Biased agonism at histamine H1 receptors

GPCRs (G-protein coupled receptors) exist as conformational collectionsin which different conformations lead to differential downstream behaviors suchas G-protein activation, receptor phosphorylation or internalization. In thiscontext, a ligand may cause differential activation of some, but not all, ofthe signaling events associated to a particular receptor and would lead tobiased agonism. On the other hand, antihistamines used clinically asantiallergics rank among the most widely prescribed and over-the-counter drugsin the world. The aim of the present study was to investigate whether widelyused histamine H1 receptor (H1R) ligands that exert therapeutic actions byblocking the effects of histamine, due to null or negative efficacy towards Gαq-phospholipaseC (PLC)-inositol triphosphates (IP3) and Nuclear Factor-kB cascades, coulddisplay positive efficacy concerning receptor desensitizationor internalization. We used A549 cells, derivedfrom human lung epithelium, endogenously expressing the H1R. Pretreatment of A549 cells during 10 minutes with 1, 3, 10 and 33 μM ofchlorpheniramine and triprolidine prevented the increase of cytosolic Ca2+levels evoked by 100 μM of histamine suggesting that both ligands maypromote H1R desensitization. On the contrary, pretreatment with diphenhydraminedid not modify the H1R response to the agonist. To examine the mechanismsinvolved in these desensitizations we transfected A549 cells with GRK2 anddynamin dominant-negative mutants. Our results indicate that although thesemutants potentiate calcium response to histamine and partially impairedhistamine induced H1R desensitization they did not revert chlorpheniramine nortriprolidine induced desensitization. Finally, preliminary results of saturation-binding assays suggest that some ofthese ligands may also lead to receptor internalization. In conclusion, H1Rdesensitization and/or internalization promoted by these ligands demonstratetheir biased nature and could explain their undesired effects. Accordingly, thisstudy contributes to a correct classification, providing evidence for a morerational and safe use of antihistamines.Fil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Echeverría, Emiliana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Díaz Nebreda, Antonela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Zappia, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Shayo, Carina Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Monczor, Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaLXIII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología y Reunión Anual de la Asociación Argentina de FisiologíaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaAsociación Argentina de VirologíaAsociación Argentina de Nanomedicina

The cross-regulation between h1 and h2 histamine receptors modulates the behavior of h2 receptor blockers

Histamine modulates severalbiological processes, including allergy and gastric acid secretion, through H1and H2 receptors (H1R, H2R). H2R blockers are mainlyused to treat gastrointestinaldisorders, such as gastric acid secretion and there is much interest on theirrepositioning for other pathologies. Thus, deepunderstanding of theirmechanisms of action is needed. We have previously described that H1R and H2Ragonists induce the receptor?s co-internalization andcross-desensitization. We havealso reported that H2R blockers lead to desensitization and internalization ofH2 receptor.The aim of this work was tostudy the capacity of H2R blockers (cimetidine, ranitidine and famotidine) toinduce the H1R cross-desensitization and how thismechanism affects the behaviorof H2R blockers. In this way, we used promonocytic U937 cells (endogenouslyexpressing H1R and H2R), PMA-differentiated U937cells and HEK293 cellstransiently transfected with one or both receptors.Fil: Díaz Nebreda, Antonela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sahores, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Zappia, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Rodriguez Gonzalez, Angela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Monczor, Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Shayo, Carina Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaLXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología y Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.Mar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de Fisiologí

Upregulation of the angiotensin-converting enzyme 2/angiotensin-(1-7)/Mas receptor axis in the heart and the kidney of growth hormone receptor knock-out mice

Objective: Growth hormone (GH) resistance leads to enhanced insulin sensitivity, decreased systolic blood pressure and increased lifespan. The aim of this study was to determine if there is a shift in the balance of the renin-angiotensin system (RAS) towards the ACE2/Ang-(1-7)/Mas receptor axis in the heart and the kidney of a model of GH resistance and retarded aging, the GH receptor knockout (GHR. -/-) mouse. Design: RAS components were evaluated in the heart and the kidney of GHR -/- and control mice by immunohistochemistry and Western blotting (n = 12 for both groups). Results: The immunostaining of Ang-(1-7) was increased in both the heart and the kidney of GHR. -/- mice. These changes were concomitant with an increased immunostaining of the Mas receptor and ACE2 in both tissues. The immunostaining of AT1 receptor was reduced in heart and kidney of GHR -/- mice while that of AT2 receptor was increased in the heart and unaltered in the kidney. Ang II, ACE and angiotensinogen levels remained unaltered in the heart and the kidney of GH resistant mice. These results were confirmed by Western blotting and correlated with a significant increase in the abundance of the endothelial nitric oxide synthase in both tissues. Conclusions: The shift within the RAS towards an exacerbation of the ACE2/Ang-(1-7)/Mas receptor axis observed in GHR. -/- mice could be related to a protective role in cardiac and renal function; and thus, possibly contribute to the decreased incidence of cardiovascular diseases displayed by this animal model of longevity.Fil: Giani, Jorge Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Miquet, Johanna Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Muñoz, Marina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Toblli, Jorge Eduardo. Hospital Aleman. Laboratorio de Medicina Experimental; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Masternak, Michal M.. University of Central Florida; Estados Unidos. Polish Academy of Sciences; ArgentinaFil: Kopchick, John J.. Ohio University; Estados UnidosFil: Bartke, Andrzej. Southern Illinois University; Estados UnidosFil: Turyn, Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Dominici, Fernando Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Participation of gai-adenylate cyclase and ERK1/2 in mas receptor signaling pathways

The MasR receptor (MasR) is an orphan G protein-coupled receptor proposed as a candidate for mediating the angiotensin (Ang)-converting enzyme 2-Ang-(1-7) protective axis of renin-angiotensin system. This receptor has been suggested to participate in several physiological processes including cardio- and reno-protection and regulation of the central nervous system function. Although the knowledge of the signaling mechanisms associated with MasR is essential for therapeutic purposes, these are still poorly understood. Accordingly, in the current study we aimed to characterize the signaling pathways triggered by the MasR. To do that, we measured cAMP and Ca2+ levels in both naïve and MasR transfected cells in basal conditions and upon incubation with putative MasR ligands. Besides, we evaluated activation of ERK1/2 by Ang-(1-7) in MasR transfected cells. Results indicated the existence of a high degree of MasR constitutive activity toward cAMP modulation. This effect was not mediated by the PDZ-binding motif of the MasR but by receptor coupling to Gai-adenylyl cyclase signaling pathway. Incubation of MasR transfected cells with Ang-(1-7) or the synthetic ligand AVE 0991 amplified MasR negative modulation of cAMP levels. On the other hand, we provided evidence for lack of MasR-associated modulation of Ca2+ levels by Ang-(1-7). Finally, it was determined that the MasR attenuated Ang-(1-7)-induced ERK1/2 phosphorylation mediated by AT1R. We provided further characterization of MasR signaling mechanisms regarding its constitutive activity and response to putative ligands. This information could prove useful to better describe MasR physiological role and development of therapeutic agents that could modulate its action.Fil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Echeverría, Emiliana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Sosa, Máximo Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Quiroga, Diego Tomás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Muñoz, Marina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Monczor, Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Dominici, Fernando Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Involvement of histamine H1 and H2 receptor inverse agonists in receptor's crossregulation

Histamine [2-(4-Imidazolyl)-ethylamine] modulates different biological processes, through histamine H1 and H2 receptors, and their respective blockers are widely used in treating allergic and gastric acid-related disorders. Histamine H1 and H2 receptor crossdesensitization and cointernalization induced by its agonists have been previously described. In this study, we show how this crosstalk determines the response to histamine H1 and H2 receptor inverse agonists and how histamine H1 and H2 receptor inverse agonists interfere with the other receptor's response to agonists. By desensitization assays we demonstrate that histamine H1 and H2 receptor inverse agonists induce a crossregulation between both receptors. In this sense, the histamine H1 receptor inverse agonists desensitize the cAMP response to amthamine, a histamine H2 receptor agonist. In turn, histamine H2 receptor inverse agonists interfere with histamine H1 receptor signaling. We also determine that the crossdesensitization induced by histamine H1 or H2 receptor agonists alters the histamine inverse agonists receptor response: activation of histamine H1 receptor affects cAMP response induced by histamine H2 receptor inverse agonists, whereas histamine H2 receptor agonist induces a negative regulation on the anti-inflammatory response of histamine H1 receptor inverse agonists. Binding studies revealed that histamine H1 and H2 receptors cointernalize after stimulus with histamine receptor inverse agonists. In addition, the inhibition of the internalization process prevents receptor crossregulation. Our study provides new insights in the mechanisms of action of histamine H1 and H2 receptors that explain the effect of histamine H1 and H2 receptor inverse agonists and opens up new venues for novel therapeutic applications.Fil: Díaz, Antonela Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Zappia, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Rodriguez Gonzalez, Angela Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Sahores, Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Sosa, Máximo Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Monczor, Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Shayo, Carina Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentin

The Regulator of G Protein Signaling Homologous Domain of G Protein-Coupled Receptor Kinase 2 Mediates Short-Term Desensitization of β3-Adrenergic Receptor

G protein coupled receptor (GPCR) kinases (GRKs) are key regulators of GPCR signaling. Canonical mechanism of GPCR desensitization involves receptor phosphorylation by GRKs followed by arrestin recruitment and uncoupling from heterotrimeric G protein. Although β3-adrenergic receptor (β3AR) lacks phosphorylation sites by GRKs, agonist treatment proved to induce β3AR desensitization in many cell types. Here we show that GRK2 mediates short-term desensitization of β3AR by a phosphorylation independent mechanism but mediated by its domain homologous to the regulator of G protein signaling (RGS). HEK293T cells overexpressing human β3AR presented a short-term desensitization of cAMP response stimulated by the β3AR agonist, BRL37344, and not by forskolin. We found that β3AR desensitization was higher in cells co-transfected with GRK2. Similarly, overexpression of the RGS homology domain but not kinase domain of GRK2 increased β3AR desensitization. Consistently, stimulation of β3AR increased interaction between GRK2 and Gαs subunit. Furthermore, in rat cardiomyocytes endogenously expressing β3AR, transfection with dominant negative mutant of RH domain of GRK2 (GRK2/D110A) increased cAMP response to BRL37344 and inhibited receptor desensitization. We expect our study to be a starting point for more sophisticated characterization of the consequences of GRK2 mediated desensitization of the β3AR in heart function and disease.Fil: Echeverría, Emiliana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Cabrera, Maia Diana Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Sosa, Máximo Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Ripoll, Sonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Yaneff, Agustín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Monczor, Federico. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Shayo, Carina Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; Argentin

Identification of inhibitors of the RGS homology domain of GRK2 by docking-based virtual screening

Aims: G protein-coupled receptor (GPCR) kinases (GRKs) are mainly involved in the desensitization of GPCRs. Among them, GRK2 has been described to be upregulated in many pathological conditions and its crucial role in cardiac hypertrophy, hypertension, and heart failure promoted the search for pharmacological inhibitors of its activity. There have been several reports of potent and selective inhibitors of GRK2, most of them directed to the kinase domain of the protein. However, the homologous to the regulator of G protein signaling (RH) domain of GRK2 has also been shown to regulate GPCRs signaling. Herein, we searched for potential inhibitors of receptor desensitization mediated by RH domain of GRK2. Materials and methods: We performed a docking-based virtual screening utilizing the crystal structure of GRK2 to search for potential inhibitors of the interaction between GRK2 and Gαq protein. To evaluate the biological activity of compounds we measured, calcium response of histamine H1 receptor (H1R) using Fura-2AM dye and H1R internalization by saturation binding experiments in A549 cells. GRK2(45–178)GFP translocation was determined in HeLa cells through confocal fluorescence imaging. Key findings: We identified inhibitors of GRK2 able to reduce the RH mediated desensitization of the histamine H1 receptor and GRK2 translocation to plasma membrane. Also candidates presented adequate lipophilia and cytotoxicity profile. Significance: We obtained compounds with the ability of reducing RH mediated actions of GRK2 that can be useful as a starting point in the development of novel drug candidates aimed to treat pathologies were GRK2 plays a key role.Fil: Echeverría, Emiliana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Velez Rueda, Ana Julia. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cabrera, Maia Diana Eliana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnologia. Laboratorio de Farmacologia Molecular.; ArgentinaFil: Juritz, Ezequiel. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina. Universidad Andrés Bello; Chile. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Fabian, Lucas Emanuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Metabolismo del Fármaco. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Metabolismo del Fármaco; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Lorenzano Menna, Pablo. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnologia. Laboratorio de Farmacologia Molecular.; Argentina. Universidad Nacional de Rosario; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fernandez, Natalia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; Argentin

Estudio de los mecanismos de señalización asociados al receptor Mas

The Mas receptor (MasR) is a class A Orphan G-protein-coupled receptor (GPCR). Although angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] has been reported as its putative ligand, the intracellular signaling pathways activated by the MasR remain only partially characterized. In this study we examined MasR-dependent activation of G protein-mediated and ERK mediated signaling pathways. Transfection of HEK293T cells with a wild-type MasR (wt-MasR) construct resulted in a decrease in basal cAMP levels that depended on the amount of wt-MasR protein expressed and was also observed when increasing amounts of mutant MasR lacking the PDZ binding motif were expressed. Pretreatment of wt-MasR expressing cells with pertussis toxin restored basal cAMP levels. Also, cAMP production after forskolin stimulation was lower in cells expressing wt-MasR than in control cells. These results indicate a high level of constitutive receptor activity towards cAMP modulation involving G?i-protein. Treatment with Ang(1-7) increased p-ERK levels in both wt-MasR and in mock-transfected HEK293T cells. MasR-overexpression lowered this effect. In view of these results we analized endogenous receptors expression different from MasR that could be mediating Ang-(1-7) effect. As MasR has been suggested to participate in cardiovascular and renal functions, comprehensive pharmacological characterization of MasR signaling is essential for developing clinical therapeutics targeting MasR function.Fil: Burghi, Valeria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, ArgentinaEl receptor Mas (MasR) es un receptor de membrana acoplado a proteínas G (GPCR) que ha sido incluído dentro del grupo de GPCRs de tipo A huérfanos. A pesar de que la hormona peptídica angiotensina-(1?7) [Ang-(1?7)] perteneciente al sistema renina-angiotensina (SRA) ha sido propuesta como su ligando endógeno, la clasificación del MasR no ha sido modificada. En este trabajo de tesis se presentan resultados enfocados en dilucidar la participación de las vías de señalización dependientes de proteínas G y dependientes de kinasas activadas por mitógenos (MAPK) en la respuesta del MasR. En particular, se demostró que el MasR es capaz de modular los niveles de AMPc de forma constitutiva y mediante la activación de la proteína G?i. La Ang-(1-7) y un agonista sintético AVE 0991 actuaron como agonistas para esta vía. Sin embargo, la Ang-(1-7) no fue capaz de activar la vía G?q. Por otro lado, esta hormona provocó la fosforilación de ERK1/2 en células HEK293 control y el MasR atenuó este efecto. Debido a la presencia endógena del receptor de angiotensina II de tipo 1 en dichas células, podría postularse que el MasR ejerce una modulación negativa sobre dicha vía

Modulation of the action of insulin by angiotensin-(1-7)

The prevalence of Type 2 diabetes mellitus is predicted to increase dramatically over the coming years and the clinical implications and healthcare costs from this disease are overwhelming. In many cases, this pathological condition is linked to a cluster of metabolic disorders, such as obesity, systemic hypertension and dyslipidaemia, defined as the metabolic syndrome. Insulin resistance has been proposed as the key mediator of all of these features and contributes to the associated high cardiovascular morbidity and mortality. Although the molecular mechanisms behind insulin resistance are not completely understood, a negative cross-talk between AngII (angiotensin II) and the insulin signalling pathway has been the focus of great interest in the last decade. Indeed, substantial evidence has shown that anti-hypertensive drugs that block the RAS (renin–angiotensin system) may also act to prevent diabetes. Despite its long history, new components within the RAS continue to be discovered. Among them, Ang-(1–7) [angiotensin-(1–7)] has gained special attention as a counter-regulatory hormone opposing many of the AngII-related deleterious effects. Specifically, we and others have demonstrated that Ang-(1–7) improves the action of insulin and opposes the negative effect that AngII exerts at this level. In the present review, we provide evidence showing that insulin and Ang-(1–7) share a common intracellular signalling pathway. We also address the molecular mechanisms behind the beneficial effects of Ang-(1–7) on AngII-mediated insulin resistance. Finally, we discuss potential therapeutic approaches leading to modulation of the ACE2 (angiotensin-converting enzyme 2)/Ang-(1–7)/Mas receptor axis as a very attractive strategy in the therapy of the metabolic syndrome and diabetes-associated diseases.Fil: Dominici, Fernando Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Burghi, Valeria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Muñoz, Marina Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Giani, Jorge Fernando. Cedars Sinai Medical Center; Estados Unidos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin