The Leishmania donovani Lipophosphoglycan Excludes the Vesicular Proton-ATPase from Phagosomes by Impairing the Recruitment of Synaptotagmin V

We recently showed that the exocytosis regulator Synaptotagmin (Syt) V is recruited to the nascent phagosome and remains associated throughout the maturation process. In this study, we investigated the possibility that Syt V plays a role in regulating interactions between the phagosome and the endocytic organelles. Silencing of Syt V by RNA interference revealed that Syt V contributes to phagolysosome biogenesis by regulating the acquisition of cathepsin D and the vesicular proton-ATPase. In contrast, recruitment of cathepsin B, the early endosomal marker EEA1 and the lysosomal marker LAMP1 to phagosomes was normal in the absence of Syt V. As Leishmania donovani promastigotes inhibit phagosome maturation, we investigated their potential impact on the phagosomal association of Syt V. This inhibition of phagolysosome biogenesis is mediated by the virulence glycolipid lipophosphoglycan, a polymer of the repeating Galβ1,4Manα1-PO4 units attached to the promastigote surface via an unusual glycosylphosphatidylinositol anchor. Our results showed that insertion of lipophosphoglycan into ganglioside GM1-containing microdomains excluded or caused dissociation of Syt V from phagosome membranes. As a consequence, L. donovani promatigotes established infection in a phagosome from which the vesicular proton-ATPase was excluded and which failed to acidify. Collectively, these results reveal a novel function for Syt V in phagolysosome biogenesis and provide novel insight into the mechanism of vesicular proton-ATPase recruitment to maturing phagosomes. We also provide novel findings into the mechanism of Leishmania pathogenesis, whereby targeting of Syt V is part of the strategy used by L. donovani promastigotes to prevent phagosome acidification

Genetic Transformation of an Obligate Anaerobe, P. gingivalis for FMN-Green Fluorescent Protein Expression in Studying Host-Microbe Interaction

The recent introduction of “oxygen-independent” flavin mononucleotide (FMN)-based fluorescent proteins (FbFPs) is of major interest to both eukaryotic and prokaryotic microbial biologists. Accordingly, we demonstrate for the first time that an obligate anaerobe, the successful opportunistic pathogen of the oral cavity, Porphyromonas gingivalis, can be genetically engineered for expression of the non-toxic green FbFP. The resulting transformants are functional for studying dynamic bacterial processes in living host cells. The visualization of the transformed P. gingivalis (PgFbFP) revealed strong fluorescence that reached a maximum emission at 495 nm as determined by fluorescence microscopy and spectrofluorometry. Human primary gingival epithelial cells (GECs) were infected with PgFbFP and the bacterial invasion of host cells was analyzed by a quantitative fluorescence microscopy and antibiotic protection assays. The results showed similar levels of intracellular bacteria for both wild type and PgFbFP strains. In conjunction with organelle specific fluorescent dyes, utilization of the transformed strain provided direct and accurate determination of the live/metabolically active P. gingivalis' trafficking in the GECs over time. Furthermore, the GECs were co-infected with PgFbFP and the ATP-dependent Clp serine protease-deficient mutant (ClpP-) to study the differential fates of the two strains within the same host cells. Quantitative co-localization analyses displayed the intracellular PgFbFP significantly associated with the endoplasmic reticulum network, whereas the majority of ClpP- organisms trafficked into the lysosomes. Hence, we have developed a novel and reliable method to characterize live host cell-microbe interactions and demonstrated the adaptability of FMN-green fluorescent protein for studying persistent host infections induced by obligate anaerobic organisms

Typical problems related to saving the historical monuments, on the example of selected buildings in Opole

Sama forma czysto technicznego podejścia do tematyki ratowania zabytków w Polsce może okazać się niewystarczająca pomimo tego, że argumenty w niej zawarte będą technicznie niepodważalne. Niniejszy artykuł postawił sobie za cel wskazanie również innych, zdaniem autora bardzo istotnych aspektów towarzyszących procesowi budowlanemu, z jakimi musi liczyć się przyszły inwestor (właściciel) podejmujący się tak odpowiedzialnego zadania, jak utrzymywanie w wymaganym stanie technicznym takiego obiektu lub jego wyremontowanie, odtworzenie itp.The form of the technical approach towards the topic of saving Polish monuments can appear to be not enough sufficient, although arguments presented in it would be technically unquestionable. The author's aim in writing this paper is to point out other very important aspects accompanying the building process which can be encountered by the future investor (owner) attempting to maintain the object in a proper technical condition, renovate, or reconstruct it, etc

Odwodnienia dachów i stropodachów

O wyborze systemu odwadniania dachów nie powinny decydować jedynie jego wygląd, kolor oraz rodzaj materiału. Podstawowym elementem charakteryzującym te systemy powinna być ich zdolność do sprawnego odprowadzania wód opadowych. Zarówno istniejące, jak i projektowane systemy odwodnień dachów powinny skutecznie odprowadzać wodę opadową do kanalizacji deszczowej lub też ostatecznie na przyległy do obiektów teren, który powinien być odpowiednio wyprofilowany, ukierunkowany i zabezpieczony przed niekontrolowaną infiltracją tych wód do gruntu. Ten drugi sposób odprowadzania wód do dnia dzisiejszego występuje jeszcze głównie w obiektach starszych, i to znajdujących się nawet w zabytkowych centrach miast

Pozytywne i uboczne skutki prawidłowo wykonanych termomodernizacji obiektów budowlanych na wybranych przykładach

Jedną z przyczyn występowania wad w przegrodach budowlanych, poddawanych termomodernizacji jest dosyć częsty brak szczegółowych rozwiązań projektowych, opartych na analizach stanu przedprojektowego i końcowego. Spowodowane to jest m.in. niską świadomością zarządców obiektów o skutkach nieuzasadnionych działań (lub ich braku) oraz pozornym oszczędzaniem zarówno na opracowaniach projektowych, jak również na samym wykonawstwie. Brak instrukcji eksploatacyjnych obiektów często przyczynia się do ich szybszego zużywania się, a nawet uszkodzeń. W artykule, w dużym skrócie, przypomniane zostały metody dociepleń od lat 70. ub. wieku do najpopularniejszych, stosowanych obecnie. Proces termomodernizacji obiektów budowlanych zbyt często traktowany jest przez projektantów i wykonawców rutynowo, w odniesieniu jedynie do wybranych, pojedynczych przegród, co też w okresie późniejszym skutkuje efektami innymi, niż zakładano. Wymienione wyżej problemy krótko omówiono na przykładzie kilku obiektów, dla których przegrody pionowe zostały prawidłowo docieplone

The church in Prószkow in the Opole region as an example of repetitive challenges while saving historical church objects - research, construction and conservation guidelines

Wiele zabytkowych budynków sakralnych oraz świeckich boryka się z trudnościami, wśród których dominują problemy związane z utrzymaniem ich, nie tylko jako zabytków, ale przede wszystkim jako nadal w pełni funkcjonalnych i eksploatowanych obiektów. Praca opisuje wyzwania, przed jakimi stają użytkownicy tego typu obiektów. Przedstawiono zakres i rodzaj prac proponowanych do wykonania w zabytkowym kościele pw. św. Jerzego w Prószkowie na Opolszczyźnie.Many historical church and lay buildings encounter difficulties among which problems connected with their maintenance, not only as historical buildings but primarily as still fully functional and utilized objects, are predominant. This work describes the challenges faced by the users of this type of buildings. It also presents the range and kinds of work proposed to be carried out in the historical church of St. George in Prószkow in the Opole region

Damage of frame wooden structures caused by biological corrosion illustrated by the example of a dry roughage storehouse

Niejednokrotnie drewno uznawane jest za jeden z najmniej trwałych materiałów budowlanych, nie wykazuje na zewnątrz symptomów degradacji biologicznej, niezależnie od wieku, który nie jest tu wykładnią jego zużycia technicznego. Wbrew pozorom, problem okazuje się bardzo szeroki i istotny, a jego wagę podkreśla nieświadomość społeczna istnienia takich zagrożeń w obiektach wyglądających na masywne i bezpieczne. W naszym otoczeniu znajduje się wiele takich konstrukcji, które są eksploatowane w warunkach nieświadomości o występujących zagrożeniach, jakie stwarza niewidoczne i zużyte technicznie drewno. Zły stan techniczny drewna niejednokrotnie bywa przyczyną katastrof budowlanych, szczególnie gdy dotyczy to belek stropowych, które utraciły swoje oparcie na murach wskutek korozji końcówek. W tych miejscach elementy te nie są praktycznie badane, a są to lokalizacje największych dla nich zagrożeń, natomiast zakres uszkodzeń drewna ujawnia się zazwyczaj w momencie katastrofy budowlanej lub wymiany stropu. Dlatego, problem ten należy uznać za badawczy, wymagający pilnego i kompleksowego rozwiązania nie tylko ze względu na ratowanie wartości historycznej (zabytkowej) niektórych budynków i budowli, ale przede wszystkim ze względu na ich bezpieczeństwo użytkowe. Zarówno w na etapie projektowania, wykonawstwa, jak i eksploatacji zapomina się o procesach fizykalnych zachodzących we wnętrzu przegród, od których w bardzo wysokim stopniu zależy rodzaj, intensywność i zasięg korozji biologicznej. W artykule zaprezentowany zostanie przykład wpływu korozji biologicznej drewna na bezpieczeństwo użytkowania magazynu pasz objętościowych. Wykonane „in situ” pomiary ubytków w przekrojach belek drewnianych, spowodowanych korozją biologiczną, zweryfikowane zostaną obliczeniami sprawdzającymi pod kątem ich nośności w stosunku do zakładanych dla nich wielkości obciążeń. Obliczenia zostaną przeprowadzone tu zarówno dla belek uszkodzonych, o zmniejszonych przekrojach poprzecznych, jak i dla elementów pełnowartościowych.In spite of appearances, the problem is very complex and significant, and its gravity is stressed by the lack of social awareness about the existence of such hazards in buildings which look massive and safe. There are a number of such facilities in our surroundings which are unconsciously used without proper knowledge of hazards posed by invisible and technically worn wood. The condition of wood is a cause of many construction disasters which may progress in the foreseeable future due to damaged ceilings in which beams had lost their support on walls through biological corrosion of the beam ends. There are a few reasons for such effects. Although these are points where the most serious hazards occur, such elements are practically not checked within the said areas. In contrast, the scope of wood damage becomes apparent usually at the moment of a construction disaster or demolition. Therefore, this problem should be deemed a research one which requires an urgent and effective solution not only in order to preserve the historical (heritage) value of such buildings and facilities but also to protect human health and life. This would entail determination of the most common reasons of degradation of wood and its durability over time. Physical processes occurring inside barriers, on whose the type, intensity and range of biological corrosion depend to a great extent, are ignored. This article presents an example of the influence of wood biological corrosion on operational safety of a roughage storehouse. In situ measurements of defects caused by wood biological corrosion were carried out and followed by static and strength calculations considering biological corrosion or without taking it into account

The utility issues related to the use of glass curtain walls and roofs in buildings

W artykule opisano wybrane problemy związane z zastosowaniem szklanych ścian kurtynowych i dachów w zabytkowym budynku zlokalizowanym na starym mieście. Autorzy przedstawiają niektóre problemy wynikające z ich zastosowania oraz wskazują na przestrzeń krytyczną z punktu widzenia użytkownika takiego obiektu. Wniosek zawarty w artykule może stanowić cenną wskazówkę dla projektantów podejmujących się projektowania takich konstrukcji.The selected problems associated with the use of glass curtain walls and roofs in the historic building located in the old city was presented in the paper. Some problems related to use have been shown. The critical space was indicated, from the point of view of the user of such a facility. The conclusion from the article can be a valuable hint for designers who undertake to design such constructions