Using quantitative real-time PCR to detect chimeras in transgenic tobacco and apricot and to monitor their dissociation

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The routine generation of transgenic plants involves analysis of transgene integration into the host genome by means of Southern blotting. However, this technique cannot distinguish between uniformly transformed tissues and the presence of a mixture of transgenic and non-transgenic cells in the same tissue. On the other hand, the use of reporter genes often fails to accurately detect chimerical tissues because their expression can be affected by several factors, including gene silencing and plant development. So, new approaches based on the quantification of the amount of the transgene are needed urgently.</p> <p>Results</p> <p>We show here that chimeras are a very frequent phenomenon observed after regenerating transgenic plants. Spatial and temporal analyses of transformed tobacco and apricot plants with a quantitative, real-time PCR amplification of the neomycin phosphotransferase (<it>npt</it>II) transgene as well as of an internal control (β-<it>actin</it>), used to normalise the amount of target DNA at each reaction, allowed detection of chimeras at unexpected rates. The amount of the <it>npt</it>II transgene differed greatly along with the sub-cultivation period of these plants and was dependent on the localisation of the analysed leaves; being higher in roots and basal leaves, while in the apical leaves it remained at lower levels. These data demonstrate that, unlike the use of the <it>gus </it>marker gene, real-time PCR is a powerful tool for detection of chimeras. Although some authors have proposed a consistent, positive Southern analysis as an alternative methodology for monitoring the dissociation of chimeras, our data show that it does not provide enough proof of uniform transformation. In this work, however, real-time PCR was applied successfully to monitor the dissociation of chimeras in tobacco plants and apricot callus.</p> <p>Conclusions</p> <p>We have developed a rapid and reliable method to detect and estimate the level of chimeras in transgenic tobacco and apricot plants. This method can be extended to monitor the dissociation of chimeras and the recovery of uniformly-transformed plants.</p

Biología floral en albaricoquero y sus implicaciones en la mejora

15 pages, 8 tables, 1 figure.-- Review.[EN] Different aspects related to flower biology have a close link to fruit set failures in apricot and other fruit trees. In this work, studies on pollen viability and germinability, stigma receptivity, ovule development and longevity, the different factors affecting the effective pollination period (EPP), are reviewed. The concept of EPP is based on biological parameters that are the successive steps that take place during the reproductive process and it is the frame within which the factors limiting an appropriate fruit set can be studied. The definition of this concept and its detailed study have allowed determination of the different limiting factors and the design of specific treatments to improve it. Knowledge of the incompatibility phenotype for many apricot cultivars has allowed advising about the planting of singlecultivar orchards. The study of the inheritance of this and other traits in apricot and other fruit trees has allowed planning of hybridisations to minimise or eliminate the production of undesirable seedlings, increasing the efficiency of the breeding programme. Studies on the flower biology of apricot have provided valuable information to help select the appropriate parent cultivars for breeding programmes, also this information is transferred to farmers to avoid losses produced by an inadequate cultivar selection. In this review we intend to give an updated overview of the state of the art in the research and the achievements thus far, as well as considering the implications of these studies for fruit breeding in general, with special attention to apricot breeding.[ES] Diferentes aspectos de la biología de la flor tienen una estrecha relación con los problemas productivos del albaricoquero y otros frutales. En este trabajo se revisan estudios de viabilidad y germinabilidad del polen, receptividad del estigma, desarrollo y longevidad de los óvulos y en definitiva los diferentes aspectos que condicionan el periodo de polinización efectiva (PPE). El concepto de PPE está basado en parámetros biológicos que constituyen los pasos sucesivos que ocurren durante el proceso reproductor y supone el marco dentro del cual se pueden estudiar los factores limitantes para una adecuada fructificación. El establecimiento de este concepto y su estudio detallado han permitido determinar diferentes factores que lo limitan y diseñar tratamientos específicos para mejorarlo. El conocimiento del fenotipo para la incompatibilidad de muchas variedades de albaricoquero ha permitido desaconsejar su establecimiento en plantaciones monovarietales. El estudio del modo de herencia de éste y otros caracteres en albaricoquero y otros frutales, ha permitido la planificación de los cruzamientos para minimizar o eliminar la producción de descendientes indeseables, aumentando así la eficiencia de los programas de mejora. En conjunto, el estudio de la biología floral del albaricoquero ha producido información aplicable tanto en la elección de genitores en el programa de mejora, como transferible directamente al sector productivo para evitar las pérdidas causadas por una incorrecta elección varietal. En esta revisión se ha pretendido dar una visión actualizada del estado de la investigación y las metas alcanzadas, así como de la incidencia de estos estudios en la mejora genética de los frutales en general y del albaricoquero en particular.Peer reviewe

Biología floral en albaricoquero y sus implicaciones en la mejora

15 pages, 8 tables, 1 figure.-- Review.[EN] Different aspects related to flower biology have a close link to fruit set failures in apricot and other fruit trees. In this work, studies on pollen viability and germinability, stigma receptivity, ovule development and longevity, the different factors affecting the effective pollination period (EPP), are reviewed. The concept of EPP is based on biological parameters that are the successive steps that take place during the reproductive process and it is the frame within which the factors limiting an appropriate fruit set can be studied. The definition of this concept and its detailed study have allowed determination of the different limiting factors and the design of specific treatments to improve it. Knowledge of the incompatibility phenotype for many apricot cultivars has allowed advising about the planting of singlecultivar orchards. The study of the inheritance of this and other traits in apricot and other fruit trees has allowed planning of hybridisations to minimise or eliminate the production of undesirable seedlings, increasing the efficiency of the breeding programme. Studies on the flower biology of apricot have provided valuable information to help select the appropriate parent cultivars for breeding programmes, also this information is transferred to farmers to avoid losses produced by an inadequate cultivar selection. In this review we intend to give an updated overview of the state of the art in the research and the achievements thus far, as well as considering the implications of these studies for fruit breeding in general, with special attention to apricot breeding.[ES] Diferentes aspectos de la biología de la flor tienen una estrecha relación con los problemas productivos del albaricoquero y otros frutales. En este trabajo se revisan estudios de viabilidad y germinabilidad del polen, receptividad del estigma, desarrollo y longevidad de los óvulos y en definitiva los diferentes aspectos que condicionan el periodo de polinización efectiva (PPE). El concepto de PPE está basado en parámetros biológicos que constituyen los pasos sucesivos que ocurren durante el proceso reproductor y supone el marco dentro del cual se pueden estudiar los factores limitantes para una adecuada fructificación. El establecimiento de este concepto y su estudio detallado han permitido determinar diferentes factores que lo limitan y diseñar tratamientos específicos para mejorarlo. El conocimiento del fenotipo para la incompatibilidad de muchas variedades de albaricoquero ha permitido desaconsejar su establecimiento en plantaciones monovarietales. El estudio del modo de herencia de éste y otros caracteres en albaricoquero y otros frutales, ha permitido la planificación de los cruzamientos para minimizar o eliminar la producción de descendientes indeseables, aumentando así la eficiencia de los programas de mejora. En conjunto, el estudio de la biología floral del albaricoquero ha producido información aplicable tanto en la elección de genitores en el programa de mejora, como transferible directamente al sector productivo para evitar las pérdidas causadas por una incorrecta elección varietal. En esta revisión se ha pretendido dar una visión actualizada del estado de la investigación y las metas alcanzadas, así como de la incidencia de estos estudios en la mejora genética de los frutales en general y del albaricoquero en particular.Peer reviewe

Photocontrol of productivity and stem elongation of three Rosa x hybrida L. cultivars under photoselective films

Se evaluaron los cambios en la radiación transmitida a través de films fotoselectivos (FS) fluorescentes y el impacto de estos cambios sobre la producción de tres cultivares de rosa para corte Fuego Negro, Maroussia y Anna. Se observó que los FS nuevos o expuestos a la radiación solar vs. noFS disminuyen la transmisión de radiación azul (A) (-28,4 a -32,9%, respectivamente), incrementan el R produciendo una relación R:RL mayor (+3,6%), si bien transmiten algo menos de radiación fotosintéticamente activa que los noFS nuevos. El número de rosas producidas fue significativamente mayor bajo el FS vs. noFS en los tres cv (+24, +32 y +36% en Anna, Fuego Negro y Maroussia, respectivamente), con un peso fresco y seco (PF y PS) significativamente mayor y tallos florales más largos en Anna y Maroussia (50,69 y 43,91 cm vs. 38,91 y 40,04 cm en invierno y primavera, respectivamente), y pimpollos significativamente más largos y de mayor PF y PS en los tres cv. Mayor relación R:RL y menor UV-A y A en la radiación transmitida por films FS aumentaron la cantidad y calidad de determinados cultivares de rosas mostrando una alternativa a los reguladores químicos de crecimiento.This research evaluate changes in the radiation transmitted through a photoselective, fluorescent polyethylene film (PS), and the impact of these changes on the production of three cut rose cultivars, Fuego Negro, Maroussia and Anna. PS vs. nonPS films, new or exposed to solar radiation, decreased transmission of blue radiation (-28.4 to -32.9%, PS-new and PS-old, respectively), increased red radiation, resulting in a R:FR ratio greater 3.6% than for nonPS, although, PS-new and PS-old films transmitted a smaller percentage of PAR than non-PS-new (-16.6 and -22.4%, respectively). The number of roses harvested was significantly higher under PS vs. nonPS film for the three cultivars (+24, +32 and +36% flowers m-2, in Anna, Fuego Negro and Maroussia, respectively), with significantly higher fresh weight (FW) and dry weight (DW), longer floral stems in Anna and Maroussia (50.69 and 43.91 cm vs. 38.91 and 40.04 in winter and spring, respectively) and buds significantly longer and higher FW and DW in the three cv. Higher R:FR and lower UV-A and B radiation of PS greenhouse covers increased quantity and quality of some of these rose cultivars featuring an alternative to chemical growth regulators.Fil: Mascarini, Libertad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de AgronomíaFil: Lorenzo, Gabriel A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de AgronomíaFil: Burgos, Marcelo L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomí

Analysis of the content treatment on the creation of educative audiovisual

El alumnado actual, inmerso en una sociedad repleta de datos, está acostumbrado a gestionar y comunicarse de modo audiovisual en su día a día. Sin embargo, desde el punto de vista académico este aspecto tecnológico -el audiovisual- no está suficientemente integrado en el proceso enseñanza-aprendizaje. Uno de los motivos parece deberse a la escasa formación del profesorado en esta forma de comunicación. En este trabajo, se plantea la elaboración de un documental escolar sobre un tópico de ciencia a alumnos del Grado de Primaria y del Máster de Secundaria, y se analiza cómo evolucionan los contenidos propuestos por los estudiantes en cada uno de los pasos seguidos. Puede destacarse que con el cambio de formato de texto a vídeo el tratamiento de los contenidos cambió. En concreto, la necesidad de redactar un guion forzó a los estudiantes a incorporar una trama argumental en la que engarzar los contenidos escolares. Esta necesidad discursiva forzó la búsqueda de situaciones reales y la consecuente ubicación de los contenidos escolares en unos más cercanos al alumnado. Esto facilitó la aparición de sus intereses, la vinculación entre su mundo y el contexto académico y, todo ello, con su modo de expresarse. Por otra parte, la incorporación de imágenes obligó a los futuros profesores a mostrar ordenadamente los hechos; tuvieron que considerar qué elementos visuales eran prioritarios, cuáles secundarios, cómo vincularlos, cómo indicar al espectador dónde mirar y cómo mirar. En definitiva, estos procedimientos expresados en imágenes pasaron a ser contenidos de aprendizaje en sí mismos.Nowadays, students are get used to communicate themselves and manage huge amount of data due to current society is based on audiovisual. However, these aspects are not considered enough from a teachinglearning process point of view. One of the reasons seems to be due to the fact teachers have a limited training in this way of communication. In this work, the elaboration of an educative audiovisual on a topic of science is proposed to students of the Master’s Degree in Secondary School and Bachelor’s Degree in Primary Education, and the evolution of the contents proposed by the students through each of the steps followed is analyzed. It can be highlighted a change of the content treatment from initial Script to final Video. In particular, writing a Script forced students to incorporate a plot story where academic contents were exposed. Consequently, they carried out a searching of real situations with the aim to situate the school contents closer to pupils. In this way, their interest awoke and they looked for a connection between their reality and the academic context. Besides, incorporating images made future teachers show the facts one after another; they had to consider which elements were more important and indicate viewer where and how he must look at. In short, these procedures based on images turned into learning contents by themselves

Analysis of the content treatment on the creation of educational audiovisual (part II): the progressions detected

La creación de audiovisuales en el aula ha pasado en muy pocos años a ser una herramienta de utilización masiva. Pero, la celeridad de los cambios producidos ha significado que una buena parte del profesorado actual no disponga de ejemplos vivenciales en su instrucción como alumnos. Esto implica que existe una gran cantidad de cuestiones sobre el modo apropiado de incorporar estos recursos: cómo utilizar YouTube, cómo diseñar y realizar vídeo de contenido educativo, cómo incorporar estas cuestiones a la formación del profesorado, etc. En este trabajo, nos centramos en analizar las progresiones de los futuros docentes en el tratamiento de los contenidos cuando abordan la creación de audiovisuales educativos sobre cuestiones de ciencia. Nuestros resultados indican que la falta de referentes previos para esta tarea impulsa a los futuros profesores a indagar nuevos caminos. Desde el punto de vista de formadores de docentes, esto supondría que enfrentar a nuestros estudiantes a tareas alejadas de lo que les resulta familiar hace que abandonen sus roles estandarizados. Es decir, parece que el cambio de formato (de texto a vídeo en la generación de contenidos) induce a una evolución hacia un planteamiento menos estandarizado, más innovador, de los contenidos tratados.The audiovisual creation in the classroom has become a tool of mass use in a few years. But the speed of the changes produced has meant that a good part of the current faculty does not have life-experienced examples in their instruction as students. This implies that there are many questions about the appropriate way to incorporate those resources: how to use YouTube, how to design and produce educational-content videos, how to include these issues into teacher training, etc. In this paper, we focus on analyzing the future-teachers progressions in the treatment of contents when the teachers face the creation of educational audiovisual on science topics. Our results indicate that the lack of previous references for this task pushes future teachers to explore new paths. From the point of view of teacher educators, this would imply that confronting our students to unfamiliar tasks causes them to abandon their standardized roles. That is to say, it seems that the change of format (from text to video for the content creation) induces to an evolution towards a less standardized and more innovative approach to the content treated

Characterization of Jatropha curcas accessions based in plant growth traits and oil quality

Variability in growth and reproductive characteristics, seed traits, quality and oil content of six accessions of Jatropha curcas growing in Murcia (Spain) under greenhouse conditions were analysed. Differences were found among accessions in branch length, ratio female to male flowers (F/M), productions, seed weight, endosperm weight, percentage of endosperm and percentage of aborted seeds oil contents, fatty acids composition and quality indexes of the biodiesel. Two genotypes (8-8 and 6-3) have shown a good vigor plant, the best F/M ratio, and appropriate average productions. In addition, these accessions showed the highest average single seed weights, and the best average endosperm weights. The highest total seed oil percentages were observed in the accessions 4-5 (42.42 ± 0.26), 6-3 (41.51 ± 0.20), and 8-8 (40.41 ± 0.73), whereas percentages lower than 30% were recorded in the others. The percentage of endosperm oil ranged from 42.72 ± 0.98% to 65.71 ± 0.36%. In relation to the fatty acids composition, the highest monounsaturated fatty acids percentages with the highest concentration of oleic acid and the lowest concentration of linolenic acid were observed in three genotypes (4-5, 8-8 and 6-3). The biodiesel obtained from these accessions presented high cetane number and low iodine value, which indicates the good ignition quality and stability of the oil. The knowledge of plant growth parameters and oil quality of the studied genotypes could be useful to choose the appropriate ones to be grown under subtropical climatic conditions or to be used as parents in a breeding program

Evaluación de la distribución de compuestos fenólicos en las fases del alperujo: aporte a su manejo

La finalidad de la presente publicación es transferir al sector agrícola y agroindustrial los resultados de los estudios llevados a cabo por nuestro equipo de investigación en la Facultad de Ciencias Agrarias de la UNCA y que fueran presentados en eventos científicos y evaluados por expertos en la temática.Fil: Gomez, Patricia. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Segovia, Adrian Federico. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Lorenzo, María Emilia. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ribotta, Pablo Daniel. Universidad Nacional de Córdoba. Secretaría de Ciencia y Tecnología. Instituto Superior de Investigación, Desarrollo y Servicio de Alimentos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bravo, Maria. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Burgos, Antonella. Universidad Nacional de Catamarca. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentin

Multidisciplinary consensus on the approach to hospital malnutrition in Spain

Rationale: Disease-related malnutrition constitutes a highly prevalent healthcare problem with high costs associated. In Spain, the prevalence of malnutrition in hospitalized patients has been reported from 30% to 50%. Objectives: Main purposes of this consensus document were to establish recommendations that facilitate decision- making and action to prevent and early-diagnose disease-related hospital malnutrition, on the management of nutritional support methods and actions to evaluate nutritional treatment compliance and efficacy. Methods: A systematic bibliographical search of authors was performed, complemented by updated bibliography by author references up to 2010. From this review, some recommendations were defined, modified and critically evaluated by the representatives of scientific societies in a consensus conference (Dec 2010) following a structured brainstorming technique: the Metaplan® technique. A double validation process was undertaken until final recommendations were obtained. Results: 30 consensus recommendations for the prevention and management of hospital malnutrition are presented in this document. Recommendations cover all clinical care settings as well as prevention, screening, diagnosis, treatment and follow-up of disease-related malnutrition. Conclusions: Nutritional screening is strongly recommended at all clinical settings when nutritional risk factors are identified or there is clinical suspicion of malnutrition. Nutritional assessment should be designed and performed according to centers’ resources, but clearly identified protocols should be available.La desnutrición relacionada con la enfermedad constituye un problema sanitario de elevada prevalencia y altos costes. En España, la prevalencia de desnutrición de los pacientes hospitalizados se ha estimado entre el 30% y el 50%. Objetivos: El objetivo principal de este consenso fue establecer recomendaciones para facilitar la toma de decisiones para la prevención y el diagnostico precoz de la desnutrición hospitalaria, el manejo del soporte nutricional, y las acciones para evaluar el cumplimiento de la intervención nutricional y su eficacia. Métodos: Se realizó una búsqueda sistemática de autor complementada por bibliografía actualizada por referencias de autor hasta el año 2010. A partir de esta revisión, se definieron algunas recomendaciones que fueron criticadas y modificadas por los representantes de las Sociedades Científicas participantes en una conferencia de consenso (Diciembre 2010) siguiendo una técnica de brainstorming estructurado: la técnica Metaplan®. Se realizaron dos vueltas de validación de las recomendaciones hasta obtener las recomendaciones finales. Resultados: Este documento presenta 30 recomendaciones para la prevención y el manejo de la desnutrición hospitalaria. Las mismas cubren todas las áreas de actuación clínica así como la prevención, cribado, diagnóstico, tratamiento y seguimiento de la desnutrición hospitalaria relacionada con la enfermedad. Conclusiones: Se recomienda enérgicamente el cribado nutricional en todas las áreas de actuación clínica cuando se identifiquen factores de riesgo nutricional o sospecha clínica de desnutrición. La valoración del estado nutricional debe diseñarse y realizarse de acuerdo a los recursos disponibles en cada centro, disponiendo de claros protocolos de actuación

Cytosolic ascorbate peroxidase and Cu, Zn-superoxide dismutase improve seed germination, plant growth, nutrient uptake and drought tolerance in tobacco

The effects of over-expression of two cytosolic antioxidant enzymes (Cu, Zn-SOD and/or APX) on plant nutrition, gas exchange, chlorophyll fluorescence, seed viability and germination in transgenic tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi) under deficit irrigation or salinity conditions were investigated. Three transgenic lines of tobacco were used in this study: line 17, harboring 2 copies of the cytosolic CuZn-SOD (cytsod) gene; line 51, with 2 copies of the cytosolic APX (cytapx) gene and line 39, harboring one copy of each gene. Over-expression of cytosolic antioxidants enzymes in tobacco plants resulted in a better growth performance that correlated with an improved photosynthetic capacity and nutrient uptake. Moreover, cytsod or cytapx genes promoted seed germination, and enhanced tolerance to mild water stress. In addition, this enhanced antioxidant capacity protected seeds from ageing during prolonged storage, and stimulated germination under salt stress conditions. These results suggest that cytosolic antioxidant transgenes are useful tools to improve drought tolerance, nutrient uptake and seed germination under stressful conditions.PDV acknowledges the CSIC and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness for his ‘Ramon y Cajal’ research contract, co-financed by FEDER funds. This work was supported by the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (Project CICYT BFU2009-07443) co-financed by FEDER funds, and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (Project INIA, RTA2013-00026-C03-00).Peer reviewe