Mecanismos moleculares envolvidos na atividade anti-inflamatória do composto pelargonidina-3-0-glicosídeo

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017Fragaria x ananassa Duch., conhecida como morango-de-jardim, é consumida mundialmente in natura ou na forma de sucos, geleias e iogurtes produzidos pela indústria alimentícia. Diversos estudos têm demonstrado que o morango pode ter importantes atividades biológicas, como antioxidante, anti-hipertensivo e também anti-inflamatório. Neste sentido, avaliamos o efeito anti-inflamatório do extrato dos frutos de Fragaria x ananassa e seu principal composto, a pelargonidina-3-O-glicosídeo (P3G), analisando seus efeitos na migração de leucócitos, níveis de exsudação, atividades da mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a) e de interleucina-6 (IL-6), utilizando o modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Também foi realizado um estudo in vitro para identificar a ação específica de P3G em proteínas cinases ativados por mitógeno (p38MAPK), cinase c-Jun N-terminal (JNKMAPK), fator de transcrição nuclear kappa B (NF-?B) e proteína ativadora-1 (AP-1). Para realização dos ensaios in vivo, os frutos congelados de morangos foram sonicados com 25 mL de metanol acidificado (HCl 1%) durante 75 minutos. Os extratos foram filtrados, e o solvente evaporado sob pressão reduzida até à secura produzindo o extrato bruto (EB). O composto majoritário presente no EB (P3G) foi utilizado nos experimentos, em forma de padrão obtido a partir de fonte comercial (Sigma-Aldrich, Co.). Em ambos os experimentos a dexametasona (Dex) foi utilizada como medicamento de referência anti-inflamatório. Na análise estatística, utilizou-se a análise de variância (ANOVA) seguida pelo teste post-hoc de Newman-Keuls. Valores de p Abstract: Fragaria x ananassa Duch., known as garden strawberry, is worldwide consumed in natura or in the form of juices, jams or yogurts produced by the food industry. Studies have shown that strawberry may have important biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory and antihypertensive. We therefore evaluated the anti-inflammatory effect of Fragaria x anannassa fruit extract and its major compound, pelargonidin-3-O-glucoside (P3G), analyzing its effect on leukocyte migration, exudation levels, myeloperoxidase (MPO), adenosine deaminase (ADA) activities and nitric oxide (NOx), tumoral necrosis factor (TNF-a) and interleukin 6 (IL-6) levels, using an in vivo murine model of pleurisy. We also have carried out an in vitro study to identify the specific action of P3G in p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK), c-Jun N-terminal kinase (JNKMAPK), nuclear transcript factors ?B (NF- ?B) and activated protein 1 (AP-1). To this end, the plant material was subjected to extraction. Briefly, frozen fruits of strawberry were sonicated with 25 mL of acidified (HCl 1%) methanol for 75 minutes. The extracts were filtered, and the solvent evaporated under reduced pressure to dryness yielding the crude extract (CE). The major compound present in CE (P3G) was used in our experiments as a standard obtained from commercial source (Sigma-Aldrich, Co.). In in vivo experiments, all inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, p.o.) was used as anti-inflammatory reference drug. In in vitro experiments, the inflammatory parameters were measured by Western Blot, also using dexamethasone as reference drug (Dex 7 µM). For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. P values < 0.05 were considered significant. The results presented in our study demonstrated that the crude extract (CE), and P3G are able to reduce the inflammatory parameters evaluated in the murine model of pleurisy (p < 0,05), and also in the cell culture of murine macrophages (p < 0,01), except for P3G, that did not cause inhibition in p38MAPK phosphorylation. Moreover, we demonstrated that the molecular mechanism of this effect involves the arrest of IkB-a activation (p < 0,05) and reduction in JNKMAPK phosphorylation (p < 0,01). These effects lead to a reduction in NF-?B (p < 0,05) and AP-1 activation (p < 0,001) of the transcription factors conductors of the inflammatory pathway triggered by the activation of TLR4. These results suggests that the tested compound is a potential candidate for a development of anti-inflammatory agent to treat diseases in which this pathway exerts a pivotal role