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Suramin-Induced Neurotoxicity: Preclinical Models and Neuroprotective Strategies
Suramin is a trypan blue analogon originally developed to treat protozoan infections, which was found to have diverse antitumor effects. One of the most severe side effects in clinical trials was the development of a peripheral sensory-motor polyneuropathy. In this study, we aimed to investigate suramin-induced neuropathy with a focus on calcium (Ca2+) homeostasis as a potential pathomechanism. Adult C57Bl/6 mice treated with a single injection of 250 mg/kg bodyweight suramin developed locomotor and sensory deficits, which were confirmed by electrophysiological measurements showing a predominantly sensory axonal-demyelinating polyneuropathy. In a next step, we used cultured dorsal root ganglia neurons (DRGN) as an in vitro cell model to further investigate underlying pathomechanisms. Cell viability of DRGN was significantly decreased after 24-hour suramin treatment with a calculated IC50 of 283 ”M. We detected a suramin-induced Ca2+ influx into DRGN from the extracellular space, which could be reduced with the voltage-gated calcium channel (VGCC) inhibitor nimodipine. Co-incubation of suramin and nimodipine partially improved cell viability of DRGN after suramin exposure. In summary, we describe suramin-induced neurotoxic effects on DRGN as well as potentially neuroprotective agents targeting intracellular Ca2+ dyshomeostasis
Suramin-induced neurotoxicity in-vitro
Einleitung: Die Chemotherapie-induzierte Polyneuropathie (CIPN) ist eine der
hĂ€ufigsten unerwĂŒnschten Arzneimittelwirkungen unter Chemotherapie bei
Tumorpatienten. Bisher sind die jeweiligen Pathomechanismen unzureichend
geklÀrt. Folglich existieren keine adÀquaten TherapieansÀtze. Betroffene
Patienten leiden unter einer eingeschrÀnkten LebensqualitÀt und können
teilweise aufgrund dieser dosislimitierenden Nebenwirkung nicht optimal
behandelt werden. Es sind verschiedene Substanzen bekannt, die das Auftreten
einer CIPN bewirken können. Interessanterweise haben Studien gezeigt, dass der
neurotoxische Effekt der Chemotherapeutika Salynomycin und Paclitaxel mit dem
Auftreten einer Calciumdyshomöostase zusammenhÀngt. Bemerkenswert ist, dass
auch die NeurotoxizitÀt Suramins mit einer gestörten Calciumhomöostase in
Verbindung gebracht wurde. Suramin ist ein seit 1916 bekanntes
Antiprotozoikum, das in tierexperimentellen und klinischen Studien auch im
Rahmen verschiedener TumorentitÀten eingesetzt wurde. Insgesamt wurden
zahlreiche Wirkmechanismen dieser Substanz beschrieben. AuĂerdem verursacht
Suramin zahlreiche Nebenwirkungen. HĂ€ufig stellt eine zumeist periphere,
axonale und sensomotorische Polyneuropathie einen dosislimitierenden Faktor
dar. Gegenstand dieser Arbeit war es, den zugrundeliegenden Pathomechanismus
der NeurotoxizitÀt Suramins zu untersuchen, um das VerstÀndnis der
Pathophysiologie der CIPN allgemein zu erweitern und spezifische
therapeutische Ansatzmöglichkeiten zu beleuchten. Methodik: FĂŒr die
Untersuchungen wurden primÀre Spinalganglienzellkulturen aus Ratten-Neonaten
(P 0-3) gewonnen. Zur Messung des intrazellulÀren Calciumgehalts erfolgten
Calcium-Imaging Experimente unter Verwendung des Fluoreszenzfarbstoffs Fura-2.
Des Weiteren untersuchten wir, unter Verwendung spezifischer Inhibitoren, die
Bedeutung verschiedener spannungsabhÀngiger Calcium (VGCC)- sowie Transient-
Rezeptor-Potential-(TRP) KanÀle im Rahmen der Suramin-vermittelten
NeurotoxizitÀt. Die Evaluation der ZellvitalitÀt erfolgte mittels MTT-Assay.
Ergebnisse: Wir konnten zeigen, dass Suramin zu einem Einstrom von
extrazellulĂ€rem Calcium in das Cytosol von Spinalganglienzellen fĂŒhrt. Der
L-Typ VGCC-Inhibitor Nimodipin konnte diesen Calciumeinstrom signifikant
vermindern und die zellulÀre VitalitÀt signifikant steigern. Allerdings wurde
die toxische und Calcium-induzierende Wirkung Suramins nicht vollstÀndig durch
Nimodipin antagonisiert. Die Inhibition des TRPV4 Kanals zeigte diesbezĂŒglich
uneindeutige Ergebnisse. DarĂŒber hinaus traten experimentelle Interaktionen
Suramins mit Fluoreszenz und Lumineszenz-Assays auf. Dies fĂŒhrten wir am
ehesten auf eine Interaktion mit den jeweiligen Luminophoren zurĂŒck. AuĂerdem
zeigte sich unter Suramin eine verminderte zellulÀre AdhÀsion. Unter
BerĂŒcksichtigung der Literatur machten wir eine Interaktion mit
extrazellulĂ€ren Matrixproteinen hierfĂŒr verantwortlich. Schlussfolgerung: Mit
der vorliegenden Arbeit konnten wir die Bedeutung der Calciumhomöostase im
Rahmen der pathophysiologischen VorgÀnge der CIPN allgemein verdeutlichen. Im
Speziellen lieĂen sich membranstĂ€ndige IonenkanĂ€le als Vermittler des Suramin-
induzierten Calciumeinstroms und der dadurch bedingten NeurotoxizitÀt
identifizieren. Jedoch wird insgesamt deutlich, dass Suramin unspezifische
Bindungseigenschaften besitzt und so pleiotrope Effekte auf verschiedenste
Zielstrukturen ausĂŒbt. Dies bedingt eine Ă€uĂerst komplexe Handhabung dieser
Substanz sowohl im klinischen als auch im experimentellen Einsatz. Die
dargestellten Interaktionen sollten insbesondere fĂŒr die weitere
experimentelle Verwendung Suramins genauer untersucht werden.Introduction: Chemotherapy induced polyneuropathy (CIPN) is one of the most
frequent side effects of chemotherapy treated tumor patients. Pathomechanisms
and consequently therapeutic strategies remain to be elucidated. Affected
patients suffer from a reduced quality of life and might not be treated with
the optimal treatment regimen because of this dose limiting side effect.
Several chemotherapeutic compounds are known to induce CIPN. Intriguingly
studies have shown that the neurotoxic effect of Salinomycin and Paclitaxel is
linked to a disturbance of cellular calcium homeostasis. In this context, it
is of interest that Suramin induced neurotoxicity was proposed to be linked to
calcium dyshomeostasis as well. The antiprotozoic agent Suramin is known since
1916. Suramin was also shown to have diverse antitumor activities. It also
causes various side effects. One of the most frequent dose limiting side
effects being a predominantly axonal and peripheral sensorimotor neuropathy.
We investigated the pathomechanism of Suramin neurotoxicity in order to
improve the understanding of CIPN pathophysiology in general and to elucidate
specific therapeutic targets. Methods: We used primary dorsal-root-ganglion
cell (DRGC) cultures from rat neonates (P 0-3). Intracellular calcium levels
were measured via Calcium-Imaging using the fluorescent dye Fura-2. Moreover,
we investigated the impact of voltage gated calcium channels (VGCC) and
Transient-Receptor-Potential-(TRP) channels on Suramin neurotoxicity using the
MTT cell-viability assay. Results: We were able to show that Suramin induces
an influx of extracellular calcium into the cytosol of DRGCs. The L-type VGCC
inhibitor Nimodipine reduced Suramin induced calcium influx significantly and
improved viability of Suramin treated cells. Nevertheless, Nimodipine could
not reverse Suramin induced impairment of cell viability and calcium influx
completely. The inhibition of the TRPV4 channel showed ambiguous results. We
also observed interactions of Suramin with fluorescence- and luminescence
assays and hypothesized a direct interaction of Suramin with luminophores.
Moreover, Suramin impaired cellular adhesion. With reference to the published
literature we linked this phenomenon to interactions of Suramin with
extracellular matrix proteins such as Laminin. Conclusion: Altogether our
experiments emphasize the relevance of a calciumdyshomeostasis in the
pathophysiology of CIPN in general. Furthermore, we could identify ion
channels in the plasma membrane as potential mediators of Suramin induced
calcium influx and subsequent neurotoxicity. Nevertheless, it becomes clear
that Suramin possesses unspecific binding properties which result in
pleiotropic effects of this substance. This causes a very complex handling of
Suramin in both experimental and clinical uses. For further experimental use
of Suramin the described interactions should be investigated in more detail
Suramin-Induced Neurotoxicity: Preclinical Models and Neuroprotective Strategies
Suramin is a trypan blue analogon originally developed to treat protozoan infections, which was found to have diverse antitumor effects. One of the most severe side effects in clinical trials was the development of a peripheral sensory-motor polyneuropathy. In this study, we aimed to investigate suramin-induced neuropathy with a focus on calcium (Ca2+) homeostasis as a potential pathomechanism. Adult C57Bl/6 mice treated with a single injection of 250 mg/kg bodyweight suramin developed locomotor and sensory deficits, which were confirmed by electrophysiological measurements showing a predominantly sensory axonal-demyelinating polyneuropathy. In a next step, we used cultured dorsal root ganglia neurons (DRGN) as an in vitro cell model to further investigate underlying pathomechanisms. Cell viability of DRGN was significantly decreased after 24-hour suramin treatment with a calculated IC50 of 283 ”M. We detected a suramin-induced Ca2+ influx into DRGN from the extracellular space, which could be reduced with the voltage-gated calcium channel (VGCC) inhibitor nimodipine. Co-incubation of suramin and nimodipine partially improved cell viability of DRGN after suramin exposure. In summary, we describe suramin-induced neurotoxic effects on DRGN as well as potentially neuroprotective agents targeting intracellular Ca2+ dyshomeostasis