Generación y caracterización de complejos HDL discoidales con fosfolípidos insaturados

La apolipoproteína A-I (apoAI) es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), y tiene un rol clave en la derivación del exceso de colesterol de los tejidos periféricos hacia el hígado para su catabolismo y eliminación, proceso de gran relevancia antiaterogénica conocido como transporte reverso de colesterol (RCT). ApoAI requiere de extensivos cambios conformacionales para su funcionamiento, ciclando entre los estados libre, unida a membranas y a HDL de morfología discoidal (dHDL) o esférica. Las dHDL, aunque minoritarias en circulación, son intermediarios claves en la remoción celular de lípidos mediada por apoAI. Las dHDL son secretadas por el hígado o generadas por la interacción de apoAI con células en un proceso mediado por el transportador ABCA1. Debido a la dificultad de aislamiento de las dHDL naturales, la mayoría del conocimiento disponible sobre estos complejos lipoproteicos proviene de estudios con dHDL reconstituídas artificialmente. El método más utilizado para su generación es la diálisis de micelas mixtas de fosfolípido/colato. Sin embargo, se supone que este método es el que menos se asemeja al mecanismo de generación in vivo de las dHDL. Existen otros métodos que permiten obtener partículas de dHDL, como la reacción espontánea de apoAI con vesículas de fosfolípidos a la temperatura de transición de fases gel-líquido cristalina o a pH ácido. Se supone que los mecanismos de estos métodos se asemejan más al mecanismo in vivo. De la comparación de resultados experimentales previos, se ha determinado que la capacidad de remoción de colesterol de las dHDL obtenidas por diálisis con colato es mayor cuando se utilizan fosfolípidos hallados normalmente en las membranas plasmáticas(POPC) en comparación a cuando se usan fosfolípidos saturados de cadena corta no hallados normalmente en la naturaleza (DMPC). Asimismo, al comparar la actividad biológica de partículas obtenidas con DMPC por diálisis con colato o por reacción a la temperatura de transición, las segundas poseen una mayor actividad. Debido a ello, en el presente trabajo se intentó obtener partículas de dHDL con POPC a la temperatura de transición o a bajo pH y se comparó la actividad biológica de las dHDL obtenidas con partículas generadas con POPC por diálisis con colato.Facultad de Ciencias Exacta

Generación y caracterización de complejos HDL discoidales con fosfolípidos insaturados

La apolipoproteína A-I (apoAI) es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), y tiene un rol clave en la derivación del exceso de colesterol de los tejidos periféricos hacia el hígado para su catabolismo y eliminación, proceso de gran relevancia antiaterogénica conocido como transporte reverso de colesterol (RCT). ApoAI requiere de extensivos cambios conformacionales para su funcionamiento, ciclando entre los estados libre, unida a membranas y a HDL de morfología discoidal (dHDL) o esférica. Las dHDL, aunque minoritarias en circulación, son intermediarios claves en la remoción celular de lípidos mediada por apoAI. Las dHDL son secretadas por el hígado o generadas por la interacción de apoAI con células en un proceso mediado por el transportador ABCA1. Debido a la dificultad de aislamiento de las dHDL naturales, la mayoría del conocimiento disponible sobre estos complejos lipoproteicos proviene de estudios con dHDL reconstituídas artificialmente. El método más utilizado para su generación es la diálisis de micelas mixtas de fosfolípido/colato. Sin embargo, se supone que este método es el que menos se asemeja al mecanismo de generación in vivo de las dHDL. Existen otros métodos que permiten obtener partículas de dHDL, como la reacción espontánea de apoAI con vesículas de fosfolípidos a la temperatura de transición de fases gel-líquido cristalina o a pH ácido. Se supone que los mecanismos de estos métodos se asemejan más al mecanismo in vivo. De la comparación de resultados experimentales previos, se ha determinado que la capacidad de remoción de colesterol de las dHDL obtenidas por diálisis con colato es mayor cuando se utilizan fosfolípidos hallados normalmente en las membranas plasmáticas(POPC) en comparación a cuando se usan fosfolípidos saturados de cadena corta no hallados normalmente en la naturaleza (DMPC). Asimismo, al comparar la actividad biológica de partículas obtenidas con DMPC por diálisis con colato o por reacción a la temperatura de transición, las segundas poseen una mayor actividad. Debido a ello, en el presente trabajo se intentó obtener partículas de dHDL con POPC a la temperatura de transición o a bajo pH y se comparó la actividad biológica de las dHDL obtenidas con partículas generadas con POPC por diálisis con colato.Facultad de Ciencias Exacta

Generación y caracterización de complejos HDL discoidales con fosfolípidos insaturados

La apolipoproteína A-I (apoAI) es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), y tiene un rol clave en la derivación del exceso de colesterol de los tejidos periféricos hacia el hígado para su catabolismo y eliminación, proceso de gran relevancia antiaterogénica conocido como transporte reverso de colesterol (RCT). ApoAI requiere de extensivos cambios conformacionales para su funcionamiento, ciclando entre los estados libre, unida a membranas y a HDL de morfología discoidal (dHDL) o esférica. Las dHDL, aunque minoritarias en circulación, son intermediarios claves en la remoción celular de lípidos mediada por apoAI. Las dHDL son secretadas por el hígado o generadas por la interacción de apoAI con células en un proceso mediado por el transportador ABCA1. Debido a la dificultad de aislamiento de las dHDL naturales, la mayoría del conocimiento disponible sobre estos complejos lipoproteicos proviene de estudios con dHDL reconstituídas artificialmente. El método más utilizado para su generación es la diálisis de micelas mixtas de fosfolípido/colato. Sin embargo, se supone que este método es el que menos se asemeja al mecanismo de generación in vivo de las dHDL. Existen otros métodos que permiten obtener partículas de dHDL, como la reacción espontánea de apoAI con vesículas de fosfolípidos a la temperatura de transición de fases gel-líquido cristalina o a pH ácido. Se supone que los mecanismos de estos métodos se asemejan más al mecanismo in vivo. De la comparación de resultados experimentales previos, se ha determinado que la capacidad de remoción de colesterol de las dHDL obtenidas por diálisis con colato es mayor cuando se utilizan fosfolípidos hallados normalmente en las membranas plasmáticas(POPC) en comparación a cuando se usan fosfolípidos saturados de cadena corta no hallados normalmente en la naturaleza (DMPC). Asimismo, al comparar la actividad biológica de partículas obtenidas con DMPC por diálisis con colato o por reacción a la temperatura de transición, las segundas poseen una mayor actividad. Debido a ello, en el presente trabajo se intentó obtener partículas de dHDL con POPC a la temperatura de transición o a bajo pH y se comparó la actividad biológica de las dHDL obtenidas con partículas generadas con POPC por diálisis con colato.Facultad de Ciencias Exacta

Apolipoproteína AI e lipoproteínas de alta densidade: estrutura e papel na homeostase do colesterol celular

La apolipoproteína A-I (apoAI) es el componente proteico mayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), cuyo nivel sérico se correlaciona inversamente con el riesgo aterogénico. Las propiedades antiaterogénicas son atribuidas en gran parte al rol protagónico que tiene en el transporte reverso de colesterol (RCT), proceso que remueve el exceso de colesterol de los tejidos periféricos. La apoAI es una proteína anfitrópica formada casi en exclusividad por a-hélices anfipáticas, y presenta una gran flexibilidad conformacional que es crucial para su ciclo funcional, en el que se interconvierte entre diferentes estados: libre, unida a membranas, o a una gran variedad de complejos lipoproteicos de diferente tamaño, morfología y composición. En este reporte se revisa el conocimiento actual sobre la estructura y propiedades de interacción con lípidos de apoAI, en relación a la biogénesis de HDL y su función en el RCT. Se trata en particular la configuración de apoAI en HDL discoidales, así como la interacción con lípidos y la importancia para la remoción celular de colesterol de un par de a-hélices anfipáticas que presentan una distribución particular de los residuos cargados y se localizan en el centro de la molécula de apoAI.Apolipoprotein A-I (apoAI) is the major protein component of high density lipoprotein (HDL), whose serum level is inversely correlated with atherogenic risk. Antiatherogenic properties are largely attributed to its key role in reverse cholesterol transport (RCT), a process that removes cholesterol excess from peripheral tissues. ApoAI is an amphitropic protein that almost exclusively contains amphipathic a-helices, and presents a large conformational flexibility that is crucial for its functional cycle, in which it inter-converts into different states: free or bound to membranes, or into a lipoprotein complex variety of different sizes, compositions and morphologies. This report reviews the current knowledge of the structure and lipid interaction properties of apoAI, in relation with HDL biogenesis and function in RCT. In particular, focus is made on the apoAI configuration in discoidal HDL; as well as on the interaction with lipids, and the importance for cellular cholesterol efflux, of an amphipathic a-helix pair having a particular distribution of the charged residues and that locate at the center of the apoAI molecule.Apolipoproteína A-I (apoAI) é o principal componente proteico das lipoproteínas de alta densidade (HDL), cujo nível sérico se correlaciona inversamente com o risco aterogênico. As propriedades antiaterogênicas são atribuídas, em grande parte, a seu papel principal no transporte reverso de colesterol (RCT), um processo que remove o excesso de colesterol dos tecidos periféricos. A ApoAI é uma proteína anfitrópica constituída quase exclusivamente por α-hélices anfipáticas, e apresenta uma grande flexibilidade conformacional que é essencial para seu ciclo funcional, no qual se interconverte entre diferentes estados: livre, ligada a membranas ou a uma grande variedade de complexos lipoproteicos de diferente tamanho, morfologia e composição. Este relatório analisa o conhecimento atual sobre a estrutura e propriedades de interação com lipídios de apoAI, com relação à biogênese de HDL e sua função no RCT. Em particular, trata-se a configuração de apoAI em HDL discoidais; bem como a interação com lipídios e a importância para a remoção celular de colesterol de um par de α-hélices anfipáticas que apresentam uma distribuição específica dos resíduos carregados e se localizam no centro da milécula de apoAI.Fil: Garda, Horacio Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata; Argentina; ArgentinaFil: Toledo, Juan Domingo.Fil: Gonzalez, Maria Cecilia.Fil: Prieto, Eduardo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas; ArgentinaFil: Cuellar, Luz Ángela.Fil: Cabaleiro, Laura Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata; Argentina; ArgentinaFil: Chirillano, Lucio Alfonso.Fil: Almeyra, Carla Mariel

Trazas de ADN y su implicancia en la obtención de perfiles genéticos. Revisión bibliográfica.

Introducción: El aumento en la sensibilidad de las técnicas empleadas ha permitido la obtención de perfiles genéticos a partir de trazas de ADN que se hayan depositado mediante contacto antes, durante o después de la comisión de los hechos investigados. Por otro lado, la contaminación accidental de los indicios biológicos, con la consecuente interpretación errónea de los resultados genéticos, tienen importantes consecuencias en el proceso judicial. Debido a ello, minimizar las contaminaciones que se pueden generar durante algunas de las fases de recolección o análisis genético, como así también la detección de estos eventos, es una prioridad para los laboratorios forenses. Objetivo: analizar las publicaciones más relevantes respecto a las trazas de ADN, los diferentes tipos de transferencia y contaminación que se pueden obtener en una evidencia. Metodología: se realizó la búsqueda en PubMed, del Instituto Nacional de Salud (NIH), y Google Académico usando las palabras clave en español e inglés: ADN de toque, Transferencia de ADN, Contaminación, Trazas, DNA-TTPR, Persistencia del ADN, Perfiles genéticos contaminados. Resultados: se encontraron más de 500 trabajos relacionados a la temática propuesta en esta revisión. El criterio de selección fue el número de citas, el enfoque y el impacto de estos. Se analizaron 71 artículos donde evaluaron la composición de las muestras de contacto y el origen del material genético que contienen. Además, de las metodologías de recolección, análisis de dichas muestras, la importancia que tiene la transferencia y contaminación del ADN en distintos escenarios posibles. Conclusión: existe riesgo de transferencia de ADN que puede conducir a resultados erróneos, por lo tanto, es importante asegurar la actualización de los procedimientos de la práctica y brindar la capacitación adecuada para garantizar que el personal policial y del que recolecta indicios sea consciente de los riesgos de contaminación y de los diferentes mecanismos de transferencia de material genético

Trace DNA and its implication in obtaining genetic profiles. Bibliographic review

Introducción: El aumento en la sensibilidad de las técnicas empleadas ha permitido la obtención de perfiles genéticos a partir de trazas de ADN que se hayan depositado mediante contacto antes, durante o después de la comisión de los hechos investigados. Por otro lado, la contaminación accidental de los indicios biológicos, con la consecuente interpretación errónea de los resultados genéticos, tienen importantes consecuencias en el proceso judicial. Debido a ello, minimizar las contaminaciones que se pueden generar durante algunas de las fases de recolección o análisis genético, como así también la detección de estos eventos, es una prioridad para los laboratorios forenses. Objetivo: analizar las publicaciones más relevantes respecto a las trazas de ADN, los diferentes tipos de transferencia y contaminación que se pueden obtener en una evidencia. Metodología: se realizó la búsqueda en PubMed, del Instituto Nacional de Salud (NIH), y Google Académico usando las palabras clave en español e inglés: ADN de toque, Transferencia de ADN, Contaminación, Trazas, DNA-TTPR, Persistencia del ADN, Perfiles genéticos contaminados. Resultados: se encontraron más de 500 trabajos relacionados a la temática propuesta en esta revisión. El criterio de selección fue el número de citas, el enfoque y el impacto de estos. Se analizaron 71 artículos donde evaluaron la composición de las muestras de contacto y el origen del material genético que contienen. Además, de las metodologías de recolección, análisis de dichas muestras, la importancia que tiene la transferencia y contaminación del ADN en distintos escenarios posibles. Conclusión: existe riesgo de transferencia de ADN que puede conducir a resultados erróneos, por lo tanto es importante asegurar la actualización de los procedimientos de la práctica y brindar la capacitación adecuada para garantizar que el personal policial y del que recolecta indicios sea consciente de los riesgos de contaminación y de los diferentes mecanismos de transferencia de material genético.Introduction: The increase in the sensitivity of the techniques used has made it possible to obtain genetic profiles from DNA traces that have been deposited through contact before, during or after the commission of the investigated acts. On the other hand, accidental contamination of biological evidence, with the consequent misinterpretation of genetic results, has important consequences in the judicial process. Due to this, minimizing the contamination that can be generated during some of the phases of collection or genetic analysis, as well as the detection of these events, is a priority for forensic laboratories. Objective: analyze the available bibliography regarding DNA traces, the different types of transfer and contamination that can be obtained in evidence. Methodology: the search was carried out in PubMed, from the National Institute of Health (NIH), and Google Scholar using the keywords touch DNA, DNA transfer, Contamination, Traces, DNA-TTPR, DNA persistence, Contaminated genetic profiles. The search was carried out in both Spanish and English. Results: More than 500 papers related to the topic proposed in this review were found. The selection criteria were the number of citations, the approach and the impact of the papers. Seventy articles were analyzed in which the composition of the contact samples and the origin of the genetic material they contain were evaluated. In addition, the collection methodologies, analysis of these samples, the importance of DNA transfer and contamination in different possible scenarios. Conclusions: there is a risk of DNA transfer that can lead to erroneous results, therefore it is important to ensure that practice procedures are updated and adequate training is provided to ensure that police and evidence collectors are aware of the risks of contamination and the different mechanisms of transferring genetic material.Ministerio de Seguridad de la Provincia de Buenos Aires, Superintendencia de Policía Científica, Dirección Química Legal, Departamento de Genética ForenseFacultad de Ciencias Exacta

Apolipoproteína A-I e lipoproteínas de alta densidade: estrutura e papel na homeostase do colesterol celular

La apolipoproteína A-I (apoAI) es el componente proteico mayoritario de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), cuyo nivel sérico se correlaciona inversamente con el riesgo aterogénico. Las propiedades antiaterogénicas son atribuidas en gran parte al rol protagónico que tiene en el transporte reverso de colesterol (RCT), proceso que remueve el exceso de colesterol de los tejidos periféricos. La apoAI es una proteína anfitrópica formada casi en exclusividad por α-hélices anfipáticas, y presenta una gran flexibilidad conformacional que es crucial para su ciclo funcional, en el que se interconvierte entre diferentes estados: libre, unida a membranas, o a una gran variedad de complejos lipoproteicos de diferente tamaño, morfología y composición. En este reporte se revisa el conocimiento actual sobre la estructura y propiedades de interacción con lípidos de apoAI, en relación a la biogénesis de HDL y su función en el RCT. Se trata en particular la configuración de apoAI en HDL discoidales, así como la interacción con lípidos y la importancia para la remoción celular de colesterol de un par de α-hélices anfipáticas que presentan una distribución particular de los residuos cargados y se localizan en el centro de la molécula de apoAI.Apolipoprotein A-I (apoAI) is the major protein component of high density lipoprotein (HDL), whose serum level is inversely correlated with atherogenic risk. Antiatherogenic properties are largely attributed to its key role in reverse cholesterol transport (RCT), a process that removes cholesterol excess from peripheral tissues. ApoAI is an amphitropic protein that almost exclusively contains amphipathic α-helices, and presents a large conformational flexibility that is crucial for its functional cycle, in which it inter-converts into different states: free or bound to membranes, or into a lipoprotein complex variety of different sizes, compositions and morphologies. This report reviews the current knowledge of the structure and lipid interaction properties of apoAI, in relation with HDL biogenesis and function in RCT. In particular, focus is made on the apoAI configuration in discoidal HDL; as well as on the interaction with lipids, and the importance for cellular cholesterol efflux, of an amphipathic α-helix pair having a particular distribution of the charged residues and that locate at the center of the apoAI molecule.Apolipoproteína A-I (apoAI) é o principal componente proteico das lipoproteínas de alta densidade (HDL), cujo nível sérico se correlaciona inversamente com o risco aterogênico. As propriedades antiaterogênicas são atribuídas, em grande parte, a seu papel principal no transporte reverso de colesterol (RCT), um processo que remove o excesso de colesterol dos tecidos periféricos. A ApoAI é uma proteína anfitrópica constituída quase exclusivamente por α-hélices anfipáticas, e apresenta uma grande flexibilidade conformacional que é essencial para seu ciclo funcional, no qual se interconverte entre diferentes estados: livre, ligada a membranas ou a uma grande variedade de complexos lipoproteicos de diferente tamanho, morfologia e composição. Este relatório analisa o conhecimento atual sobre a estrutura e propriedades de interação com lipídios de apoAI, com relação à biogênese de HDL e sua função no RCT. Em particular, trata-se a configuração de apoAI em HDL discoidais; bem como a interação com lipídios e a importância para a remoção celular de colesterol de um par de α-hélices anfipáticas que apresentam uma distribuição específica dos resíduos carregados e se localizam no centro da milécula de apoAI.Facultad de Ciencias MédicasInstituto de Investigaciones Bioquímicas de La PlataFacultad de Ciencias Exacta

Preliminary study ofthe transfer of DNA-TPPR on the contact surface and its distribution pattern

Introducción: En la superficie de la piel humana pueden encontrarse alrededor de 2.000.000 de células, de las cuales, en un día pueden desprenderse cerca de 400.000 (Wickenheiser, 2002). La capacidad de poder atribuir un perfil genético a un individuo en particular, a partir de trazas de ADN de descamación epitelial, ha hecho que se soliciten cada vez más estudios genéticos a objetos posiblemente manipulados que aparecen en la escena del crimen. La efectividad en la recuperación de los indicios biológicos pude varias debido a varios factores, como ser el tiempo que transcurre entre el depósito de la traza y el momento de realizar el análisis de ADN, características propias del donante de la muestra, la superficie a la que debe adherirse la célula y las condiciones ambientales (Meakin y Jamieson, 2013). Recientemente, se acuño el término DNA-TPPR, para hacer referencia a la transferencia, persistencia, prevalencia y recuperación del ADN de muestras biológicas. Para mejorar nuestro conocimiento acerca del DNA-TPPR, estudiamos si la transferencia del ADN a la superficie de un objeto es regular o irregular. Esto es de suma importancia, dado que permitiría al perito seleccionar el área de toma de muestra y asimismo evaluamos llevar a cabo la concentración del DNA recuperado y su implicación en la obtención de perfiles de baja concentración de ADN.Facultad de Ciencias ExactasMinisterio de Seguridad de la provincia de Buenos Aire

Sudden death and next generation sequencing. A review

Introducción: la muerte súbita se trata de un evento fatal e imprevisible. Realizada la autopsia y estudios complementarios, en ausencia de otros hallazgos que expliquen la causa de muerte, se clasifica como muerte súbita inexplicada. Siendo recomendable en estos casos realizar análisis genéticos, especialmente con metodologías de secuenciación de siguiente generación, las que permiten explicar un porcentaje importante de estos casos. Objetivo: analizar las publicaciones más relevantes sobre secuenciación de siguiente generación, aplicada a la autopsia molecular, para determinar aquellas muertes súbitas inexplicables relacionadas a cardiomiopatías y canalopatías. Metodología: se realizó la búsqueda en PubMed del Instituto Nacional de Salud usando palabras clave en inglés y español: NGS, muerte súbita, autopsia molecular y sus combinaciones. Además, se realizaron búsquedas en OMIN y ClinVar relacionada a las diferentes afecciones cardiacas relacionadas a muerte súbita. Los criterios de inclusión: artículos completos en español e inglés de libre acceso, con antigüedad máxima de diez años, realizados en cualquier área geográfica y que trataran sobre la temática. Resultados: para secuenciación de siguiente generación, muerte súbita se encontraron más de 22000 y 65000 publicaciones, respectivamente. En cambio, al combinar las palabras clave se recuperaron 74 trabajos, según los criterios de inclusión y objetivo del trabajo se revisaron 67 artículos. La aplicación de las plataformas de secuenciación en la investigación de casos de muerte súbita tomo auge en el 2014 y en poco tiempo, demostraron su versatilidad para el análisis de una gran cantidad de genes simultáneamente, de forma rápida y a bajo costo. Conclusiones: las patologías asociadas a muerte súbita son múltiples, complejas y pueden generar fenotipos variables que dificultan el análisis genético de las mismas. Las plataformas de secuenciación de siguiente generación son sumamente útiles en los casos de muerte súbita inexplicada, además permiten la identificación de variantes genéticas en familiares para la implementación de medidas preventivas.Introduction: Sudden death is a fatal and unpredictable event. After autopsy and complementary studies, in the absence of other findings that explain the cause of death, it is classified as sudden unexplained death. It is advisable in these cases to perform genetic analysis, especially with next generation sequencing methodologies, which can explain a significant percentage of these cases. Objective: to analyze the most relevant publications regarding NGS applied to molecular autopsy to determine sudden unexplained deaths related to cardiomyopathies and channelopathies. Methodology: A search was performed in PubMed of the National Institute of Health using keywords in English and Spanish: NGS, sudden death, molecular autopsy, and combinations. In addition, OMIN and ClinVar were searched for the different cardiac conditions related to sudden death. Inclusion criteria: complete articles in Spanish and English, open access, not older than 10 years, published in any geographic area and dealing with the subject. Results: For next-generation sequencing and sudden death, more than 22,000 and 65,000 publications were found, respectively. In contrast, combined were 74 papers, where the application of sequencing platforms in the investigation of sudden death cases started in 2014. In a short time, they demonstrated their versatility for the analysis of many genes simultaneously, quickly and at low cost. According to the inclusion criteria and objective of the work, 67 articles were reviewed. Conclusions: The pathologies associated with sudden death are multiple, complex and can generate variable phenotypes that make their genetic analysis difficult. Next-generation sequencing platforms are extremely useful in cases of unexplained sudden death, and allow the identification of genetic variants in family members for the implementation of preventive measures.Facultad de Ciencias ExactasMinisterio de Seguridad de la provincia de Buenos Aire