Estudo comparativo de dois extratos antigênicos heterólogos na detecção de anticorpos IgA Anti-Strongyloides stercoralis pelo Teste ELISA em amostra de soros

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)Esse trabalho teve como objetivo detectar a presença de anticorpos IgA específica circulantes através do teste ELISA utilizando larvas filarióides de S. ratti com extrato salino e alcalino

Estudo comparativo de dois extratos antigênicos heterólogos na detecção de anticorpos IgA anti-Strongyloides stercoralis pelo teste Elisa em amostras de soros

Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O estudo da estrongiloidíase tem recebido especial atenção nos últimos tempos, principalmente nas regiões tropicais. Pesquisas são realizadas na tentativa de precocemente diagnosticar a presença da infecção por Strongyloides stercoralis. Esse trabalho teve como objetivo detectar a presença de anticorpos IgA específica circulantes através do teste ELISA utilizando larvas filarióides de Strongyloides ratti com extrato salino e alcalino. Avaliou-se reações cruzadas com outras parasitoses. Amostras de soros de 186 indivíduos foram analisados, 61 indivíduos estavam eliminando larvas de S. stercoralis nas fezes, 60 amostras de soros de indivíduos controles saudáveis (estudantes universitários) os quais foram realizados exames parasitológicos pelos métodos de Baermann-Moraes e Hoffmann, Pons e Janer em três amostras fecais e 65 pacientes com outras parasitoses triados no Laboratório de Análises Clínicas do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia. S. ratti foi obtido de cultura de fezes de Rattus rattus infectados experimentalmente. As placas de ELISA contendo 10 ug/ ml de extrato salino ou alcalino de S. ratti foram adicionadas os soros padrão positivo, negativo e soros testes na diluição l: 20 e posteriormente seriada na razão dois. O título ideal do conjugado IgA de cabra anti IgA humano peroxidase foi de 1000 para ambos os extratos. Considerou-se positiva a reação nos títulos 2 20. A positividade do teste ELISA para detecção de IgA foi de 42,62% para o extrato salino e de 47,54% para o extrato alcalino. Ocorreram 4,62% e 9,23% de reações cruzadas com indivíduos controles parasitados para os extratos salino e alcalino respectivamente. Concluiu—se que os extratos antigênicos salino e alcalino de S. ratti podem ser empregados no teste ELISA como auxilio diagnóstico. Apesar da praticidade de preparo e rendimento na dosagem de proteínas do extrato alcalino ter sido elevada em relação ao extrato salino, ambos são recomendados, já que não houve diferença estatística significativa entre eles na detecção de anticorpos IgA específica na estrongiloidiase humana

Current status of research regarding Blastocystis sp., an enigmatic protist, in Brazil

The present study aimed to evaluate the occurrence of Blastocystis sp. in Brazilian studies over a period of years (2000-2020), as well as point out relevant aspects of this enigmatic organism. We performed a literature search using six sources of international databases. The data were divided into diagnostic by parasitological and molecular techniques, and relevant aspects. After applying the inclusion and exclusion criteria, 52 studies were included in the final analysis. The occurrence of Blastocystis sp. in Brazil ranged from 0.5% to 86.6%, as determined using parasitological techniques. The highest occurrence was in the North (27.3%) and the lowest, in the Midwest region (13.4%). In Brazil, most studies have employed molecular techniques and are concentrated in the Southeast region. The Blastocystis sp. subtype ST3 had the highest average positivity, followed by ST1 and ST2. These findings represent a panorama that reflects the reality of Brazil; thus, we believe that the effectiveness of parasitological diagnosis should be considered with regard to making an appropriate choice of technique for detecting Blastocystis sp. Additionally, we emphasize the importance of further studies in the context of molecular epidemiology with regard to this genus. Blastocystis sp. is not well understood yet, and very little information regarding this genus is available; hence, further research regarding this genus is urgently needed

Descriptive molecular epidemiology study of Giardia duodenalis in children of Parana State, Brazil

Background and aims: We investigated the children of Parana State, Brazil the prevalence of intestinal parasitosis and the associated factors involved in the transmission of intestinal parasites, and we genotyped the Giardia duodenalis isolates obtained. Methods: Fecal samples were analyzed by established microscopic methods. G. duodenalis positive samples were subjected to genotypic characterization by PCR amplification of sequences of the glutamate dehydrogenase gene (gdh) and by enzymatic digestion with the restriction enzyme NlaIV for classification of genotypes. Results: Of the 877 samples tested, 41% were positive for some intestinal parasitosis, the most common being the presence of protozoa (87.8%). Lack of basic sanitation and poor health education were associated for the intestinal parasite cases found, and the only associated factor for giardiasis was low family income. The G. duodenalis assemblages of gdh amplified samples were 68.6% B and 31.4% AII. Conclusion: These data demonstrate the importance of epidemiological studies for the development of effective strategies with the aim of decreasing the incidence of intestinal parasites in children. Moreover, these results contribute to our knowledge of G. duodenalis assemblages circulating in the world and also offer support for future work on the molecular and clinical aspects of giardiasis

Clinical profile of patients diagnosed with tuberculosis treated at theUniversity Hospital of Londrina, Paraná

The objective of this study was to analyze the clinical profileof patients positive for tuberculosis through an epidemiological study, descriptive and retrospective, based on secondary data contained in medical records of patients that attended the Hospital Universitário de Londrina comprising from January 2010 to December 2014. From the medical records available for analysis at the moment of study 86 cases were positive for tuberculosis, being the majority male (65/76%) with age group comprised between 2 to 91 years. The main symptoms presented were cough (50/58%), fever (45/52%) and weight loss (34/40%). Regarding the clinical form, 58/67% of the patients presented the pulmonary form, and 28/33% the non-pulmonary form. Positive cases for tuberculosis in association with HIV/AIDS corresponded to 32/37%. Harmful habits were also reported in patients in which 30/34% were smokers, 20/23% drug users and 14/16% were alcoholics. Against scarcity of published data referring to tuberculosis in our region and its relevance to public health, our study contributes to the epidemiological aspects mainly in relation to the high number of cases of coinfection with Human ImmunodeficiencyVirus and patients with evolution to death, assisting the development and implementation of campaigns or projects aimed at early diagnosis and treatment

PEÇONHA DE Tityus bahiensis REDUZ PROLIFERAÇÃO DE Toxoplasma gondii (CEPA RH) E PRODUÇÃO DE IL-8 NAS CÉLULAS HeLa

Toxoplasma gondii é o protozoário causador da toxoplasmose, infecção que apresenta caráter grave em imunocomprometidos. Os fármacos convencionais para o tratamento desta infecção apresentam alta toxicidade. Peçonhas de escorpião são investigadas uma vez que apresentam efeito direto sobre microrganismos. Objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial toxoplasmicida e imunomodulador da peçonha do escorpião Tityus bahiensis (pTb) sobre taquizoítas da cepa RH de T. gondii em células HeLa. Para averiguar índices de infecção e proliferação celular de formas taquizoítas de T. gondii (5x105) em células HeLa (1x105). Foi avaliada, também, a produção de citocinas nas células HeLa infectadas e tratados com pTb (15 µg/mL). Os resultados demonstram que, após 24 horas de tratamento, nenhuma das concentrações apresentou foi citoxicidade. A pTb não alterou os níveis de infecção das células. Na proliferação intracelular a pTb induziu redução de 17,92% na concentração 4 g/mL, 10,18%, utilizando 7,5 g/mL e 16,82% com 15 g/mL. A pTb modulou apenas a produção de IL-8, reduzindo sua produção em 87,32%. Concluímos que a pTb exerce ação imunomoduladora e anti-proliferativa sobre células HeLa infectadas com Toxoplasma gondii (cepa RH)

Detection of Specific IGA and IGG Antibodies in Paired Serum and Saliva Samples in Human Strongyloidiasis

Strongyloides stercoralis is a nematode parasite that commonly infects the man in tropical and sub-tropical areas. A definitive diagnosis is provided by the larval form visualization in feces. Since few parasite larvae are shed in fecal material, routine parasitologic techniques have shown low sensitivity. Serological assays provide more sensitivity and represent a helpful method for the diagnosis of strongyloidiasis. Recent studies on specific antibodies to protozoan and human neurocysticercosis, have pointed out the salivary secretion as complementary altemative fluid for the diagnosis of these infections, presenting advantages as practical collection, easy handling, low contamination risk to handler. The aim of this study was to detect IgA and IgG antibodies to S. stercoralis in serum and saliva samples in human strongyloidiasis using the indirect immunofluorescence test (IFI) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). A total of 118 paired human serum and saliva samples were tested in IFAT and ELISA using heterologous antigen of Strongyloides ratti. From 118 samples, 48 were of patients with strongyloidiasis (group I), 35 with other intestinal parasitoses (group II), and 35 of copronegative healthy subjects (group III). The highest seropositivity was found in the group I by IFI, with rates of 72.9% for salivary IgA and 70.8% for serum IgG. Similarly, the geometric mean of the values of ELISA index obtained from serum IgG (EI: 122.6) were higher than for serum IgA (EI: 114. 8). All the groups showed statistically significant differences between serum and saliva samples (p<0.05), save the detection of IgG in the group III. In the group I, the coefficients of correlation between leveis of specific IgA and IgG antibodies detected in serum and saliva samples were 0.4194 and 0.4474, respectively. Comparing IFI and ELISA results obtained in the group I, high positivity rates were found in ELISA for both serum IgA (66.7%) and serum IgG (77.1%). Higher concordant results were found for the detection of IgA in both serological assays. Based on the results, it can be conclude that saliva can be used as an altemative fluid in IFI, thus complementing the parasitologic diagnosis of strongyloidiasis. The association of both tests for the detection of IgA and IgG antibodies in serum and saliva samples represents a useful tool for the early diagnosis of human strongyloidiasis.Dissertação (Mestrado)O nematódeo Strongyloides stercoralis é um parasito comumente encontrado infectando o homem em áreas tropicais e subtropicais. O diagnóstico definitivo da parasitose se dá pela visualização das larvas do parasito nas fezes. Poucas larvas do parasito são eliminadas no material fecal, tomando pouco sensíveis as técnicas parasito lógicas de rotina. Testes imunológicos específicos proporcionam maior sensibilidade e, portanto, são de grande auxílio no diagnóstico na estrongiloidíase. Trabalhos recentes na pesquisa de anticorpos específicos a protozoários e na neurocisticercose humana, apontam a secreção salivar como fluido alternativo complementar no diagnóstico dessas infecções, mostrando elevada sensibilidade nos testes, além de apresentar vantagens como praticidade na colheita, facil manuseio, menor risco de contaminação do manipulador. O objetivo deste trabalho foi detectar anticorpos específicos das classes IgA e IgG anti- S. stercoralis, em amostras de soro e saliva total na estrongiloidíase humana, buscando comparar resultados obtidos nas duas espécimes amostrais frente aos testes imunológicos de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Amostras pareadas de soro e saliva de 118 indivíduos foram testadas para detecção de IgA e IgG mú-Strongyloides, utilizando-se antígeno heterólogo de Strongyloides ratti, pelas reações de RIFI e ELISA em 48 indivíduos Strongyloides positivos (grupo I), 35 com outros parasitos intestinais (grupo II) e 35 copronegativos (grupo III). Maior positividade foi detectada no grupo I, pela RIFI em amostras de saliva para IgA (72,9%) e 70,8% nas amostras de soro para IgG. Da mesma forma, os valores expressos em média geométrica por meio de D.O_ IE (densidade óptica- índice ELISA) das amostras mostraram maior reatividade para IgG no soro (122, 6 IE) que IgA (114, 8 IE). Todos os grupos, apresentaram diferença estatisticamente significante entre si, para as amostras de soro e saliva (p< 0,05), exceto para detecção de IgG no grupo III. No grupo I, os índices de correlação dos níveis de anticorpos IgA e IgG (IE) entre as amostras de soro e saliva foram de 0, 4194 e 0, 4474, respectivamente. Ao comparar os testes RIFI e ELISA nas duas amostras, observou-se elevados valores de positividade no ELISA para IgA (66,7%) e 77,1% para IgG, ambos no soro (grupo I). Maiores resultados concordantes foram observados na detecção de IgA nos dois testes imunológicos.Os resultados permitem concluir que a saliva pode ser utilizada como fluido alternativo no teste RIFI, complementando o diagnóstico parasito lógico da estrongiloidíase. Os dois testes associados para detecção de anticorpos IgA e IgG em ambas amostras, são de grande utilidade para o diagnóstico precoce da estrongiloidíase humana

Avaliação da eficácia dos tratamentos com a associação de Sulfadiazina, Pirimetamina e Ácido folínico (SPAF), Azitromicina, infusão de Artemisia annua L. e Espiramicina na prevenção da transmissão vertical da toxoplasmose em Calomys callosus (Rodentia: Cricetidae)

The aim of this study was to verify the efficiency of the treatment with combination of drugs (sulphadiazine, pyrimethamine, and folinic acid- SPFA), azithromycin, Artemisia annua infusion and spiramycin on the prevention vertical transmission of toxoplasmosis in Calomys callosus. Female C. callosus were perorally infected with 20 cysts of Toxoplasma gondii ME-49 strain at the day that a vaginal plug was observed (1st day of pregnancy -dop). Treatment with azithromycin, A. annua infusion and spiramycin started at the 4th dop, while the treatment with drug association started at the 14th dop. Placenta and embryonic tissues were collected for morphological and immunohystochemical analyses, bioassay and PCR from the 15th to 20th dop. No morphological changes were seen in the placenta and embryonic tissues from females treated with SPFA or azithromycin or spiramycin, but embryo atrophy was observed in animals submitted to A. annua infusion treatment. After treatment, parasites were observed in the placenta and fetal (brain and liver) tissues of the animals that were treated with SPFA, A. annua infusion and spiramycin but the number of parasites was lower than in non-treated animals. Parasites were also observed in the placenta of the animals treated with azithromycin, but not in their embryos. Bioassay and PCR results confirmed the immunohistochemical data. In addition bradyzoite immunostaining was observed in placental and fetal tissues of the animals treated with SPAF. In conclusion, the treatment with azithromycin has shown to be more effective to inhibit the vertical transmission of toxoplasmosis in C. callosus.Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisDoutor em Imunologia e Parasitologia AplicadasO objetivo deste trabalho foi verificar a eficácia dos tratamentos com sulfadiazina, pirimetamina e ácido folínico (SPAF) associados, azitromicina, infusão de Artemisia annua e espiramicina na prevenção da transmissão vertical da toxoplasmose em Calomys callosus (Rodentia: Cricetidae). Fêmeas de C. callosus foram oralmente infectadas com 20 cistos de Toxoplasma gondii (cepa ME-49) no dia de detecção da rolha vaginal (primeiro dia de gestação). O tratamento com azitromicina, infusão de A. annua e espiramicina iniciou-se a partir do 4º dia de gestação e o tratamento com a associação de SPAF a partir do 14º dia de gestação e inóculo. Placenta e tecidos embrionários foram coletados para análises morfológica, imuno-histoquímica, bioensaio e reação de PCR do 15º ao 20º dia de gestação/inóculo. Não foram vistas alterações morfológicas nos tecidos placentários e fetais (fígado) de fêmeas tratadas com SPAF, azitromicina e espiramicina mas observou-se a presença de embriões atrofiados em animais submetidos ao tratamento com infusão de A. annua. Após os tratamentos, parasitos foram visibilizados em tecidos placentários e fetais (fígado) dos animais tratados com SPAF, infusão de A. annua e espiramicina, porém a quantidade de imunomarcações do parasito foi significativamente menor nesses animais quando comparados aos não tratados. Parasitos foram também observados nos tecidos placentários dos animais tratados com azitromicina, porém ausentes nos respectivos embriões e os resultados de bioensaio e PCR confirmaram os dados da imunohistoquímica. Adicionalmente observou-se imunomarcações para bradizoítas em tecidos placentários e fetais de animais tratados com SPAF. Em conclusão, o tratamento com azitromicina mostrou-se mais efetivo na inibição da transmissão vertical da toxoplasmose em Calomys callosus

Atividade leishmanicida de extrato hidroalcoólico de própolis brasileira em Leishmania amazonensis

As leishmanioses são consideradas doenças negligenciadas devido às altas incidências, ampla distribuição geográfica e dificuldade no tratamento sendo incluídas na relação de doenças prioritárias pela Organização Mundial da Saúde. Os tratamentos disponíveis para estas doenças apresentam elevada toxicidade, justificando a busca por fármacos alternativos. Estudos prévios com própolis, resina produzida por abelhas, demonstraram sua atividade antiparasitária e imunomoduladora em diversos modelos experimentais. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito in vitro do extrato hidroalcoólico de própolis brasileira, coletado na cidade de Botucatu no estado de São Paulo, sobre formas promastigotas de Leishmania amazonensis, bem como analisar seu efeito in vivo sobre a carga parasitária em baço de camundongos susceptíveis à infecção. Assim, formas promastigotas tratadas com extrato hidroalcoólico de própolis brasileira nas concentrações 5, 10, 25, 50 ou 100 µg/mL apresentaram efeito inibitório sobre a proliferação desses parasitos nos tempos de 24, 96 e 168 h. No entanto, as concentrações de 50 e 100 µg/mL mostraram-se mais eficazes quando comparadas ao controle e às demais concentrações em todos os tempos avaliados. Em relação à carga parasitária, após 30 dias de infecção com L. amazonensis, camundongos BALB/c foram tratados diariamente com a própolis (5mg/kg), via oral ou intraperitoneal, durante 60 dias. Posteriormente, o baço destes animais foi coletado para análise da carga parasitária. O tratamento por via oral reduziu 40% da carga parasitária. Desta forma, a amostra de própolis brasileira testada apresentou ação leishmanicida sobre L. amazonensis em cultura e em camundongos infectados com este protozoário

Temporal and spatial distribution of American tegumentary leishmaniasis in north Paraná: 2010-2015

Abstract INTRODUCTION: Describing the general aspects of American tegumentary leishmaniasis enables the identification of the epidemiological scenario of the disease and the development of preventive actions. METHODS: We analyzed the records of patients with American tegumentary leishmaniasis in north Paraná between 2010 and 2015. RESULTS: We identified 108 cases (mostly in 2014) with the following characteristics: male individuals, rural workers, and ages averaging 56.8 years. Isolated ulcerated lesions were predominant, and Glucantime® was the most frequently used drug. CONCLUSIONS: American tegumentary leishmaniasis remains endemic and affects mostly men found in areas surrounded by woods; its treatment is partially efficient considering its side effects and incidence of recurrences