The role of the transcriptional regulator, Tex, under stress conditions in Lactococcus lactis

Motivation:Tex, originally described in Bordetella pertussis, is a regulator involved in a variety of transcriptional processes and conserved in a wide range of bacteria. However, very little is known about its function in Lactococcus lactis. Preliminary proteomic data have shown that Tex is more abundant in a L. lactis ΔftsH mutant (ftsH knock-out) under cell wall stress. FtsH is a membrane protease involved in regulation assuring cellular protein stability under stress conditions. Moreover, based on previous knowledge, L. lactis ΔftsH presents some distinct phenotypes such as lysozyme resistance and NaCl sensitivity. A link is proposed between those phenotypes and the high level of Tex, which might be due to a higher half-life of this protein, as a consequence of the lack of FtsH protease. In order to get insights on the role of Tex in L. lactis, this work tries to answer two main questions: (i) Is the abundance of Tex regulated by FtsH? and (ii) are the higher levels of Tex causing the resistance and sensitivityMethods:The gene coding for Tex was amplified by the polymerase chain reaction (PCR), with specific primers designed to clone it under both, a constitutive promoter P32 in pMG36e and the nisin inducible promotor Pnis in pNZ8020. Growth of cells with the empty plasmid (pNZ8020) or overexpressing Tex (plasmid pBL95) in GM17Cm medium was measured by OD at 600 nm in a microplate reader. The L. lactis tex knockout is currently being constructed, by cloning a truncated version of tex in pGhost9, a thermo-sensitive plasmid. Experiments to estimate Tex half-life will be carried out using antigen-antibody tagging in the presence or absence of FtsH.Results: It has not been possible to clone tex gene under the constitutive P32 promoter. L. lactis cells carrying pBL95 (tex gene under Pnis) growing in GM17Cm medium show a delayed growth related to the nisin concentration. The higher the concentration used, the slower the growth rate indicating that Tex overexpression might have a deleterious effect. Regarding to the lysozyme resistance and NaCl sensitivity, Tex abundance in ΔftsH might be the cause of those characteristics and experiments are in progress to probe it.Conclusions:Tex functions remain unknown in Lactococcus lactis but constitutive expression and/or too high levels of Tex seem to be deleterious. Further studies are necessary to analyse its role in the generation of new phenotypes and its regulation by FtsH for a better understanding

Efeitos hemodinâmicos da ventilação monopulmonar em cães anestesiados com isofluorano ou infusão contínua de propofol

A ventilação monopulmonar (VMP) é uma técnica que permite separar cada hemitórax durante a ventilação mecânica. Contudo, é pouco explorada em animais. Desse modo. objetivou-se avaliar e comparar os efeitos hemodinâmicos e a oxigenação arterial da anestesia com isofluorano em 1,0 ou 1,5 múltiplo de concentração alveolar mínima (CAM) ou propofol em cães submetidos à ventilação monopulmonar. Para tal, seis cães da raça Beagle foram anestesiados de modo a compor três grupos: isofluorano em 1,0 ou 1,5 CAM – respectivamente GI1,0 e GI1,5 – ou infusão contínua de propofol em 0,4 a 1,0 mg/kg/min – GP. Os animais receberam atracúrio IV a cada 30 minutos, foram intubados com sonda de duplolúmen esquerda e posicionados em decúbito lateral direito. Instituiu-se a ventilação bipulmonar (VBP) por 30 minutos, seguida de VMP do lado direito por 1 hora e novamente 30 minutos de VBP finais. Durante a VMP, o pulmão esquerdo foi mantido com pressão positiva contínua (CPAP). Aos 30, 50, 70, 90 e 120 minutos após inicio da primeira VBP, foram colhidas e calculadas variáveis hemodinâmicas e amostras de sangue para hemogasometria. Os resultados demonstram que o isofluorano reduziu a pressão arterial e a resistência periférica total em maior grau que o propofol. As demais variáveis apresentaram comportamento similar entre os grupos e não houve prejuízo da oxigenação arterial. O shunt arteriovenoso aumentou significativamente apenas no GI1,5. Concluiu-se que ambos os anestésicos oferecem segurança durante a VMP nos animais estudados.One-lung ventilation (OLV) is a technique that allows separation of each hemithorax during mechanical ventilation. However, it is poorly explored in animals. Thus, the aim of the study was to assess and compare the hemodynamic effects and arterial oxygenation of isoflurane at 1.0 or 1.5 multiples of minimum alveolar concentration (MAC) or propofol in dogs subjected to one-lung ventilation. For these purposes, six Beagle dogs were anesthetized so as to comprise three groups: isoflurane at 1.0 or 1.5 MAC – respectively GI1.0 and GI1.5 – or constant rate infusion of propofol at 0.4 to 1.0 mg/kg/minute – GP. Animals were given IV atracurium every 30 minutes, intubated with a double-lumen endotracheal tube and positioned in right lateral recumbency. Two-lung ventilation (TLV) was instituted for 30 minutes, followed by OLV of the right side for 1 hour and another final 30 minutes of TLV. During OLV, the left lung was maintained at a constant positive pressure (CPAP). Hemodynamic variables were recorded and calculated and blood samples for blood gas analysis were obtained at 30, 50, 70, 90 and 120 minutes after the first TLV. The results have demonstrated that isoflurane decreased arterial pressure and total peripheral resistance in a greater degree than did propofol. Other variables behaved similarly between groups without impairing arterial oxygenation. The arteriovenous shunt was significantly increased only in GI1.5. In conclusion, both anesthetics provide safety during OLV in the animals studied.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Efeitos de diferentes concentrações de isofluoretano sobre a perfusão tecidual em cães

Objetivou-se com este estudo avaliar os efeitos do isofluorano e tempo de anestesia com o mesmo sobre a perfusão tecidual de cães sob duas diferentes concentrações. Oito cães da raça Beagle foram anestesiados em múltiplos de CAM correspondentes a 1,5 (G1,5) e 2,0 (G2,0) CAM por duas horas, sendo mensuradas a cada 20 minutos as variáveis frequência cardíaca (FC), pressão sistólica (PAS), média (PAM) e diastólica (PAD), pressão da artéria pulmonar média (PAPm), pressão capilar pulmonar média (PCPm), pressão venosa central (PVC), índice cardíaco (IC), índice sistólico (IS), índice de trabalho ventricular esquerdo (ITVE), índice de resistência periférica total (IRPT), índice de resistência vascular pulmonar (IRVP), índice de oferta de oxigênio (IDO2), índice de consumo de oxigênio (IVO2), taxa de extração de oxigênio (TeO2), saturação venosa mista de oxigênio (SvO2) e lactato sanguíneo arterial. As médias de PAM, IC, IS e ITVE, diferiram significativamente entre os grupos, o que não foi observado nas variáveis IRPT e IRVP, as quais apresentaram diferença somente entre momentos de um mesmo grupo. Da mesma forma, houve diminuição progressiva da IRPT em G1,5, mas não em G2,0. Houve redução de IDO2 em G2,0 quando comparada a G1,5, mas não de IVO2. O lactato apresentou valores acima dos limites de referência, não diferindo entre grupos e reduzindo-se ao longo do tempo, enquanto que SvO2 foi menor em G2,0, acompanhada de maior TeO2 neste grupo. Concluiu-se que a perfusão global é prejudicada por concentrações maiores de isofluorano, ao passo que a perfusão periférica é mantida. Existe um limite para o grau de vasodilatação periférica causada pelo isofluorano em cães e o tempo de exposição ao anestésico interfere com a dinâmica cardiovascular tanto quanto sua concentraçãoThe aim of this study was to evaluate the effects of isoflurane and anesthetic time period on tissue perfusion of dogs under two different concentrations. Eight beagle dogs were anesthetized in MAC multiples correspondent to 1.5 (G1.5) e 2.0 (G2.0) MAC for two hours, being the following variables collected every 20 minutes: heart rate (HR), arterial systolic (SAP), mean (MAP) and diastolic (DAP) pressures, pulmonary artery mean pressure (PAPm), pulmonary artery wedge pressure (PAWP), central venous pressure (CVP), cardiac index (CI), systolic index (SI), left ventricle work index (LVWI), total peripheral resistance index (TPRI), pulmonary vascular resistance index (PVRI), oxygen delivery index (IDO2), oxygen consumption index (IVO2), oxygen extraction (TeO2), mixed venous oxygen saturation (SvO2) and arterial blood lactate. Mean values of MAP, CI, SI and LVWI were different between groups, and such differences were not observed in TPRI and PVRI, which differences were only significant between time points in each group. In addition, there was progressive reduction of TPRI in G1.5, but not G2.0. There was a reduction of IDO2 in G2.0 when compared to G1.5, but not IVO2. Lactate levels were above reference limits, with no difference between groups and decreasing over time, whereas SvO2 was lower in G2.0, accompanied by higher TeO2 in that group. We conclude that global perfusion is impaired by higher concentrations of isoflurane, while peripheral perfusion is maintained. There is a limit to the degree of vasodilation caused by isoflurane in dogs and the time of exposure to the anesthetic interferes with cardiovascular dynamics as much as its concentrationsFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Evaluation of the occurrence of metabolic syndrome in obese dogs and the role of caloric restriction diet as an adjuvant therapy

Metabolic syndrome, or metabolic dysfunction related to obesity in dogs, is a set of factors that may predispose comorbidities secondary to obesity. Adjuvant therapy with an energy-restricted diet, especially with low levels of carbohydrate and fat, is essential for weight loss, in addition to controlling snacks intake. The aim of this study was to evaluate the biochemical profile of obese dogs compared to lean dogs, and also to compare these profiles before and after a 30-day treatment, thus evaluating the possibility of obesity-related metabolic dysfunction and the action of adjuvant dietary therapy in this condition. Cholesterol and its fractions (HDL, LDL and VLDL), triglycerides, systemic blood pressure and glycemia of obese and lean dogs were measured, and seven obese dogs were treated only with a low-calorie diet with low levels of fat and carbohydrates for 30 days; these patients were evaluated before and after treatment. Obese dogs showed higher levels of triglycerides than lean dogs, and dogs treated with low-calorie diet presented weight loss and better outcomes related to biochemical profile, especially triglycerides levels, after treatment

Lactato sanguíneo na avaliação dos efeitos da peridural torácica em cães anestesiados pelo isoflurano Blood lactate in the evaluation of the thoracic epidural effects in isoflurane anesthetized dogs

O lactato é produzido no organismo em maior ou menor quantidade, dependendo da presença ou ausência de oxigênio para geração de ATP. Situações de hipoxemia tecidual elevam seus níveis plasmáticos, que devem situar-se, no cão, entre 0,3 e 2,5mmol L-1. Neste estudo, objetivou-se avaliar a perfusão tecidual por meio do lactato sanguíneo em cães submetidos à anestesia peridural torácica. Foram utilizados oito cães com CAM previamente determinada para isofluorano, sendo alocados em dois grupos experimentais e realizadas indução e manutenção com isofluorano, punção do espaço epidural lombo-sacro para introdução de cateter peridural até T1-T2 e aplicação de ropivacaína em dois diferentes volumes, um para cada grupo: 0,25ml kg-1 (GR1) e 0,33ml kg-1. (GR2). Os animais foram monitorados em nove momentos totais de anestesia com realização de eletroestimulação em membro torácico para detectar a presença do bloqueio local e avaliação dos seguintes parâmetros: lactato, pressão arterial média, variáveis hemogasométricas e frequências cardíaca e respiratória. Observou-se depressão respiratória causada pelo bloqueio, bem como elevação do pH e discreta redução de FC e PAM. Houve redução significativa do lactato após a indução anestésica e retorno aos seus níveis basais após recuperação, nos dois grupos. Não houve correlação entre o lactato e os outros parâmetros avaliados. A alteração dos valores de lactato está provavelmente relacionada à anestesia inalatória, supondo-se uma influência do isofluorano sobre esse parâmetro. Não houve influência do bloqueio local sobre a perfusão tecidual, avaliada por meio do lactato sanguíneo.Lactate is produced in the organism in a big or small scale, depending on the presence or absence of oxygen for ATP generation. Situations of tissue hypoxemia raise its plasmatic levels, which should stay, in the dog, between 0.3 and 2.5mmol L-1. This study aimed to evaluate the tissue perfusion through blood lactate in dogs submitted to thoracic peridural anesthesia. For such, eight dogs with MAC previously determined for isoflurano, were divided into two experimental groups and were induced and maintained with isofluorane. The dogs had their spinal low lumbar space reached with an epidural catheter, inserted to the T1-T2 interval, with later application of ropivacaine in two different volumes, one for each group: 0.25ml kg-1 (GR1) and 0.33ml kg-1 (GR2). The animals were monitored at nine total moments of anesthesia and electrostimulation in the radio-ulnar region was made to detect the presence of the local block, with evaluation of the following parameters: lactate levels, mean arterial pressure, hemogasometric variables, heart rate and respiratory rate. Respiratory depression was observed, caused by the block, as well as an increase on the pH and slight reduction of HR and MAP. There was a significant decrease in lactate levels after anesthetic induction and a return to its basal levels after recovery, on both groups. There was no correlation between lactate and other evaluated parameters. The changes in lactate levels are probably related to the inhalant anesthesia, assuming an influence of isofluorane on this parameter. There was no influence of the local block on tissue perfusion, analized through blood lactate measures

Alteração do índice biespectral antes e após estimulação elétrica ou mecânica em cães anestesiados pelo isofluorano

One of the current methods to assess hypnosis and central depression during anesthesia is the bispectral index (BIS), which generates a number from 0 to 100. The purpose of the present study was to evaluate the changes in BIS during electrical or mechanical supra-maximal stimulation in order to investigate whether there is a relation between this index and motor response to nociception. Seven beagle dogs were included, two males and five females, which were anesthetized with isoflurane at 2.0, 1.8, 1.6, 1.4 and 1.2%. Different types of stimuli were employed at different procedures in the same animals with at least 15 days of interval. The BIS values were recorded during 60 seconds each time and mean values were obtained before (AE) and after (DE) the stimulus. Results were compared through paired t test or Wilcoxon's paired test (P<0.05). Significant differences were found between AE and DE values in almost every isoflurane concentration, as well as between the subtraction of these values, when compared between types of stimuli at 1.8 and 2.0%. In conclusion, the response to supra-maximal stimulation does change BIS values in dogs by decreasing the depth of anesthesia. The use of mechanical stimulation is suggested in order to avoid possible interferences of the electrical current and loss of data reliability.Uma das formas atuais para se avaliar o grau de hipnose e depressão do sistema nervoso central durante a anestesia é o índice biespectral (BIS), que fornece um valor de 0 a 100. Objetivou-se avaliar as alterações do BIS de cães durante a estimulação elétrica e mecânica supra-máxima e sob diferentes concentrações de isofluorano, a fim de verificar se existe uma relação entre este índice e a resposta motora frente à nocicepção. Utilizaram-se sete cães da raça Beagle, dois machos e cinco fêmeas, anestesiados com isofluorano nas concentrações de 2,0; 1,8; 1,6; 1,4 e 1,2%. Os diferentes tipos de estímulo foram utilizados em procedimentos anestésicos diferentes nos mesmos animais, com intervalo mínimo de 15 dias. Os valores de BIS foram anotados por 60 segundos em cada avaliação, derivando médias antes (AE) e depois (DE) de cada estímulo. Os resultados foram analisados por meio de teste t pareado ou Wilcoxon pareado (P<0,05). Houve diferença significativa entre os valores AE e DE em todas as concentrações de isofluorano, exceto 2,0% no estímulo mecânico. Também foi significativa entre a subtração desses valores, quando comparados entre estímulos, em 1,8 e 2,0%. Conclui-se que a resposta frente a estímulos supra-máximos modifica os valores de BIS em cães por meio da superficialização do plano anestésico. Sugere-se o emprego do modelo mecânico para evitar possíveis interferências de corrente elétrica e perda da confiabilidade dos dados.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

EFEITO DO PERÍODO DE JEJUM DIURNO E NOTURNO SOBRE OS PARÂMETROS HEMATOLÓGICOS, BIOQUÍMICOS E DE ESTRESSE OXIDATIVO DE CÃES SAUDÁVEIS

The influence of the circadian rhythm on canine laboratory parameters is yet to be elucidated. This study aimed to investigate possible fluctuations that occur on laboratory tests of healthy dogs following overnight and over−day fasting. For this purpose, 20 adult clinically healthy dogs were enrolled in the study. Venous blood samples were obtained 7:00 am (ONF, overnight fasting) and at 7:00 pm (ODF, over−day fasting) at the same day, following a 12−hour period of respectively overnight and over−day fasting for hematological, biochemical and oxidative stress assessment. The erythrogram showed significant reduction of red blood cells, hemoglobin, hematocrit and mean corpuscular volume (MCV) measured by the cell counter following ODF. The only change seen on the leukogram was a lower lymphocyte count following ODF. No significant changes were found on platelet count, although ODF was associated with decreased mean platelet volume (MPV) and total plasma protein (TPP). ODF caused a significant reduction of total cholesterol, ALP, phosphate and triglycerides. On oxidative stress parameters, ODF reduced total oxidant capacity (TOC) and increased lipid peroxidation. In conclusion, the time of fasting can partly influence hematological, biochemical and oxidative stress parameters in dogs significantly, which warrants standardization of fasting period prior to laboratory tests in dogs, especially during research.Pouco se conhece a influência do ritmo circadiano nos parâmetros laboratoriais caninos. O presente estudo teve como objetivo investigar possíveis alterações que ocorrem nos testes laboratoriais de cães saudáveis após jejum noturno e diurno. Para tal, 20 cães adultos clinicamente saudáveis foram incluídos no estudo. Amostras de sangue venoso foram obtidas às 7h00 (ONF, jejum noturno) e às 19h00 (ODF, jejum diurno) no mesmo dia, após um período de 12 horas de jejum noturno e diurno, respectivamente, para avaliação hematológica, bioquímica e de estresse oxidativo. O eritrograma apresentou redução significativa de hemácias, hemoglobina, hematócrito e volume corpuscular médio (VCM) medido pelo contador de células após ODF. A única alteração observada no leucograma foi redução de linfócitos após ODF. Nenhuma alteração significativa foi observada na contagem de plaquetas, embora diminuição do volume plaquetário médio (VPM) e proteína plasmática total (TPP) tenha sido observada após ODF. ODF causou uma redução significativa do colesterol total, FA, fósforo e triglicerídeos. Nos parâmetros de estresse oxidativo, o ODF reduziu a capacidade oxidante total (COT) e aumentou a peroxidação lipídica. Em conclusão, o tempo de jejum pode influenciar parcialmente os parâmetros hematológicos, bioquímicos e de estresse oxidativo em cães de forma significativa, o que garante a padronização do período de jejum antes dos testes laboratoriais em cães, especialmente em amostras destinadas à pesquisa