Clonalidad de Salmonella, serotipo Typhi : epidemiología molecular

El marcador epidemiológico de elección en Salmonella, serotipo typhi, ha sido durante años la fagotipificación. Sin embargo, cuando se estudian cepas de un área determinada, éstas suelen pertenecer a un número reducido de fagotipos localmente predominantes. Para determinar la identidad o no identidad de las cepas de este serotipo aisladas en España se utilizaron los métodos moleculares de tipificación recientemente desarrollados y los resultados se compararon con la fagotipificación de las mismas cepas. La mejor discriminación se obtuvo con la electroforesis en campo pulsado de las cepas digeridas con xbai. La ribotipificación no fue lo suficientemente estable en el estudio de brotes epidémicos y la hibridación con una sonda del fragmento is200 tuvo un escaso poder discriminatorio. Por último, las cepas resultaron homogéneas cuando se estudiaron diversas aplicaciones de la reacción en cadena de la polimerasa: rep-pcr eric-pcr, is200-pcr, pcr-ribotipificación y ap-pc

Epidemiological tracing of Salmonella enterica serotype Abortusovis from Spanish ovine flocks by PFGE fingerprinting

Salmonella enterica serotype Abortusovis, an ovine host-specific serotype, rare in most countries, is responsible for epidemic abortion episodes in Spain. With the aim of surveillance and detection of the spread of specific clones, 55 Abortusovis isolates collected during 1996-2001 from flocks in 11 provinces, were studied using XbaI-PFGE. Despite the fact that the strains were geographically and spatially related, PFGE demonstrated an epidemiologically acceptable discriminating power, identifying 20 clones (similarity, 52-96%). Clones Sabv6, 1, 5 were disseminated in seven, five and two areas respectively, while another 17 clones appeared in single places. Clones from nearby geographic regions showed a high relatedness (one band of difference in the PFGE profile) Sabv1-2-3, Sabv5-6, Sabv7-8, and Sabv13-14, suggesting a common ancestor. Co-isolation in the same flock (Sabv5-6, Sabv1-3, Sabv1-6) was detected. PFGE surveillance detected the predominance and widespread distribution of clone Sabv6 in 21 out of the 55 Abortusovis serotype episodes studied in Spain.We thank all the Spanish laboratories which sent Abortusovis strains to LNRSSE. This work was supported by a grant from the Instituto de Salud Carlos III (02/0008) and Junta de Andalucía (Investigation Group AGR-149).S

Nationwide outbreak of Salmonella enterica serotype Kedougou infection in infants linked to infant formula milk, Spain, 2008

On 5 August 2008, the National Reference Laboratory of Salmonella (NRLS) noted an increase in the number of isolates of Salmonella enterica serotype Kedougou. As of 22 August, 29 isolates have been reported during 2008, which is ten times more than the average number of isolates identified by the NRLS during 2002-2007. All isolates have a typical, indistinguishable Pulse Field pattern (SALKEDXB-1, Spanish code) and are fully sensitive to the standard suite of antimicrobials.S

Un anticuerpo monoclonal específico frente al antígeno H:1,2 de Salmonella enterica serotipo Typhimurium que presenta reactividad cruzada con Salmonella enterica serotipo 4,5,12:i:-, línea celular productora, y su uso.

Esta invención se refiere a un anticuerpo monoclonal específico frente al antígeno H:1,2 presente en Salmonella entérica serotipo Typhimurium con reactividad cruzada frente al serotipo 4,5,12:i:-, una línea celular murina productora de dicho anticuerpo monoclonal y la aplicación de dicho anticuerpo monoclonal mediante técnicas inmunológicas para reconocer antígenos asociados a flagelo específicos de Salmonella enterica serotipo Typhimurium y Salmonella enterica serotipo 4,5,12:i:-.REIVINDICACIONES: 1. Un procedimiento para la obtención de un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo caracterizado porque comprende las siguientes etapas: a) inmunizar un animal con el antígeno flagelar H:1, 2 aislado; b) inmortalizar los linfocitos B procedentes de los ratones inmunizados en el paso anterior, mediante su fusión con células de mieloma para dar lugar a un hibridoma; c) aislamiento de aquellos clones de hibridomas que secretan anticuerpos monoclonales reactivos frente al antígeno flagelar H:1, 2; d) cultivo de dichos clones celulares y posterior obtención del anticuerpo monoclonal de interés, fragmento o variante del mismo, caracterizado porque dicho anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo reacciona específicamente frente al antígeno flagelar H:1, 2 presente en Salmonella enterica serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:-. 2. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo obtenido según el procedimiento de la reivindicación 1 caracterizado porque reacciona específicamente frente al antígeno flagelar H:1, 2 presente en Salmonella enterica serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:-. 3. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 2, caracterizado porque el animal inmunizado para su obtención está seleccionado entre: conejo, cabra y ratón. 4. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 2, caracterizado porque dicho anticuerpo posee un isotipo seleccionado entre: IgG, e IgM. 5. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 4, caracterizado porque el hibridoma aislado en el paso c) de su procedimiento de obtención es la línea celular 23D4, ECACC no. 05122301. 6. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 5, caracterizado porque dicho anticuerpo es murino. 7. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 5 o 6, caracterizado porque dicho anticuerpo es del isotipo IgM. 8. Un anticuerpo monoclonal, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 7, caracterizado porque dicho anticuerpo monoclonal se encuentra en sobrenadante, ascites o purificado. 9. Un fragmento de un anticuerpo monoclonal según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 caracterizado porque está seleccionado entre: un fragmento Fab, un fragmento F (ab') 2 y un fragmento Fv. 10. Una línea celular capaz de producir un anticuerpo monoclonal que reacciona específicamente frente al antígeno H:1, 2 presente en el serotipo Typhimurium y de forma cruzada con el serotipo 4, 5, 12:i:- de Salmonella enterica definido en las reivindicaciones 2 a 8 caracterizada porque dicha línea celular es la línea 23D4, ECACC no. 05122301. 11. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 2 a 9, para detectar la presencia de los serotipos Typhimurium o 4, 5, 12:i:- de Salmonella enterica en una muestra. 12. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según la reivindicación 11, caracterizado porque dicha muestra está seleccionada entre una muestra alimentaria y una muestra clínica. 13. Uso de un anticuerpo, fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 11 u 12, caracterizado porque dicha muestra clínica está seleccionada entre sangre, suero, plasma y orina. 14. Uso de un anticuerpo monoclonal, un fragmento o variante del mismo según una de las reivindicaciones 11 a 13, caracterizado porque dicha detección se realiza mediante un ensayo seleccionado entre: ELISA, Western-blot y Dot-blot.Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.Universidad del País Vasco; Instituto de Salud Carlos IIISolicitud de patent

Fecal carriage of Escherichia coli O157:H7 and carcass contamination in cattle at slaughter in northern Italy

Feedlot cattle slaughtered at a large abattoir in northern Italy during 2002 were examined for intestinal carriage and carcass contamination with Escherichia coli O157:H7. Carcass samples were taken following the excision method described in the Decision 471/2001/EC, and fecal material was taken from the colon of the calves after evisceration. Bacteria were isolated and identified according to the MFLP-80 and MFLP-90 procedures (Food Directorate’s Health Canada’s). Eighty-eight non-sorbitol-fermenting E. coli O157:H7 isolates were obtained from 12 of the 45 calves examined. In particular, E. coli O157:H7 isolates were found in 11 (24%) fecal and five (11%) carcass samples. PCR analysis showed that all 11 fecal samples and five carcass samples carried eae-γ1-positive E. coli O157:H7 isolates. In addition, genes encoding Shigatoxins were detected in O157:H7 isolates from nine and two of those 11 fecal and five carcasses, respectively. A representative group of 32 E. coli O157:H7 isolates was analyzed by phage typing and DNA macrorestriction fragment analysis (PFGE). Five phage types (PT8, PT32v, PT32, PT54, and PT not typable) and seven (I–VII) distinct restriction patterns of similarity > 85% were detected. Up to three different O157:H7 strains in an individual fecal sample and up to four from the same animal could be isolated. These findings provide evidence of the epidemiological importance of subtyping more than one isolate from the same sample. Phage typing together with PFGE proved to be very useful tools to detect cross-contamination among carcasses and should therefore be included in HACCP programs at abattoirs. The results showed that the same PFGE-phage type E. coli O157:H7 profile was detected in the fecal and carcass samples from an animal, and also in two more carcasses corresponding to two animals slaughtered the same day. [Int Microbiol 2007; 10(2):109-116

The type III secretion system effector SeoC of salmonella enterica subsp. salamae and S. enterica subsp. arizonae ADP-Ribosylates Src and inhibits opsonophagocytosis

Salmonella species utilize type III secretion systems (T3SSs) to translocate effectors into the cytosol of mammalian host cells, subverting cell signaling and facilitating the onset of gastroenteritis. In this study, we compared a draft genome assembly of Salmonella enterica subsp. salamae strain 3588/07 against the genomes of S. enterica subsp. enterica serovar Typhimurium strain LT2 and Salmonella bongori strain 12419. S. enterica subsp. salamae encodes the Salmonella pathogenicity island 1 (SPI-1), SPI-2, and the locus of enterocyte effacement (LEE) T3SSs. Though several key S Typhimurium effector genes are missing (e.g., avrA, sopB, and sseL), S. enterica subsp. salamae invades HeLa cells and contains homologues of S. bongori sboK and sboC, which we named seoC SboC and SeoC are homologues of EspJ from enteropathogenic and enterohemorrhagic Escherichia coli (EPEC and EHEC, respectively), which inhibit Src kinase-dependent phagocytosis by ADP-ribosylation. By screening 73 clinical and environmental Salmonella isolates, we identified EspJ homologues in S. bongori, S. enterica subsp. salamae, and Salmonella enterica subsp. arizonae The β-lactamase TEM-1 reporter system showed that SeoC is translocated by the SPI-1 T3SS. All the Salmonella SeoC/SboC homologues ADP-ribosylate Src E310 in vitro Ectopic expression of SeoC/SboC inhibited phagocytosis of IgG-opsonized beads into Cos-7 cells stably expressing green fluorescent protein (GFP)-FcγRIIa. Concurrently, S. enterica subsp. salamae infection of J774.A1 macrophages inhibited phagocytosis of beads, in a seoC-dependent manner. These results show that S. bongori, S. enterica subsp. salamae, and S. enterica subsp. arizonae share features of the infection strategy of extracellular pathogens EPEC and EHEC and shed light on the complexities of the T3SS effector repertoires of Enterobacteriaceae

Salmonella Derby Clonal Spread from Pork

The genetic diversity of the Derby serotype of Salmonella enterica in Spain was examined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Out of 24 identified PFGE profiles, a major clone was detected in 19% of strains from humans, 52% from food, and 62% from swine. This clone (clone 1) was isolated from pork products, suggesting swine as its source