Structural Aspects of Antioxidant and Genotoxic Activities of Two Flavonoids Obtained from Ethanolic Extract of Combretum leprosum

Combretum leprosum Mart., a member of the Combretaceae family, is a traditionally used Brazilian medicinal plant, although no evidence in the literature substantiates its antioxidant action and the safety of its use. We evaluated the antioxidant properties of the ethanolic extract (EE) from flowers of C. leprosum and its isolated products 5,3′-dihydroxy-3,7,4′-trimethoxyflavone (FCL2) and 5,3′,4′-trihydroxy-3,7-dimethoxyflavone (FCL5) in Saccharomyces cerevisiae strains proficient and deficient in antioxidant defenses. Their mutagenic activity was also assayed in S. cerevisiae, whereas cytotoxic and genotoxic properties were evaluated by MTT and Comet Assays, respectively, in V79 cells. We show that the EE, FCL2, and FCL5 have a significant protective effect against H2O2. FCL2 showed a better antioxidant action, which can be related to the activation of the 3′-OH in the presence of a methoxyl group at 4′ position in the B-ring of the molecule, while flavonoids did not induce mutagenesis in yeast, and the EE was mutagenic at high concentrations. The toxicity of these compounds in V79 cells increases from FCL2 = FCL5 < EE; although not cytotoxic, FCL5 induced an increase in DNA damage. The antioxidant effect, along with the lower toxicity and the absence of genotoxicity, suggests that FCL2 could be suitable for pharmacological use

Sensibilidade da linhagem KIN3/NEK1 de Saccharomyces cerevisae a diferentes agentes mutagênicos

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Aplicação de uma metodologia de HPCL para avaliação do potencial antioxidante in vitro da planta Croton cajucara Benth a base da Xantina Oxidase

A espécie Croton cajucara Benth (Sacaca) vem sendo utilizada popularmente como recurso medicinalno tratamento de várias doenças como Hipercolesterolemia e o Diabete Melittus, indicando umaprovável ação antioxidante. O objetivo deste estudo é a aplicação de uma metodologia a base da cromatografialíquida de alta eficiência (HPLC) para determinar o potencial antioxidante in vitro da Sacaca através dosistema enzimático da Xantina Oxidase, um método rápido, eficaz e sensível. Os radicais hidroxila produzidosno teste, espécies reativas de oxigênio, são derivatizados em produtos estáveis 2,3- e 2,5-DHBA, quesão detectados via HPLC. Observa-se uma atividade antioxidante in vitro do chá da casca da Sacaca que é dependente da concentração e volume do chá. Estes resultados preliminares demonstram um eminentepotencial antioxidante do Croton cajucara Benth.Palavras-chave: Croton cajucara Benth, atividade antioxidante in vitro, xantina oxidase, HPLC

AVALIAÇÃO DE DANO NO DNA EM PORTADORES DE DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA PELO ENSAIO COMETA

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica- DPOC é definida como uma doença respiratória inflamatória, causada principalmente pela exposição à fumaça de cigarro, caracterizada pela progressão e incompleta reversibilidade da obstrução das vias aéreas. O objetivo desta pesquisa foi quantificar o Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC e controles. Estudo do tipo caso-controle avaliou 43 portadores de DPOC e 50 controles emparelhados por gênero, idade e índice de massa corporal (IMC). Foi utilizado sangue periférico para realizar o ensaio cometa nas versões alcalino (pH> 13) e neutro (pH ~ 8,5). Avaliação de danos no DNA usando o ensaio cometa na versão alcalina revelou um maior Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC quando comparados aos controles (ID 40,12+26,17 vs ID 26,28+28,12, p=0,03). Na versão Neutra do teste também é possível observar maior Índice de Dano nos casos do que em controles (ID 52,88+32,38 vs ID 38,12+38,17, p=0,018), indicando a presença de quebras duplas, devido a inflamação persistente. Dados preliminares mostram que os portadores de DPOC têm maior índice de dano no DNA do que controles, reforçando assim a necessidade de compreender melhor os mecanismos pelos quais isso acontece no processo da doença

AVALIAÇÃO DE DANO NO DNA EM PORTADORES DE DOENÇA PULMONAR OBSTRUTIVA CRÔNICA PELO ENSAIO COMETA

A Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica- DPOC é definida como uma doença respiratória inflamatória, causada principalmente pela exposição à fumaça de cigarro, caracterizada pela progressão e incompleta reversibilidade da obstrução das vias aéreas. O objetivo desta pesquisa foi quantificar o Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC e controles. Estudo do tipo caso-controle avaliou 43 portadores de DPOC e 50 controles emparelhados por gênero, idade e índice de massa corporal (IMC). Foi utilizado sangue periférico para realizar o ensaio cometa nas versões alcalino (pH> 13) e neutro (pH ~ 8,5). Avaliação de danos no DNA usando o ensaio cometa na versão alcalina revelou um maior Índice de Dano ao DNA em portadores de DPOC quando comparados aos controles (ID 40,12+26,17 vs ID 26,28+28,12, p=0,03). Na versão Neutra do teste também é possível observar maior Índice de Dano nos casos do que em controles (ID 52,88+32,38 vs ID 38,12+38,17, p=0,018), indicando a presença de quebras duplas, devido a inflamação persistente. Dados preliminares mostram que os portadores de DPOC têm maior índice de dano no DNA do que controles, reforçando assim a necessidade de compreender melhor os mecanismos pelos quais isso acontece no processo da doença

DNA damage in homocystinuria: 8-oxo‑,8‑dihydro‑2’-deoxyguanosine levels in cystathionine-β-synthase deficient patients and the in vitro protective effect of N-acetyl‑L‑cysteine

Introduction: Homocysteine (Hcy) tissue accumulation occurs in a metabolic disease characterized biochemically by cystathionine β-synthase (CBS) deficiency and clinically by mental retardation, vascular problems, and skeletal abnormalities. Previous studies indicate the occurrence of DNA damage secondary to hyperhomocysteinemia and it was observed that DNA damage occurs in leukocytes from CBS-deficient patients. This study aimed to investigate whether an oxidative mechanism could be involved in DNA damage previously found and investigated the in vitro effect of N-acety-L-cysteine (NAC) on DNA damage caused by high Hcy levels. Methods: We evaluated a biomarker of oxidative DNA damage in the urine of CBS‑deficient patients, as well as the in vitro effect of NAC on DNA damage caused by high levels of Hcy. Moreover, a biomarker of lipid oxidative damage was also measured in urine of CBS deficient patients. Results: There was an increase in parameters of DNA (8-oxo-7,8-dihydro-2’- deoxyguanosine) and lipid (15-F2t-isoprostanes levels) oxidative damage in CBS-deficient patients when compared to controls. In addition, a significant positive correlation was found between 15-F2t-isoprostanes levels and total Hcy concentrations. Besides, an in vitro protective effect of NAC at concentrations of 1 and 5 mM was observed on DNA damage caused by Hcy 50 μM and 200 μM. Additionally, we showed a decrease in sulfhydryl content in plasma from CBS-deficient patients when compared to controls. Discussion: These results demonstrated that DNA damage occurs by an oxidative mechanism in CBS deficiency together with lipid oxidative damage, highlighting the NAC beneficial action upon DNA oxidative process, contributing with a new treatment perspective of the patients affected by classic homocystinuria. Keywords: Cystathionine-β-synthase deficiency; oxidative stress; 8-oxo-7,8-dihydro- 2’-deoxyguanosine; homocysteine; DNA damage; N-acetyl-L-cystein

Estudos dos alcalóides β-carbolínicos em diferentes modelos biológicos

Os alcalóides β-carbolínicos possuem uma ampla distribuição, sendo encontrados em várias famílias de plantas, além de estarem presentes na fumaça do cigarro, bebidas alcoólicas, alimentos excessivamente cozidos e em mamíferos. Estes alcalóides são conhecidos por apresentarem várias ações farmacológicas sobre os sistemas nervoso central, muscular e cardiovascular, causando alucinações, tremores, convulsões, hipotensão e bradicardia. Possuem também atividade antioxidante e imunossupressora, além de ligarem-se a receptores de serotonina, dopamina, benzodiazepina; são também inibidores das enzimas monoamino-oxidase-A (MAO-A) e DNA topoisomerases. Os objetivos do presente estudo foram avaliar os possíveis efeitos antioxidantes, antimutagênicos, antigenotóxicos e neurocomportamentais dos alcalóides β-carbolínicos: harmano, harmina, harmol, harmalol e harmalina, utilizando teste de sensibilidade e antimutagênese em Saccharomyces cerevisiae, ensaio cometa em cultura de células de pulmão de hâmster chinês (V79) e avaliação do comportamento, através da tarefa de reconhecimento de novo objeto, em camundongos, respectivamente. Em testes de sensibilidade, todos os alcalóides protegeram as linhagens deficientes em sistemas de defesa antioxidante de S. cerevisiae contra danos induzidos pelos oxidantes H2O2 e paraquat. De maneira geral, os alcalóides β-carbolínicos protegeram mais as células dos danos gerados pelo H2O2 e o aumento da viabilidade foi mais significativo para as linhagens sod1Δ, sod2Δ e sod1Δsod2Δ. Também, possivelmente por uma ação seqüestradora de espécies reativas de oxigênio, os alcalóides β-carbolínicos mostraram forte atividade contra danos no DNA induzidos pelo H2O2, no teste de antimutagênese com a linhagem N123 de S. cerevisae e no teste de antigenotoxicidade, utilizando o ensaio cometa com células V79. As dihidro-β-carbolinas harmalina e harmalol mostraram um efeito mais pronunciado que as β-carbolinas nos ensaios citados acima. Quanto à avaliação dos efeitos neurocomportamentais em camundongos, a administração sistêmica dos alcalóides β-carbolínicos facilitou a formação de memória de curta duração, no caso da harmina, harmol e harmalina e, também a memória de longa duração (harmalina) em camundongos, verificada com uso da tarefa de reconhecimento de novo objeto