Valores de beta2-microglobulina em brasileiros saudáveis usando o sistema automatizado DPC IMMULITE®

PURPOSE: The present study was designed to determine the normal range of serum beta 2-microglobulin (Sb2M) levels among healthy volunteers in Brazil. Levels of Sb2M are elevated in human immunodeficiency virus (HIV)-infected patients and have been shown to be the best predictor of HIV infection status and of some malignant disorders, especially multiple myeloma. In order to achieve its optimal use in Brazilian clinical diagnosis, an adequate reference interval study was performed for Sb2M IMMULITE® assay, based on the fact that its reference range limits were evaluated among European populations. METHODS: Ninety-six healthy blood donors were evaluated, and Sb2M levels were measured by chemiluminescent enzyme immunoassay using the IMMULITE® automated analyzer. RESULTS: A normal range of Sb2M values, established by a nonparametric statistical method, was 1.05 to 3.9 mg/mL, with the upper limit being higher than that reported elsewhere. CONCLUSIONS: This study presented new data indicating that there is a significant difference between the current reference limits for Sb2M IMMULITE® assay and those found in Brazil, providing evidence that significant differences in range of normal values may occur among different populations, and that these new values should be considered for Brazilian individuals.OBJETIVO: O objetivo do presente estudo foi determinar valores de referência de beta2-Microglobulina sérica (Sb2M) em voluntários saudáveis. Sabe-se que tal parâmetro apresenta-se elevado em pacientes infectados com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) e tem se mostrado melhor marcador da infecção por HIV e de desordens malignas, especialmente mieloma múltiplo. De forma a se obter o melhor diagnóstico clínico, um intervalo de referência adequado de Sb2M para a população brasileira foi determinado empregando-se o ensaio IMMULITE®; já que este tem como parâmetro uma faixa de referência determinada a partir de populações européias. MÉTODOS: Noventa e seis doadores de sangue saudáveis foram avaliados e os valores de Sb2M foram medidos por método enzima imunoensaio quimiluminescente usando analisador automatizado IMMULITE®. RESULTADOS: Os valores de Sb2M, estabelecidos por método estatístico não paramétrico, apresentaram-se entre 1.05 e 3.9 mg/ml, sendo que o limite superior obtido foi maior que o relatado em outros trabalhos. CONCLUSÃO: Este estudo apresentou novos valores, indicando que existe uma diferença significante entre os limites de referência de Sb2M disponibilizados para o IMMULITE® e os encontrados no presente trabalho, evidenciando a ocorrência de variações importantes entre diferentes populações e que novos valores devem ser considerados para brasileiros

Therapeutic efficacy of amphotericin B lipid formulations

Amphotericin B, discovered in 1953, has been the antifungal drug of choice for the most fungal infections in immonosupressed patients. Despite its toxicity and the introduction of new azolic antifungal agents in the 1980's, the therapeutic potencial, the spectrum of action, and almost 50 years of clinical experience, determine its efficacy for the treatment of fungal infections and secondary prophylaxis in neutropenic patients. Its efficacy has been challenged in every new antifungal drug presented for the scientists and doctors and, for this purpose, a wide range of new studies were performed in order to reduce its nephrotocixity. In addition to the necessity of establishing strong treatments with higher doses for systemic mycoses, the development of different ways of amphotericin B delivery has been encouraged. Among on them, the entrapping amphotericin B into liposomes, the formation of lipid complex and colloidal dispersions produced successful results in reducing the tocixity and improving efficacy. Therefore, many studies demostrating new lipid preparations and delivery systems will be cited, focused on pharmacokinetics and mechanisms to improve the delivery of active drugs to sites of infections.A anfotericina B, fármaco descoberto em 1953, ainda permanece como substância fungicida de escolha no tratamento da maioria das micoses sistêmicas que acometem pacientes imunocomprometidos. Mesmo com a sua toxicidade e a introdução de antifúngicos azólicos sistêmicos na década de 1980, a potência, o espectro de ação e os quase 50 anos de experiência clínica asseguram sua efetividade tanto para o tratamento das infecções fúngicas quanto para a profilaxia fúngica sistêmica em pacientes neutropênicos. Sua eficácia tem sido julgada a cada medicamento antifúngico novo apresentado aos profissionais de saúde e, por esta razão, numerosas tentativas para reduzir sua nefrotoxicidade específica surgiram nos últimos anos. Adicionalmente, a necessidade de se instituírem tratamentos agressivos para as micoses sistêmicas invasivas com dosagens necessariamente mais altas motivou o desenvolvimento de diferentes veículos para a administração de anfotericina B. Dentre eles, o encapsulamento de base lipossômica, a formação de complexos lipídicos e dispersões coloidais destacam-se com os melhores resultados na diminuição da toxicidade e aumento da eficácia terapêutica. Serão descritos diversos trabalhos direcionados ao desenvolvimento de preparações lipídicas como veículo para anfotericina B, tendo como intuito a utilização dos mecanismos farmacocinéticos dessas formulações a fim de melhorar a distribuição do fármaco nos órgãos-alvo

Estudos de estabilidade de anfotericina B associada à emulsão lipídica rica em triacilgliceróis destinada a administração endovenosa

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em FarmáciaA freqüência de infecções fúngicas tem crescido nos últimos anos, sendo que as infecções por leveduras do gênero Candida e os fungos filamentosos do gênero Aspergillus são as mais freqüentes. O antifúngico padrão de largo espectro, anfotericina B (AB) em desoxicolato de sódio (AB-DOC), é considerado fármaco de primeira escolha no tratamento dessa enfermidade. Porém, a sua administração em pacientes gravemente debilitados é seguida geralmente de várias reações adversas. De todas, a nefrotoxicidade é a mais grave, uma vez que a deterioração da função renal limita freqüentemente a dose ou o tratamento, reduzindo a probabilidade de um resultado clínico satisfatório. A necessidade de minimizar os efeitos tóxicos da AB veio estimular uma grande variedade de abordagens experimentais, dentre as quais o desenvolvimento de uma microemulsão lipídica rica em triacilgliceróis, preocupando-se com a manutenção da eficiência terapêutica e estabilidade da formulação. Diante disso, o objetivo do trabalho foi desenvolver uma microemulsão por meio de técnica de ultraemulsificação, estéril e apirogênica, com o intuito de administrá-la endovenosamente. Utilizou-se, portanto, componentes compatíveis com a administração endovenosa, mais especificamente, lipídios, de forma a mimetizar quilomícrons da linfa. O intuito foi de associar a AB a essa partícula de modo a torná-la menos propensa a agregação AB-AB. A caracterização e os estudos de estabilidade foram contemplados de forma a abranger as propriedades físico-químicas da partícula como diâmetro, potencial zeta, grau de agregação avaliado por espectros de absorção na região UV-Visível, taxa de incorporação e estabilidade da associação AB:lipídeo e finalmente a atividade antifúngica do fármaco vetorizado a microemulsão. O desenvolvimento das microemulsões lipídicas contendo AB mostrou-se viável, compatível com administração endovenosa no que contempla valores de pH e diâmetro da partícula, bem como da estabilidade e apirogenicidade. A associação entre AB e os componentes lipídicos mostrou-se estável, mesmo em condições drásticas de armazenamento (25 °C). A atividade antifúngica foi mantida ao longo de 4 meses, bem como o conteúdo de AB às partículas. Desta maneira, a microemulsão lipídica mostrou-se viável e promissora como veículo alternativo de AB, principalmente pela estabilidade e manutenção da atividade antifúngica

Role of serum amyloid A (SAA) on proliferation and differentiation of preadipocytes 3T3-L1

Considerando que a SAA é uma proteína de fase aguda e que uma concentração elevada desta proteína é observada em pacientes obesos e com resistência à insulina, estimulou-se pré-adipócitos murinos 3T3-L1 a baixas concentrações de rSAA durante o processo de proliferação e diferenciação. Ensaios de incorporação de [metil-3H]-timidina, ciclo e viabilidade celular por citometria de fluxo foram realizados, assim como genes adipogênicos foram determinados durante a fase de diferenciação. Ainda, investigou-se a participação da rSAA metabolismo da glicose, bem como a expressão do seu receptor GLUT4 e os perfis de lipólise. Como resultados, obteve-se que a rSAA causou um aumento na proliferação celular assim como na porcentagem de células na fase S. Este efeito foi dose dependente e mediado via sinalização da ERK1/2. Ainda, rSAA inibiu a diferenciação por meio da diminuição da expressão de fatores transcrição (PPARγ, C/EBPβ e C/EBPα) e proteínas adipogênicas (FABP4 e perilipina). Em relação à captação de 2-desoxi-[1,2-3H]-D-glicose, a rSAA preveniu este processo, corroborando com os resultados de expressão diminuída receptor GLUT4. Ainda, o aumento da lipólise provocada pela rSAA, favorece resistência à insulina no modelo estudado. Portanto, conclui-se que a SAA aumenta a proliferação mas inibe a diferenciação de células 3T3-L1 sugerindo papel importante desta proteína no processo de adipogênese.Considering that SAA is an acute phase protein and increased serum levels are associated with chronic hyperglycemia, insulin resistance and obesity, we first examined the possibility that rSAA could affect proliferation and differentiation 3T3-L1 preadipocytes. 3T3-L1 adipocytes were treated with recombinant human SAA and [methyl-3H]-thymidine incorporation, flow cytometric analysis of cell cycle and viability were performed. Also, gene expression profiles of adipogenic factor were performed during differentiation protocol as well as glucose uptake, GLUT4 gene expression and lipolysis assay. rSAA caused an increment in cell proliferation consisted with FACS analysis with a percentage of cells in the S phase. Cell proliferation was mediated by ERK1/2 signaling pathway and in dose-dependent manner. Also, SAA inhibited differentiation process by decreasing adipogenic genes PPARγ, C/EBPβ, C/EBPα, and proteins FABP4, and perilipin expression. Also, rSAA prevented 2-deoxy-[1,2-3H]-glucose uptake and GLUT4 expression. In addiction, lipolysis was increased favoring insulin resistance in 3T3L1 adipogenic model. In conclusion, it was demonstrated that rSAA enhances proliferation but prevents differentiation in 3T3-L1 adipocytes, supporting a even more complex participation, than previously expected, of inflammatory proteins the adipogenic process

Role of serum amyloid A (SAA) on proliferation and differentiation of preadipocytes 3T3-L1

Considerando que a SAA é uma proteína de fase aguda e que uma concentração elevada desta proteína é observada em pacientes obesos e com resistência à insulina, estimulou-se pré-adipócitos murinos 3T3-L1 a baixas concentrações de rSAA durante o processo de proliferação e diferenciação. Ensaios de incorporação de [metil-3H]-timidina, ciclo e viabilidade celular por citometria de fluxo foram realizados, assim como genes adipogênicos foram determinados durante a fase de diferenciação. Ainda, investigou-se a participação da rSAA metabolismo da glicose, bem como a expressão do seu receptor GLUT4 e os perfis de lipólise. Como resultados, obteve-se que a rSAA causou um aumento na proliferação celular assim como na porcentagem de células na fase S. Este efeito foi dose dependente e mediado via sinalização da ERK1/2. Ainda, rSAA inibiu a diferenciação por meio da diminuição da expressão de fatores transcrição (PPARγ, C/EBPβ e C/EBPα) e proteínas adipogênicas (FABP4 e perilipina). Em relação à captação de 2-desoxi-[1,2-3H]-D-glicose, a rSAA preveniu este processo, corroborando com os resultados de expressão diminuída receptor GLUT4. Ainda, o aumento da lipólise provocada pela rSAA, favorece resistência à insulina no modelo estudado. Portanto, conclui-se que a SAA aumenta a proliferação mas inibe a diferenciação de células 3T3-L1 sugerindo papel importante desta proteína no processo de adipogênese.Considering that SAA is an acute phase protein and increased serum levels are associated with chronic hyperglycemia, insulin resistance and obesity, we first examined the possibility that rSAA could affect proliferation and differentiation 3T3-L1 preadipocytes. 3T3-L1 adipocytes were treated with recombinant human SAA and [methyl-3H]-thymidine incorporation, flow cytometric analysis of cell cycle and viability were performed. Also, gene expression profiles of adipogenic factor were performed during differentiation protocol as well as glucose uptake, GLUT4 gene expression and lipolysis assay. rSAA caused an increment in cell proliferation consisted with FACS analysis with a percentage of cells in the S phase. Cell proliferation was mediated by ERK1/2 signaling pathway and in dose-dependent manner. Also, SAA inhibited differentiation process by decreasing adipogenic genes PPARγ, C/EBPβ, C/EBPα, and proteins FABP4, and perilipin expression. Also, rSAA prevented 2-deoxy-[1,2-3H]-glucose uptake and GLUT4 expression. In addiction, lipolysis was increased favoring insulin resistance in 3T3L1 adipogenic model. In conclusion, it was demonstrated that rSAA enhances proliferation but prevents differentiation in 3T3-L1 adipocytes, supporting a even more complex participation, than previously expected, of inflammatory proteins the adipogenic process

Amphotericin B associated with triglyceride-rich nanoemulsion: stability studies and in vitro antifungal activity

Amphotericin B (AB) is the standard drug for invasive fungal infection therapy. It has a broad spectrum of activity and it is the best antifungal available against most yeasts and molds. Its therapeutic use, however, is limited by significant side effects, leading to a low therapeutic index when it is used as the traditional formulation (Fungizone®). Due to self-association, AB can form pores in cholesterol-containing membranes. We propose a triglyceride-rich nanoemulsion as a delivery system for AB in low levels of aggregation to reduce the toxicity against host cells