjuvant Montanide™ IMS 1313 VG NPR was also tested. 802-iFMDV vaccine was able to confer 100% protection against viral challenge at 4 and 7 dpv, while eliciting low antibody levels, at 7 dpv. 1313-iFMDV vaccine induced protection in 60% of cattle. At 4 dpv, 1313-iFMDV vaccinated animals presented increased levels of IFNγ but not of macrophages. At 4 and 7 dpv, macrophages, IFNγ, nasal IgA and IgG1 antibodies against FMDV, and opsonophagocytosis were increased in animals vaccinated with 802-iFMDV indicating that these phenomena could be involved in protection.It is the first time that total protection against FMDV at early stages post-vaccination is reported using a single dose of the formulation iFMDV plus Montanide™ ESSAI D IMS 12802 VG PR adjuvant.Instituto de VirologíaFil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Pappalardo, Juan Sebastián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Langellotti, Cecilia Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil:Smitsaart, Eliana N. Biogénesis Bagó S.A.; ArgentinaFil: Fondevila, Norberto Antonio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad del Salvador; Argentin