Identificación de variantes zoonóticas de Cryptosporidium, Blastocystis y Enterocytozoon en terneros de la provincia de Buenos Aires, Argentina

Cryptosporidium, Blastocystis, and Enterocytozoon are cosmopolitan microscopic parasites that can cause severe diarrheal disease in humans and animals, and can be lethal in immunocompromised individuals..Cattle can become a major source of infection of those zoonotic agents for humans if the development of the livestock industry is not accompanied by appropriate preventive measures for their manure management. \nDuring the period 2011-2013 a survey of Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi and Blastocystis was conducted in dairy farms distributed in 12 municipalities of the Cuenca Mar y Sierras, Province of Buenos Aires. Fecal specimens of 209 calves less than 2 months of age were collected and analyzed by molecular methods to identify and molecularly characterize Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi and Blastocystis .\nA nested PCR protocol for identification of 18S rRNA gene was used for the detection of Cryptosporidium. To detect C. parvum subtypes, a nested PCR for a genetic polymorphic marker ?surface glycoprotein GP60 gene- was used. \nFor E. bieneusi identification, a 400 bp fragment corresponding to the entire region of ITS region and flanking portions of both major and minor subunits rDNA was amplified by nested PCR. To identify Blastocystis, a PCR based on the detection of a fragment of SSU rDNA gene was performed.\nA total of 87 samples were positive for Cryptosporidium (41,62%). Cryptosporidium bovis was detected in a single sample while the rest were all C. parvum. Subtyping of the C. parvum isolates revealed a wide variety of zoonotic subtypes: IIaA16G1R1, IIaA18G1R1, IIaA19G1R1, IIaA20G1R1, IIaA21G1R1, IIaA22G1R1, IIaA23G1R1 were detected. Coinfections were detected in two samples with IIaA22G1R1 and IIaA21G1R1.\nE. bieneusi was detected in 10 samples (4.8%). Six genotypes were found with five of them being previously reported in humans. Genotypes D, I, J and BEB4, previously described in calves and humans, were identified. EbpC, which has been previously described in humans, was found for the first time in calves. A new genotype, BEB10, was identified in a calf. The most prevalent genotype was the J, followed by I. No mixed infections were detected.\nA total of 6 stool samples showed coinfection by Cryptosporidium and E. bieneusi. The following associations were found: C. bovis with genotype J, C. parvum subtype IIaA18G1R1 with genotype I, IIaA20G1R1 with genotype D, IIaA20G1R1 with genotype J, IIaA21G1R1 with genotype BEB4 and IIaA22G1R1 with genotype J. \nBlastocystis was not detected.\nThese results show a wide genetic diversity of C. parvum and E. bieneusi with zoonotic genotypes and subtypes in calves in Buenos Aires province. The presence of these microorganisms in calves suggests that these animals could represent a risk to public health through contamination of drinking water and fresh produce. For a better understanding of zoonotic transmission of these agents it is essential to carry out molecular studies of isolates from humans who live with or are in contact with these animals.Fil: Del Coco, Valeria Fernanda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaCryptosporidium, Blastocystis y Enterocytozoon son parásitos cosmopolitas que pueden causar cuadros clínicos gastrointestinales en humanos y animales y en algunos casos puede ser letal en personas inmunocomprometidas. El ganado vacuno puede llegar a ser una fuente importante de infección de estos agentes zoonóticos si el desarrollo de la industria ganadera no se acompaña de medidas preventivas adecuadas para el manejo de los desechos provenientes de estos animales.\nDurante el período 2011-2013 se realizó un relevamiento de Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi y Blastocystis en establecimientos lecheros distribuidos en 12 municipios de la Cuenca Mar y Sierras, Provincia de Buenos Aires. Se obtuvieron muestras fecales de 209 terneros de menos de 2 meses de edad las cuales se analizaron por métodos moleculares para identificar y caracterizar molecularmente a dichos microorganismos. \nPara la detección de Cryptosporidium se efectuó un protocolo de PCR anidada para la identificación del gen 18S rRNA. La detección de subtipos de C. parvum, se realizó una PCR anidada que identifica al gen de la glicoproteína de superficie GP60.\nEn el caso de E. bieneusi, se amplificó mediante PCR anidada un fragmento de 400 pb correspondiente a toda la region ITS y las porciones flanqueantes tanto de la subunidad menor como mayor del rADN. Para identificar Blastocystis, se efectuó una PCR para detectar un fragmento del gen SSU rDNA. \nUn total de 87 muestras resultaron positivas para Cryptosporidium (41,62%). Cryptosporidium bovis se detectó en una sola muestra, mientras que el resto fueron positivas para C. parvum. La subtipificación de las muestras positivas para C. parvum reveló una amplia variedad de subtipos zoonóticos: IIaA16G1R1, IIaA18G1R1, IIaA19G1R1, IIaA20G1R1, IIaA21G1R1, IIaA22G1R1, IIaA23G1R1. Se detectaron coinfecciones en dos muestras con los subtipos IIaA21G1R1 y IIaA22G1R1. \nE. bieneusi se detectó en 10 muestras (4,8%). Seis genotipos fueron encontrados de los cuales cinco de ellos fueron detectados con anterioridad en humanos. Los genotipos D, I, J y BEB4, descrito previamente en terneros los seres humanos fueron identificados. EbpC, que ha sido descrito previamente en los seres humanos, se encontró por primera vez en los terneros. Un nuevo genotipo, BEB10, fue identificado en un ternero. El genotipo más frecuente fue el J, seguido por I. No se detectaron infecciones mixtas.\nUn total de 6 muestras de heces mostraron coinfección por Cryptosporidium y E. bieneusi. Se encontraron las siguientes asociaciones: C. bovis con genotipo J, C. parvum subtipo IIaA18G1R1 con genotipo I, IIaA20G1R1 con el genotipo D, IIaA20G1R1 con el genotipo J, IIaA21G1R1 con genotipo BEB4 y IIaA22G1R1 con el genotipo J.\nBlastocystis no fue detectado en ninguna muestra.\nEstos resultados indican una amplia diversidad genética de subtipos y genotipos zoonóticos de C. parvum y E. bieneusi respectivamente, en terneros en la provincia de Buenos Aires. La presencia de estos microorganismos en terneros sugiere que estos animales podrían representar un riesgo para la salud pública a través de la contaminación del agua potable y productos frescos. Para una mejor comprensión de la transmisión zoonótica de estos agentes es esencial llevar a cabo estudios moleculares de muestras provenientes de seres humanos que viven o están en contacto con estos animales

Enterococcus faecalis CECT 7121® (firmicutes): una alternativa bioterapéutica en el control de la infección por Cryptosporidium parvum (apicomplexa)

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de EfCECT7121® sobre la viabilidad e infectividad de Cryptosporidium parvum en modelo murino sometido a inmunosupresión química. Se desarrolló un modelo murino de infección por C. parvum en el que se estudiaron parámetros clínicos e histopatológicos reportándose hallazgos nunca descriptos sobre la dinámica infección-apoptosis en cada sector intestinal. La presencia de EfCECT7121® a nivel intestinal puso de manifiesto su interferencia sobre el ciclo intestinal de C. parvum in vivo, logrando reducir su capacidad infectiva en los animales desafiados. Esto motiva el uso individual o combinado de EfCECT7121® con otros agentes terapéuticos, tanto en esta como en otras infecciones intestinales.Asociación Parasitológica Argentin

Blastocystis spp.: avances, controversias y desafíos futuros

Blastocystis spp. es el protista intracelular que se detecta con mayor frecuencia en muestras de materia fecal humana; las tasas de infección pueden superar el 20% en países en vías de desarrollo. El hallazgo de este parásito en heces de diversas especies animales sugiere su potencial zoonótico. La relevancia clínica y el papel patógeno de Blastocystis spp. en el tracto intestinal son inciertos. Varias son las publicaciones que lo reconocen como agente etiológico de desórdenes intestinales como diarrea, enfermedad inflamatoria intestinal y colitis ulcerosa, aunque la patogenicidad de este parásito no ha sido probada. Este amplio rango de respuestas a la infección podría estar relacionado con la diversidad genética de los aislamientos provenientes de hospedadores infectados.In developing countries, infection rates are higher than 20%. The presence of this parasite in the feces of several host species suggests its zoonotic potential. The clinical relevance and the pathogenic role of Blastocystis spp. in the intestinal tract remain unclear. There are several clinical reports that recognize it as the etiologic agent of several intestinal disorders such as diarrhea, inflammatory bowel disease and ulcerative colitis, although the pathogenicity of this parasite has not been proved yet. This wide range of clinical manifestations could be related to the genetic diversity exhibited by this parasite

Influencing factors in the occurrence of injured coliforms in the drinking water distribution system in the city of La Plata, Argentina

The objective of this study was to evaluate the influencing factors in the occurrence of coliforms in the drinking water in La Plata (Argentina) from June 1999 to June 2001. A total of 180 samples were collected from Rio de La Plata (102 samples) and Puelche Aquifer (78 samples); 45 samples were collected for each of the four seasons. The membrane filter procedure was used for isolating bacteria, and each sample was tested for chlorine and pH. The highest percentage of samples positive for coliforms in the two tested media was obtained in summer while the highest percentage of negative samples was obtained in winter. No Escherichia coli was isolated. The percentage of injured coliforms fluctuated between 70 and 100%. The most frequently isolated bacteria was Enterobacter cloacae in summer, Enterobacter agglomerans in autumn and Klebsiella oxytoca in winter and spring. Significant correlations were observed between coliforms and the distance from the initial treatment point, and with the level of free chlorine. We conclude that drinking water contamination in La Plata occurs in the distribution system due to increased temperatures and reduced disinfectant levels, which result in bacterial regrowth.Facultad de Ciencias Médica

Comparación de tres técnicas de concentración de heces para recuperar ooquistes de Cryptosporidium

Cryptosporidium es un parásito causante de cryptosporidiosis. Su estadío infectivo, el ooquiste, se elimina con las heces del hospedador, representando los terneros la principal fuente de infección humana. El objetivo de este trabajo fue comparar tres métodos de concentración de heces para recuperar ooquistes de Cryptosporidium. Fueron estudiados un total de 166 terneros. Una única muestra de materia fecal fresca fue analizada por los métodos de Telemann modificado, agua éter, y Tris Tween 80. La identificación de ooquistes fue realizada mediante coloración de Kinyoun modificada. El número de ooquistes concentrados por cada técnica fue cuantificado en 20 campos a 1000X. Del total de muestras analizadas, 22/166 fueron positivas para Cryptosporidium. El número medio de ooquistes recuperados por cada técnica fue: Telemann modificada (124,2±159,5), agua éter (153,0±156,3), tris Tween 80 (92,2±98,3). ANOVA mostró que no existen diferencias significativas entre métodos. De acuerdo con los resultados obtenidos, las tres técnicas pueden ser empleadas para concentrar ooquistes de Cryptosporidium. Si bien los tres métodos presentaron igual sensibilidad y espcificidad, la técnica de agua éter demostró ser sencilla, de bajo costo, y efectiva para recuperar ooquistes, particularmente si se requiere conservar la viabilidad de los mismos.Cryptosporidium is a parasite which causes cryptosporidiosis. Its infectious stage, the oocyst, is eliminated with the host feces, calves being the main source of human infection. The aim of the present work was to compare three methods of feces concentration to recover Cryptosporidium oocysts. A total of 166 calves were studied. An only sample of fresh feces was analyzed using the following methods: modified Telemann, water ether, and Tris Tween 80. The identification of oocysts was carried out by modified staining Kinyoun technique. The number of concentrated oocysts per technique was quantified in 20 fields at 1000X. From a total of 166 analyzed samples, 22 were Cryptosporidium positive. The average number of recovered oocysts per technique was: modified Telemann (124.2 ± 159.5), water ether (153.0±156.3), Tris Tween 80 (92.2 ± 98.3). ANOVA demonstrated that there are no significant differences between these methods. According to the results obtained, the three techniques may be used to concentrate Cryptosporidium oocysts. Even if there are no differences in sensibility and specificity between these methods, the water ether technique proved to be simple, low-cost, and effective to recover oocysts, particularly if the oocysts condition is to be kept

Agua y salud humana

La protección de la salud pública requiere agua de bebida segura. La realización de frecuentes exámenes para determinar si el agua contiene organismos indicadores sigue siendo el modo más sensible y especifico de estimar la calidad del agua desde el punto de vista de la higiene. En los países donde existe un sistema de vigilancia integrado, la mayoría de los brotes de origen hídrico han sido vinculados a fallas en el tratamiento, inclusión de agua contaminada en la red o a problemas de recrecimiento bacteriano en el sistema de distribución. Es importante por esto optimizar los métodos empleados para la detección de contaminación fecal, mediante la utilización de métodos más sensibles, con el fin de poner al alcance de la población agua segura desde el punto de vista microbiológico y parasitológico.Public health protection requires safe drinking water. The most sensitive and specific way to analize the water quality is to determinate the presence of indicator bacteria. In most countries with an integrated surveillance water system, the great majority of water outbreaks were associated to treatment failures, inclusion of contaminated water or bacterial regrowth at the water network. Is necessary to improve the sensibility of those methods used to detect faecal contamination, to provide safe drinking water from a microbiological and parasitological point of view

Water & Public Health

La protección de la salud pública requiere agua de bebida segura. La realización de frecuentes exámenes para determinar si el agua contiene organismos indicadores sigue siendo el modo más sensible y especifico de estimar la calidad del agua desde el punto de vista de la higiene. En los países donde existe un sistema de vigilancia integrado, la mayoría de los brotes de origen hídrico han sido vinculados a fallas en el tratamiento, inclusión de agua contaminada en la red o a problemas de recrecimiento bacteriano en el sistema de distribución. Es importante por esto optimizar los métodos empleados para la detección de contaminación fecal, mediante la utilización de métodos más sensibles, con el fin de poner al alcance de la población agua segura desde el punto de vista microbiológico y parasitológico.Public health protection requires safe drinking water. The most sensitive and specific way to analize the water quality is to determinate the presence of indicator bacteria. In most countries with an integrated surveillance water system, the great majority of water outbreaks were associated to treatment failures, inclusion of contaminated water or bacterial regrowth at the water network. Is necessary to improve the sensibility of those methods used to detect faecal contamination, to provide safe drinking water from a microbiological and parasitological point of view.Facultad de Ciencias MédicasComisión de Investigaciones Científicas de la provincia de Buenos Aire

Comparison of three stool concentration techniques for recovering Cryptosporidium oocysts

Cryptosporidium es un parásito causante de cryptosporidiosis. Su estadío infectivo, el ooquiste, se elimina con las heces del hospedador, representando los terneros la principal fuente de infección humana. El objetivo de este trabajo fue comparar tres métodos de concentración de heces para recuperar ooquistes de Cryptosporidium. Fueron estudiados un total de 166 terneros. Una única muestra de materia fecal fresca fue analizada por los métodos de Telemann modificado, agua éter, y Tris Tween 80. La identificación de ooquistes fue realizada mediante coloración de Kinyoun modificada. El número de ooquistes concentrados por cada técnica fue cuantificado en 20 campos a 1000X. Del total de muestras analizadas, 22/166 fueron positivas para Cryptosporidium. El número medio de ooquistes recuperados por cada técnica fue: Telemann modificada (124,2±159,5), agua éter (153,0±156,3), tris Tween 80 (92,2±98,3). ANOVA mostró que no existen diferencias significativas entre métodos. De acuerdo con los resultados obtenidos, las tres técnicas pueden ser empleadas para concentrar ooquistes de Cryptosporidium. Si bien los tres métodos presentaron igual sensibilidad y espcificidad, la técnica de agua éter demostró ser sencilla, de bajo costo, y efectiva para recuperar ooquistes, particularmente si se requiere conservar la viabilidad de los mismos.Cryptosporidium is a parasite which causes cryptosporidiosis. Its infectious stage, the oocyst, is eliminated with the host feces, calves being the main source of human infection. The aim of the present work was to compare three methods of feces concentration to recover Cryptosporidium oocysts. A total of 166 calves were studied. An only sample of fresh feces was analyzed using the following methods: modified Telemann, water ether, and Tris Tween 80. The identification of oocysts was carried out by modified staining Kinyoun technique. The number of concentrated oocysts per technique was quantified in 20 fields at 1000X. From a total of 166 analyzed samples, 22 were Cryptosporidium positive. The average number of recovered oocysts per technique was: modified Telemann (124.2 ± 159.5), water ether (153.0±156.3), Tris Tween 80 (92.2 ± 98.3). ANOVA demonstrated that there are no significant differences between these methods. According to the results obtained, the three techniques may be used to concentrate Cryptosporidium oocysts. Even if there are no differences in sensibility and specificity between these methods, the water ether technique proved to be simple, low-cost, and effective to recover oocysts, particularly if the oocysts condition is to be kept.Facultad de Ciencias Médica

Comparison of three stool concentration techniques for recovering Cryptosporidium oocysts

Cryptosporidium es un parásito causante de cryptosporidiosis. Su estadío infectivo, el ooquiste, se elimina con las heces del hospedador, representando los terneros la principal fuente de infección humana. El objetivo de este trabajo fue comparar tres métodos de concentración de heces para recuperar ooquistes de Cryptosporidium. Fueron estudiados un total de 166 terneros. Una única muestra de materia fecal fresca fue analizada por los métodos de Telemann modificado, agua éter, y Tris Tween 80. La identificación de ooquistes fue realizada mediante coloración de Kinyoun modificada. El número de ooquistes concentrados por cada técnica fue cuantificado en 20 campos a 1000X. Del total de muestras analizadas, 22/166 fueron positivas para Cryptosporidium. El número medio de ooquistes recuperados por cada técnica fue: Telemann modificada (124,2±159,5), agua éter (153,0±156,3), tris Tween 80 (92,2±98,3). ANOVA mostró que no existen diferencias significativas entre métodos. De acuerdo con los resultados obtenidos, las tres técnicas pueden ser empleadas para concentrar ooquistes de Cryptosporidium. Si bien los tres métodos presentaron igual sensibilidad y espcificidad, la técnica de agua éter demostró ser sencilla, de bajo costo, y efectiva para recuperar ooquistes, particularmente si se requiere conservar la viabilidad de los mismos.Cryptosporidium is a parasite which causes cryptosporidiosis. Its infectious stage, the oocyst, is eliminated with the host feces, calves being the main source of human infection. The aim of the present work was to compare three methods of feces concentration to recover Cryptosporidium oocysts. A total of 166 calves were studied. An only sample of fresh feces was analyzed using the following methods: modified Telemann, water ether, and Tris Tween 80. The identification of oocysts was carried out by modified staining Kinyoun technique. The number of concentrated oocysts per technique was quantified in 20 fields at 1000X. From a total of 166 analyzed samples, 22 were Cryptosporidium positive. The average number of recovered oocysts per technique was: modified Telemann (124.2 ± 159.5), water ether (153.0±156.3), Tris Tween 80 (92.2 ± 98.3). ANOVA demonstrated that there are no significant differences between these methods. According to the results obtained, the three techniques may be used to concentrate Cryptosporidium oocysts. Even if there are no differences in sensibility and specificity between these methods, the water ether technique proved to be simple, low-cost, and effective to recover oocysts, particularly if the oocysts condition is to be kept.Facultad de Ciencias Médica

Infección experimental por <i>Cryptosporidium</i> spp. en ratones inmunosuprimidos

Objetivo: Desarrollar un modelo de infección experimental por Cryptosporidium spp. en ratones inmunosuprimidos.Facultad de Ciencias Médica