Caractérisation de la protéine AKAP (A-Kinase Anchoring Protein) chez Plasmodium falciparum

Le paludisme est une maladie tropicale due au parasite P. falciparum. Avec le grand nombre de victimes qui lui sont imputées chaque année, cette maladie demeure la plus grande parasitose tropicale et il est primordial de la combattre. Ce combat passe aussi bien par la sensibilisation des populations que par la recherche. Plusieurs échecs thérapeutiques, dus à la résistance du parasite aux médicaments déjà disponibles, sont recensés. L’émergence de cette résistance pousse la recherche à identifier de nouvelles molécules antipaludiques. Ces travaux de thèse s'inscrivent dans le cadre d'une meilleure connaissance de la biologie du parasite dans le but d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques et de déterminer de nouvelles stratégies antipaludiques. Les protéines kinases, dont la protéine kinase A (PKA), sont connues pour avoir des rôles clé dans la régulation du cycle cellulaire. La régulation spatiale et temporelle de la PKA est assurée par des protéines d'ancrage appelées AKAP (A Kinase Anchoring Protéines). Nous avons identifié par homologie de séquences la première protéine AKAP putative chez P. falciparum (PfAKAP). Associant des études de biologie moléculaire (RT-PCR, interruption génique), de biologie cellulaire (immunofluorescence), de biochimie (« pull-down », « peptide array »), et de protéomique (spectrométrie de masse), nous avons caractérisé la PfAKAP. Cette protéine, majoritairement exprimée aux stades matures du développement érythrocytaire, semble importante pour le développement du parasite mais n'interagit pas directement avec la PKA du parasite. Elle fait intervenir des partenaires protéiques tels que la protéine Pf14-3-3I. En effet, la Pf14-3-3I pourrait être un substrat de la PfPKA et cependant jouer un rôle dans sa localisation. Par ailleurs, comme son proche homologue humain l’AKAP18, la PfAKAP interagit avec les nucléotides comme l’AMP et l’AMPc. Cela suggère entre autres que cette protéine peut interagir avec la voie de l'AMPK ou avec celle des phosphodiestérases chez le parasite. Nos premiers résultats sont encourageants et révèlent l’importance de la PfAKAP pour le développement parasitaire. Des recherches complémentaires permettront à l'avenir de développer et concevoir des nouvelles stratégies thérapeutiques comme celle des peptides interférents.Pas de résum

Traitement des fiches de réunions de concertation pluridisciplinaire de cancérologie pour le réseau 3C Rouen/Elbeuf par les médecins généralistes de Haute-Normandie

Dès sa mise en place en 2003, un des objectifs du plan cancer est de favoriser la coordination des soins autour du patient en donnant un rôle central au médecin généraliste. Nous avons souhaité, à travers cette étude recueillir le retour des médecins généralistes destinataires des fiches de réunions de concertation pluridisciplinaires du réseau 3C Rouen/Elbeuf tout en mettant l’accent sur l’usage qu’ils en font après réception. Dans notre étude, la majorité des médecins répondants reçoit les fiches RCP via la messagerie sécurisée, et est tout à fait d’accord avec les propositions faites lors de la RCP. Un tiers des médecins interrogés discute avec le patient des informations contenues dans la RCP. Ce tiers est majoritairement composé de médecins installés depuis plusieurs années, et qui vraisemblablement entretiennent une relation étroite et durable avec leurs patients. Indépendamment de la durée d’installation, peu de médecins généralistes répondants prévoient une consultation dédiée à l’échange avec le patient suite la réception de la RCP. De grandes avancées sont réalisées pour une meilleure prise en charge du patient atteint de cancer. Lors du traitement, il est nécessaire d’entretenir la relation patient-médecin généraliste permettant, pour le patient de garantir une continuité de suivi après le cancer et pour le médecin généraliste d’occuper son rôle de premier recours

Characterization of an A-kinase anchoring protein-like suggests an alternative way of PKA anchoring in Plasmodium falciparum

International audienceBackground: The asexual intra‑erythrocytic multiplication of the malaria parasite Plasmodium falciparum is regulated by various molecular mechanisms. In eukaryotic cells, protein kinases are known to play key roles in cell cycle regula‑ tion and signaling pathways. The activity of cAMP‑dependent protein kinase (PKA) depends on A‑kinase anchoring proteins (AKAPs) through protein interactions. While several components of the cAMP dependent pathway—includ‑ ing the PKA catalytic and regulatory subunits—have been characterized in P. falciparum, whether AKAPs are involved in this pathway remains unclear. Here, PfAKAL, an open reading frame of a potential AKAP‑like protein in the P. falcipa-rum genome was identified, and its protein partners and putative cellular functions characterized. Methods: The expression of PfAKAL throughout the erythrocytic cycle of the 3D7 strain was assessed by RT‑qPCR and the presence of the corresponding protein by immunofluorescence assays. In order to study physical interactions between PfAKAL and other proteins, pull down experiments were performed using a recombinant PfAKAL protein and parasite protein extracts, or with recombinant proteins. These interactions were also tested by combining bio‑ chemical and proteomic approaches. As phosphorylation could be involved in the regulation of protein complexes, both PfAKAL and Pf14‑3‑3I phosphorylation was studied using a radiolabel kinase activity assay. Finally, to identify a potential function of the protein, PfAKAL sequence was aligned and structurally modeled, revealing a conserved nucleotide‑binding pocket; confirmed by qualitative nucleotide binding experiments. Results: PfAKAL is the first AKAP‑like protein in P. falciparum to be identified, and shares 23 % sequence identity with the central domain of human AKAP18δ. PfAKAL is expressed in mature asexual stages, merozoites and gametocytes. In spite of homology to AKAP18, biochemical and immunochemical analyses demonstrated that PfAKAL does not interact directly with the P. falciparum PKA regulatory subunit (PfPKA‑R), but instead binds and colocalizes with Pf14‑ 3‑3I, which in turn interacts with PfPKA‑R. In vivo, these different interactions could be regulated by phosphorylation, as PfPKA‑R and Pf14‑3‑3I, but not PfAKAL, are phosphorylated in vitro by PKA. Interestingly, PfAKAL binds nucleotides such as AMP and cAMP, suggesting that this protein may be involved in the AMP‑activated protein kinase (AMPK) pathway, or associated with phosphodiesterase activities. Conclusion: PfAKAL is an atypical AKAP that shares common features with human AKAP18, such as nucleotides binding. The interaction of PfAKAL with PfPKA‑R could be indirectly mediated through a join interaction with Pf14‑ 3‑3I. Therefore, PfPKA localization could not depend on PfAKAL, but rather involves other partners..org/licenses/by/4.0/), which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided you give appropriate credit to the original author(s) and the source, provide a link to the Creative Commons license, and indicate if changes were made. The Creative Commons Public Domain Dedication waiver (http://creativecommons.org/ publicdomain/zero/1.0/) applies to the data made available in this article, unless otherwise stated