Epäspesifisten ja spesifisten vuorovaikutuksien hyödyntäminen testosteronin ja sen sukuisten steroidien kapillaarielektromigraatioanalyyseissä

Determination of testosterone and related compounds in body fluids is of utmost importance in doping control and the diagnosis of many diseases. Capillary electromigration techniques are a relatively new approach for steroid research. Owing to their electrical neutrality, however, separation of steroids by capillary electromigration techniques requires the use of charged electrolyte additives that interact with the steroids either specifically or non-specifically. The analysis of testosterone and related steroids by non-specific micellar electrokinetic chromatography (MEKC) was investigated in this study. The partial filling (PF) technique was employed, being suitable for detection by both ultraviolet spectrophotometry (UV) and electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). Efficient, quantitative PF-MEKC UV methods for steroid standards were developed through the use of optimized pseudostationary phases comprising surfactants and cyclodextrins. PF-MEKC UV proved to be a more sensitive, efficient and repeatable method for the steroids than PF-MEKC ESI-MS. It was discovered that in PF-MEKC analyses of electrically neutral steroids, ESI-MS interfacing sets significant limitations not only on the chemistry affecting the ionization and detection processes, but also on the separation. The new PF-MEKC UV method was successfully employed in the determination of testosterone in male urine samples after microscale immunoaffinity solid-phase extraction (IA-SPE). The IA-SPE method, relying on specific interactions between testosterone and a recombinant anti-testosterone Fab fragment, is the first such method described for testosterone. Finally, new data for interactions between steroids and human and bovine serum albumins were obtained through the use of affinity capillary electrophoresis. A new algorithm for the calculation of association constants between proteins and neutral ligands is introduced.Testosteronin ja sen sukuisten steroidien määrittäminen kehon nesteistä on keskeistä monien sairauksien diagnosoinnissa sekä doping-valvonnassa. Perinteiset steroidien analyysimenetelmät kärsivät usein joko riittämättömästä spesifisyydestä tai työläästä näytteiden esikäsittelystä. Tässä työssä tutkittiin testosteronin ja sen sukuisten steroidien määrittämistä kapillaarielektromigraatiotekniikoilla. Kyseiset tekniikat ovat varsin uusi lähtökohta steroiditutkimuksille. Kapillaarielektromigraatiotekniikat perustuvat molekyylien erottamiseen toisistaan voimakkaassa sähkökentässä. Nestemäinen näyte syötetään ohueen kapillaariin, jonka halkaisija on tyypillisesti 20 100 mikrometriä. Kapillaari on ennen näytteensyöttöä täytetty elektrolyyttinesteellä, ja näytteensyötön jälkeen sen molemmat päät asetetaan elektrolyyttiastioihin yhdessä elektrodien kanssa. Erotuksen aikaansaamiseksi elektrodien välille kytketään voimakas sähkökenttä. Sähköisesti varautuneet molekyylit (ionit) erottuvat sähkökentässä niiden erilaisten elektroforeettisten liikkuvuuksien mukaisesti. Steroidien sähköisestä varauksettomuudesta johtuen niillä ei ole elektroforeettista liikkuvuutta sähkökentässä. Kapillaarielektromigraatiotekniikoiden soveltaminen steroidien erottamiseen edellyttääkin ionisoituvien orgaanisten lisäaineiden käyttöä elektrolyyttiliuoksessa. Lisäaineilla voi olla joko spesifisiä tai epäspesifisia vuorovaikutuksia steroidien kanssa. Tässä työssä testosteronin ja sen sukuisten steroidien määrittämistä tutkittiin epäspesifisellä misellisellä sähkökineettisellä kromatografialla (MEKC). Elektrolyyttiliuoksessa käytettiin lisäaineina tensidejä sekä syklodekstriinejä. Kapillaari täytettiin vain osittain misellisellä elektrolyyttiliuoksella, minkä ansiosta steroidit voitiin tunnistaa sekä ultraviolettispektrofotometrisesti (UV) että sähkösumutus-ionisaatiomassaspektrofotometrisesti (ESI-MS). Osittaistäyttöön (PF) perustuva PF-MEKC UV osoittautui herkemmäksi, tehokkaammaksi ja toistettavammaksi menetelmäksi kuin PF-MEKC ESI-MS. Tutkimuksessa havaittiin, että ESI-MS-liitäntä asettaa huomattavia kemiallisia rajoituksia paitsi ionisaatio- ja detektointitapahtumille myös erotustapahtumalle. Uusilla PF-MEKC UV-menetelmillä steroidistandardit voidaan analysoida nopeasti, tehokkaasti ja kvantitatiivisesti. Herkin PF-MEKC UV-menetelmä soveltuu testosteronin nopeaan ja spesifiseen määrittämiseen miesten virtsanäytteistä miniatyrisoidun immunoaffiniteettikiinteäfaasiuuton (IA-SPE) jälkeen. Tutkimuksessa kehitetty IA-SPE perustuu vuorovaikutuksiin testosteronin ja sille spesifisen rekombinantin Fab-vasta-ainefragmentin välillä. IA-SPE on yksinkertainen ja nopea näytteen esikäsittelymenetelmä, jonka avulla tutkittava yhdiste voidaan konsentroida ja eristää muista näytemolekyyleistä. IA-SPE:tä ei ole aikaisemmin sovellettu testosteronin eristämiseen. Uutta tietoa steroidien sekä ihmisen ja naudan seerumin albumiiniproteiinien välisistä vuorovaikutuksista saatiin affiniteettikapillaarielektroforeesin avulla. Tutkimuksessa kehitettiin uusi algoritmi, jonka avulla voidaan laskea proteiinien ja neutraalien ligandien välisiä sitoutumisvakioita. Testosteronin ja sen sukuisten steroidien sitoutumisessa albumiiniproteiineihin havaittiin merkittäviä eroja

La Política Exterior de QATAR y sus intereses Geopolíticas en Libia tras la caída del régimen de Muamar Gadafi. Implicaciones para el Estado Qatarì en la Región: periodo 2011-2018.

El Orígenes y Desarrollo de la Política Exterior de Qatar, contiene 4 apartados en los que se hace un estudio de las acciones y mecanismos implementados por el emirato, a través de su historia, desde sus antecedentes coloniales, el posterior desarrollo de su economía; permitiéndole posicionarse como una potencia económica tanto a nivel regional como a nivel mundial; y el pragmatismo mediante el cual se ha llevado a cabo el manejo de los asuntos exteriores del emirato, especialmente durante las últimas dos décadas.El capítulo II: Libia y la Crisis Política tras la Caída del Régimen de Muamar Gadafi; toma en cuenta, los factores geopolíticos y geoestratégicos por los que Libia posee gran relevancia para la consolidación de los intereses regionales de Qatar, señalando los recursos con los que cuenta el país, su posición geográfica en la costa mediterránea del norte de África, describiendo la crisis política y el Estado de anarquía bajo el cual se ha encontrado desde el estallido de la primavera árabe en 2011.Finalmente, el capítulo III: Intervención de Qatar en el Conflicto Libio y los Efectos de su Política Exterior en el Medio Oriente, señala los efectos políticos y económicos que ha experimentado el Estado de Qatar como producto de su política intervencionista, estableciendo los niveles de implicación de Doha en las dos guerras civiles vividas en Libia desde 2011, con su apoyo a grupos de corte islamista, para propiciar un eventual cambio de régimen; así como también el estudio de la imposición de un bloqueo diplomático, económico y de transporte impuesto por Arabia Saudita, Emiratos Árabes Unidos, Egipto y Bahréin, a Qatar, como medida para mantener el status quo de la región y la respuesta del emirato a talsituación

Partial filling micellar electrokinetic chromatography analysis of androgens and testosterone derivatives using two sequential pseudostationary phases

Separation of anabolic and androgenic steroids by micellar electrokinetic chromatography (MEKC) has been little studied. Simultaneous separation of the endogenous α-epimers testosterone and epitestosterone has not been achieved with any electroseparation technique. Here, a partial filling micellar electrokinetic chromatographic (PF-MEKC) method is described for the analysis of three endogenous steroid hormones (androstenedione, testosterone, epitestosterone) and two synthetic anabolic steroids (fluoxymesterone, methyltestosterone). The resolution efficiency of single-isomer sulphated γ-cyclodextrins and the surfactants sodium dodecyl sulphate and sodium taurocholate was exploited. The method is based on the sequential introduction of short plugs of two different pseudostationary phases into the capillary. The separation was completed in less than 10 min. The method can be used in quantitative analysis. Linear correlation was obtained between concentration and peak area of 0.996 or better. The repeatability (RSD) of the compound peak areas ranged from 3.6% (methyltestosterone) to 6.2% (androstenedione). Limits of detection were between 73 μg/L (testosterone) and 160 μg/L (fluoxymesterone). As a demonstration of the method, androstenedione, testosterone and epitestosterone were determined in a spiked urine sample