Composition génétique de semences vaccinales H3N2 et construction d'un virus vecteur : une histoire d'encapsidation de segments chez les virus influenza de type A

The packaging of the eight segments corresponding to the influenza A viruses genomeis a key process of the viral replication as well as a stake of actual scientific researchesbecause it leads to reassortant viruses, e.g. pandemic viruses. We studied the two main facetsof influenza segment packaging: reassortment, during vaccine seeds production and foreignsegment incorporation for influenza vector construction. Vaccine seeds are produced bycoinfection of hens’ eggs with two viruses, a donor one (reference circulating strain) and anacceptor one (A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8)). Analysis of internal genetic composition ofthirteen H3N2 vaccine seeds reveals that PB1 segment of H3N2 donor strain is incorporatedin more than fifty per cent of the cases. Moreover, coinfection events lead to an extremelywide range of reassortants from 6:2 to 2:6 (PR8:H3N2). Segment incorporation competitionassays performed using plasmid-based reverse genetics show that selective packaging of PB1segment is based on genetic environment, i.e. viral origin of HA and NA segments. Thesecond part of my PhD work has been devoted to replicative influenza vector based on H3virus isolated from patients without NA segment at the native stage. None of the gfptransgenic constructions containing reporter gene have been incorporated in viral particles,contrary to literature studies performed using H1N1 laboratory-adapted strains. Even ifmolecular mechanisms controlling influenza A viruses segments incorporation remain stillcomplex, genetic background seems to be an essential element which must be considered withinterest.L’empaquetage des huit segments du génome des virus influenza de type A est une des étapes clef du cycle viral. Il intervient également dans l’apparition de virus réassortants, les virus pandémiques par exemple, ce qui en fait un enjeu fondamental de la recherche actuelle.Nous avons étudié ce mécanisme au cours de deux études, la première portant sur les vaccins antigrippaux (réassortiment), la seconde visant à construire un virus vecteur (incorporation d’un segment hétérologue). Les semences vaccinales sont obtenues par co-infection d’oeufs de poule embryonnés avec deux souches virales une donneuse (souche circulante de référence) et une accepteuse (A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8)). L'analyse de la composition génétique de treize semences vaccinales H3N2 montre que le segment PB1 de la souche donneuse est présent dans plus de 50 % des semences analysées et qu’une grande variété de réassortants,allant de 6:2 à 2:6 (PR8:H3N2), peut résulter de ces coinfections. Des expériences de compétition d'encapsidation de segments à l’aide de la génétique inverse révèlent que l'encapsidation sélective du segment PB1 dépend de son environnement génétique notamment l’origine virale des segments HA et NA. La seconde partie de mon travail de thèse a été consacrée à la construction d’un vecteur réplicatif sur la base d’un virus influenza H3 naturel sans segment NA. Aucune des constructions contenant le transgène gfp n’a été incorporée dans les particules virales, contrairement à ce qui a été décrit dans la littérature. Bien que les mécanismes moléculaires régissant l’incorporation des segments des virus influenza A demeurent très complexes, le fond génétique semble être déterminant pour ce processus

Bilan 2: Projet Orbivac

National audienc

Genetic composition of H3N2 vaccine seeds and vector virus construction : a story of packaging in type A Influenza viruses

L’empaquetage des huit segments du génome des virus influenza de type A est une des étapes clef du cycle viral. Il intervient également dans l’apparition de virus réassortants, les virus pandémiques par exemple, ce qui en fait un enjeu fondamental de la recherche actuelle.Nous avons étudié ce mécanisme au cours de deux études, la première portant sur les vaccins antigrippaux (réassortiment), la seconde visant à construire un virus vecteur (incorporation d’un segment hétérologue). Les semences vaccinales sont obtenues par co-infection d’oeufs de poule embryonnés avec deux souches virales une donneuse (souche circulante de référence) et une accepteuse (A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8)). L'analyse de la composition génétique de treize semences vaccinales H3N2 montre que le segment PB1 de la souche donneuse est présent dans plus de 50 % des semences analysées et qu’une grande variété de réassortants,allant de 6:2 à 2:6 (PR8:H3N2), peut résulter de ces coinfections. Des expériences de compétition d'encapsidation de segments à l’aide de la génétique inverse révèlent que l'encapsidation sélective du segment PB1 dépend de son environnement génétique notamment l’origine virale des segments HA et NA. La seconde partie de mon travail de thèse a été consacrée à la construction d’un vecteur réplicatif sur la base d’un virus influenza H3 naturel sans segment NA. Aucune des constructions contenant le transgène gfp n’a été incorporée dans les particules virales, contrairement à ce qui a été décrit dans la littérature. Bien que les mécanismes moléculaires régissant l’incorporation des segments des virus influenza A demeurent très complexes, le fond génétique semble être déterminant pour ce processus.The packaging of the eight segments corresponding to the influenza A viruses genomeis a key process of the viral replication as well as a stake of actual scientific researchesbecause it leads to reassortant viruses, e.g. pandemic viruses. We studied the two main facetsof influenza segment packaging: reassortment, during vaccine seeds production and foreignsegment incorporation for influenza vector construction. Vaccine seeds are produced bycoinfection of hens’ eggs with two viruses, a donor one (reference circulating strain) and anacceptor one (A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) (PR8)). Analysis of internal genetic composition ofthirteen H3N2 vaccine seeds reveals that PB1 segment of H3N2 donor strain is incorporatedin more than fifty per cent of the cases. Moreover, coinfection events lead to an extremelywide range of reassortants from 6:2 to 2:6 (PR8:H3N2). Segment incorporation competitionassays performed using plasmid-based reverse genetics show that selective packaging of PB1segment is based on genetic environment, i.e. viral origin of HA and NA segments. Thesecond part of my PhD work has been devoted to replicative influenza vector based on H3virus isolated from patients without NA segment at the native stage. None of the gfptransgenic constructions containing reporter gene have been incorporated in viral particles,contrary to literature studies performed using H1N1 laboratory-adapted strains. Even ifmolecular mechanisms controlling influenza A viruses segments incorporation remain stillcomplex, genetic background seems to be an essential element which must be considered withinterest

Bilan 2: Projet Orbivac

National audienc

Orbivac Meeting

International audienc

Orbivac Meeting

International audienc

Production and purification of non replicative canine adenovirus type 2 derived vectors

International audienceAdenovirus (Ad) derived vectors have been widely used for short or long-term gene transfer, both for gene therapy and vaccine applications. Because of the frequent pre-existing immunity against the classically used human adenovirus type 5, canine adenovirus type 2 (CAV2) has been proposed as an alternative vector for human gene transfer. The well-characterized biology of CAV2, together with its ease of genetic manipulation, offer major advantages, notably for gene transfer into the central nervous system, or for inducing a wide range of protective immune responses, from humoral to cellular immunity. Nowadays, CAV2 represents one of the most appealing nonhuman adenovirus for use as a vaccine vector. This protocol describes a simple method to construct, produce and titer recombinant CAV2 vectors. After cloning the expression cassette of the gene of interest into a shuttle plasmid, the recombinant genomic plasmid is obtained by homologous recombination in the E. coli BJ5183 bacterial strain. The resulting genomic plasmid is then transfected into canine kidney cells expressing the complementing CAV2-E1 genes (DK-E1). A viral amplification enables the production of a large viral stock, which is purified by ultracentrifugation through cesium chloride gradients and desalted by dialysis. The resulting viral suspension routinely has a titer of over 10(10) infectious particles per ml and can be directly administrated in vivo

Indice du risque social : un outil pour mieux saisir les enjeux, risques et opportunités des projets miniers

Peut-on prédire si un projet sera jugé socialement acceptable par ses principales parties prenantes ? Dans un contexte où l’acceptabilité sociale en est venue à être considérée comme une condition à la réalisation de tout grand projet, cette question s’avère centrale pour tout développeur de projet, de même que pour les investisseurs qui les soutiennent. C’est dans cette perspective qu’a été développé l’Indice du risque social dans les projets miniers, une initiative soutenue par l’Autorité des marchés financiers à laquelle a travaillé une équipe interdisciplinaire de chercheurs. Au-delà de jeter un éclairage sur la pertinence d’aller de l’avant ou non avec un projet, cet outil prédictif peut surtout permettre de moduler ledit projet, de concert avec ses parties prenantes, pour le rendre davantage acceptable à leurs yeux. Nous souhaitons ici rendre compte des possibilités offertes par cet indice en l’appliquant à deux projets miniers récemment discutés au Québec, soit le projet de mine aurifère développé par Osisko dans la municipalité de Malartic, en Abitibi-Témiscamingue, et celui de Mine Arnaud, à Sept-Îles, qui vise cette fois l’exploitation de l’apatite. Cet exercice nous permet de réaffirmer la pertinence de l’outil que constitue l’Indice, mais également de relever les limites qui lui sont inhérentes.To what extent can we predict if a project’s main stakeholders will deem it socially acceptable? In a context where social acceptability has come to be considered as a prerequisite for the realization of any major project, this question has become paramount for projects’ developers and their investors. In this perspective, the Social Risk Index for Mining Projects was developed, an initiative supported by the Autorité des marchés financiers that involved an interdisciplinary team of researchers. Beyond shedding light on the relevance to go ahead or not with a given project, this predictive tool allows to modify the project, together with its stakeholders, in order to make it more acceptable for them. The objective of this contribution is to show the possibilities offered by the Index by applying it to two mining projects recently discussed in Quebec, the gold-bearing project of Osisko-Malartic, in Abitibi-Témiscamingue, and Mine Arnaud project located in Sept-Îles, which aims at exploiting apatite. This exercise allows us to reaffirm the relevance of the Index, but also to stress its inherent limits

Mesurer l’acceptabilité sociale d’un projet minier : essai de modélisation du risque social en contexte québécois

L’acceptabilité sociale des projets miniers constitue un enjeu majeur pour l’industrie extractive. La littérature qui traite de la notion d’acceptabilité sociale en lien avec le monde minier se décline autour du concept de permis social d’opérer, c’est-à-dire comme un moyen d’éviter les perturbations susceptibles de compromettre les activités extractives. Cette vision réductrice transpose dans l’espace sociétal la dynamique d’implantation des projets miniers. De plus, la notion même d’acceptabilité sociale pose des difficultés de définition et de mesure. En nous inscrivant dans le monde de la pratique, nous proposons un indice visant à déterminer les risques de développement de conflits de l’entreprise avec la collectivité locale lors des premières étapes du développement des ressources minérales, au début de l’exploration avancée. Il s’applique au Québec. Le modèle utilisé repose sur une description analytique des principaux déterminants des conflits, s’articulant autour de trois pôles structurants : communauté(s) en présence, entreprise promouvant le projet, nature intrinsèque du projet minier et de son milieu naturel. Un questionnaire visant à qualifier la dynamique de communication vient compléter l’évaluation de la situation, tout en laissant davantage place aux perceptions. Les différentes variables sont pondérées et combinées afin d’obtenir un indice de risque social. L’indice est utilisable par les investisseurs, les entreprises minières, les communautés et les gouvernements. Il facilite l’identification des aspects pouvant générer plus de risque social, et le développement de dialogue entre les parties prenantes. Cet article reflète la perspective interdisciplinaire adoptée pour mener à bien le projet.Social acceptability of mining projects is a major issue for the extractive industry. The literature considering social acceptability in connection with the mining world discusses a concept called the social licence to operate, as a way to avoid disturbance that could compromise extractive activities. This reductive vision is a transposition in the social world of mining projects establishment dynamics. Moreover, there are definitional and measurement difficulties associated with the notion of social acceptability itself. With the view of being useful to actors involved in real-life situations, we created an index that determines the risk for conflict development between a company and a local community during the first stages of mineral resources development, at the beginning of advanced exploration. It is applicable to the Province of Quebec. The model is based on an analytical description of the main determinants of conflicts, articulated around three structuring poles : affected community-ies, the company promoting the project, and the project itself in its natural environment. A questionnaire is used to qualify the communicational dynamics, and completes the evaluation of a given situation while giving space to perceptions. The identified variables are weighted and combined to get the social risk index. The index can be used by investors, mining companies, communities and governments. It facilitates the identification of aspects that can generate more social risk and the development of a stakeholder’s dialogue. This article reflects the interdisciplinary approach adopted for this project