Dismissing a CFO

This Work Project presents a case-study to be used in Negotiation courses, both in Masters Programs and executive education workshops. The negotiation case is based on a real negotiation, between a Portuguese media company and its CFO, about the terms of his dismissal. This dismissal demonstrates that the better informed negotiator has a higher chance of achieving favorable results. It also illustrates the importance of being truthful in achieving positive outcomes. We conclude that gathering information and behaving ethically is fundamental in a negotiation context

Continuous versus batch manufacturing of oral dosage forms: analysis of current worldwide implementation

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, 2021, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia.Tradicionalmente, o fabrico de formas farmacêuticas orais é feito pela produção de lotes, mas nos últimos anos a indústria farmacêutica tem vindo a ser pressionada para melhorar a eficiência e qualidade de fabrico. Com o aumento da exigência por parte das autoridades reguladoras e a diminuição das margens de lucro fez com que as indústrias farmacêuticas explorassem novas tecnologias de fabrico A produção em continuo tem sido considerada uma opção alternativa à produção por lotes para muitos fabricantes, visto que, geralmente produz produtos farmacêuticos de melhor qualidade e de maior rendimento, com tempo e custos reduzidos. Apesar dos avanços consideráveis e do incentivo por parte das autoridades reguladoras (FDA, EMA) através da emissão de diretrizes adequadas, a utilização da produção em continuo na área farmacêutica ainda é limitada devido a uma série de desafios relativos ao desenvolvimento de processo e à garantia de qualidade que têm impedido os fabricantes de adotar esta tecnologia. Esta dissertação aborda as principais alterações relacionadas com a implementação da produção em continuo relativamente à produção por lotes e avalia o tipo de produção (produção em continuo vs produção por lotes) mais rentável tendo em conta vários fatores. São ainda apresentados e discutidos exemplos de empresas que já utilizam a produção em continuo, bem como alguns medicamentos fabricados com esta tecnologia.Traditionally, the manufacture of oral pharmaceutical forms is performed by batch manufacturing, but in recent years the pharmaceutical industry has come under pressure to improve manufacturing efficiency and quality. With increasing requirements from regulatory authorities and decreasing profit margins, pharmaceutical companies have been exploring new manufacturing technologies. Continuous manufacturing has been considered an alternative option to batch manufacturing for many manufacturers, as it generally produces better quality and higher yielding pharmaceutical products, with reduced time and costs. Despite considerable advances and encouragement from regulatory authorities (FDA, EMA) through the issuance of appropriate guidelines, the use of continuous manufacturing in pharmaceuticals is still limited due to a number of process development and quality assurance challenges that have prevented manufacturers from adopting this technology. This thesis is focused on the main changes related to the implementation of continuous manufacturing relative to batch manufacturing and the evaluation of the most cost-effective type of production. Examples of companies already using continuous manufacturing, as well as some drugs manufactured by using this technology will be presented and discussed

Non-invasive monitoring of kiwifruit ripening

This thesis aims to explore the use of Visible and Near-Infrared Diffuse Reflectance Spectroscopy (VisNIR-DRS) in monitoring the ripening of two kiwifruit species, a yellow- (Actinidia chinensis Planch 'Jintao') and a green-fleshed (Actinidia deliciosa Liang et Ferguson 'Hayward'). The technique used in this study relies on correlating spectra with fruit internal quality attributes (IQA). However, low correlations in VisNIR-DRS causes problems in generalizing calibration models to new data. Therefore, the study was designed to test VisNIR-DRS in difficult real field conditions. Two orchards were monitored for each cultivar over two years, enabling internal (IV) and external validation (EV) on four independent datasets. The first part of the study focused on characterizing the time evolution of IQA during ripening. The second part involved developing calibration models for each IQA, based on the data from the first year. The results showed that it is possible to obtain highquality predictions for the IQA's daily averages from medium-quality models. The third part involved the two years' data. Variable selection and orthogonal signal correction were employed to improve the performance of the models, although only the IV performance improved, indicating that these widely recommended techniques are of little value in the context of stringent EV. Usual calibration transfer between the spectrometers used in each year was impossible in the absence of common samples. Therefore, a normalization approach based on daily average spectra was used, resulting in improved model performance. Lastly, the fourth part addressed the time variation of IQA in cold-stored kiwifruit, along with sensory data and their correlation with the spectra. According to the results of this study, VisNIR-DRS is a promising and important tool for kiwifruit industry since can be used to follow non-destructively the kiwifruit ripening, either on-tree or during storage, in a higher number of fruit samples and in less time.Esta tese debruça-se sobre a aplicação de Espetroscopia de Refletância Difusa no Visível e Infravermelho Próximo (ERD-VIP) na monitorização do amadurecimento de dois cultivares de kiwi, um de polpa amarela (Actinidia chinensis Planch ‘Jintao’) e outro de polpa verde' [Actinidia deliciosa (A. Chev.) C.F. Liang et A.R. Ferguson ‘Hayward’]. O estudo realizado enquadra-se, muito genericamente, no âmbito de um esforço global de promover a ERD-VIP como uma ferramenta prática e fiável para monitorizar a qualidade interna dos frutos. Com efeito, o controlo de qualidade dos frutos faz-se, em geral, através de processos destrutivos e demorados e que, pela própria limitação de desperdício na amostragem, conduz a caracterizações estatisticamente incorretas. Os métodos não invasivos, e a ERD-VIP em particular, permitem amostragens rápidas e uma caracterização estatística da população mais rigorosa. No entanto, a aplicação da ERD-VIP apresenta, ainda, alguns problemas, que têm impedido esta técnica de ser amplamente adaptada pelos produtores. A ERD-VIP baseia-se na correlação entre os espetros de refletância e os Parâmetros de Qualidade Interna (PQI) a determinar, como por exemplo, o Teor de Sólidos Solúveis (TSS). Com base nesta relação e em técnicas de análise multivariada, como por exemplo o Partial Least Squares (PLS), constroem-se modelos de calibração entre os espetros e os PQI. No entanto, na gama espetral do visível e infravermelho próximo, as bandas espetrais são muito largas e o efeito de interferentes é muito elevado, de onde resulta que os modelos de calibração para os PQI podem apresentar problemas de generalização a novos dados. Isto quer dizer que os modelos de calibração construídos com os frutos de um dado pomar podem realizar previsões de baixa qualidade quando aplicados a um pomar diferente; ou que os modelos construídos num dado ano, com certas características edafoclimáticas, podem falhar quando aplicados aos espetros do ano seguinte. A solução principal para este problema é recolher dados de proveniências o mais abrangentes possível, incluindo vários pomares, anos e condições de produção. No entanto, a abrangência das condições de calibração pode resultar numa perda de precisão relativamente a modelos mais localizados, no tempo e no espaço. Por exemplo, pode ser vantajoso desenvolver um modelo multi-anual para o mesmo pomar, garantindo maior especificidade. A análise da relação entre os dados de partida de um modelo e as suas características algébricas (vetor de regressão, loadings, scores, etc.), a que poderíamos chamar de meta-modelação, é uma área de investigação ainda com pouca expressão, mas que será crucial para resolver os problemas de generalização dos modelos de calibração. O objetivo mais lato desta tese é contribuir para este esforço de meta-modelação. A vasta maioria dos trabalhos realizados em ERD-VIP aplicada à determinação dos PQI processa-se na pós-colheita, o que significa que os frutos têm todos o mesmo estado de maturação e apresentam, por isso, bastante homogeneidade. Os resultados destes trabalhos são importantes para mostrar que a ERD-VIP pode ser utilizada, imediatamente antes da aquisição pelo consumidor, para classificar ou categorizar os frutos em escalões de qualidade. Existem muito menos trabalhos a aplicar a ERD-VIP durante a pré-colheita, em particular com o objetivo de poder prever a data ótima de colheita. Contudo, esta aplicação é tão ou mais importante que a anterior, pois permite monitorizar os pomares durante o amadurecimento da fruta e contribuir para a sua gestão adequada. A monitorização na pré-colheita tem, no entanto, algumas características que a tornam potencialmente mais complicada do que a que é feita apenas na pós-colheita. A principal diferença é que os frutos avaliados englobam um conjunto de estados de maturação muito heterogéneo, o que levanta problemas adicionais à modelação espetral. Com efeito, a estrutura e a constituição química dos frutos alteram-se durante o processo de maturação, o que tem consequências ao nível da propagação da luz e das relações espetrais entre os vários componentes. Assim, os estudos précolheita têm de se adaptar a uma estrutura física e química dos frutos que é mais dinâmica do que a encontrada na pós-colheita, o que dificulta o estabelecimento de padrões entre características espetrais e os PQI. Por outro lado, representa um campo de estudo mais desafiante e útil ao desenvolvimento da meta-modelação e permite ter uma perspetiva abrangente sobre os processos fisiológicos e a sua manifestação ao nível espetral. Procurando um enquadramento nos problemas descritos acima, optou-se, neste trabalho, por um desenho experimental que pudesse contribuir para as esclarecer as questões associadas à generalização dos modelos, num contexto de monitorização pré-colheita. Com este intuito, foram escolhidos dois pomares para cada cultivar (dois de kiwi polpa amarela e dois de kiwi de polpa verde) e as medidas de campo foram realizadas durante dois anos. Desta forma foi possível realizar validação externa dos modelos, dado que, para cada cultivar, obtiveram-se quatro conjuntos de dados independentes entre si: pomar 1/ano 1, pomar 2/ano 1, pomar 1/ano 2 e pomar 2/ano 2. Na validação externa usam-se três destes conjuntos independentes para fazer a calibração e o quarto para fazer a validação. A validação externa é, com efeito, um dos pilares essenciais para avaliar a capacidade de generalização dos modelos de calibração. No entanto, a maior parte dos estudos apresentados na literatura apresenta apenas uma calibração interna, em que os espetros de fontes diferentes (diferentes pomares, produtores ou anos) são distribuídos igualmente pelos conjuntos de calibração e validação. Deste modo não há verdadeira heterogeneidade entre calibração e validação, eliminando, em grande parte, o aparecimento de problemas relacionados com a generalização dos modelos a novos dados. Neste trabalho faz-se um paralelo entre os resultados obtidos em validação interna e externa, mostrando como os primeiros são sempre excessivamente otimistas. Na primeira parte do trabalho faz-se uma descrição da evolução dos PQI ao longo do processo de amadurecimento. Foram medidos dez PQI: os parâmetros de colorimetria L*, a*, b*, Hue e chroma, mais os parâmetros físico-químicos de firmeza, massa seca, TSS, pH e acidez titulável. O conhecimento da fisiologia dos kiwis e a interpretação da evolução dos PQI à luz dessa fisiologia são muito importantes para que se possa entender melhor as diferenças nos modelos de calibração obtidos em condições diferentes. Na segunda parte do trabalho faz-se um estudo inicial dos modelos de calibração com apenas um ano de medidas. Para cada cultivar havia apenas, nessa altura, dois conjuntos de dados independentes. A validação externa, que consiste em modelar com um desses conjuntos e prever o outro, conduziu a resultados muito pobres, pelo que se adotou uma abordagem híbrida, em que cada conjunto de dados era dividido em dois subconjuntos de árvores diferentes. Fez-se então o estudo com quatro conjuntos independentes de árvores. A qualidade das previsões depende muito do PQI. Os melhores resultados são obtidos para TSS, Hue e a* (Standard Deviation Ratio - SDR > 2). A firmeza e a percentagem de massa seca podem ser previstas de forma grosseira (SDR ~ 1.5), mas os restantes parâmetros não podem ser previstos de forma minimamente aceitável. Mostrou-se ainda que, mesmo partindo de modelos de calibração medianos, é possível obter previsões de grande qualidade da média diária dos PQI (SDR > 6), o que é, no fundo, o objeto de interesse para os produtores. Na terceira parte da tese faz-se um estudo detalhado da validação externa e interna em dois anos. Além disso, houve um problema adicional, relacionado com a perda do espetrómetro no início do segundo ano. Isto tornou o processo de validação ainda mais complicado, pois passou a incorporar uma componente de transferência de calibração entre os dois instrumentos. Tratou-se, portanto, de um problema de validação em dois pomares, dois anos e dois espetrómetros, o que corresponde ao caso real mais difícil de tratar. Perante este programa complexo, optou-se por concentrar os esforços na modelação do TSS, um dos PQI mais importante, tanto na determinação da data ótima de colheita, como na determinação do estado ótimo para consumo. Começou-se por comparar os resultados de validação interna com os de validação externa. Os resultados mostraram que a validação interna dá conta de todas as fontes de variabilidade (incluindo formas espetrais globalmente diferentes, fornecidas por cada um dos espetrómetros) e consegue fazer boas previsões (SDR = 2). Já os resultados de validação externa são bastante fracos, com um valor global de SDR = 1.4 (considerando em conjunto as previsões feitas para cada pomar), mas com valores individuais (SDR calculado apenas no conjunto de previsões de cada pomar) de 1 nos piores casos, ou seja, sem qualquer capacidade de previsão. Procurou-se então melhorar a performance do modelo utilizando duas técnicas muito usadas na literatura: a seleção de variáveis (SV) e correção de sinal ortogonal (Orthogonal Signal Correction - OSC). A ideia subjacente à aplicação destas técnicas é a mesma: eliminar a influência de componentes espectrais pouco informativas e que possam ser contraproducentes na validação. Em ambos os casos se verificou que a validação interna pode beneficiar da aplicação destes métodos, mas não a validação externa. Isto está de acordo com a ideia de que SV e OSC otimizam o espaço associado a três dos conjuntos de dados, mas que essa otimização não generaliza necessariamente ao quarto conjunto de dados. SV e OSC são duas das técnicas mais amplamente recomendadas para melhorar a robustez dos modelos. Neste trabalho mostra-se, portanto, que estas técnicas valem de pouco no contexto de uma validação externa difícil. Tentou-se uma transferência de calibração, mas na ausência de amostras comuns, as técnicas habituais não funcionam. Foi então tentada uma abordagem baseada na normalização aos espetros médios diários. Selecionou-se o conjunto com mais dias de medição como "master" e os restantes como "slaves". Em cada dia de medição, os espetros "slave" são multiplicados pela razão entre as médias “master” e “slave” desse dia. Isto permitiu compensar, em grande parte, as variações espetrais induzidas pelos espetrómetros e também variações de fundo espetral causadas por texturas diferentes. Foi assim possível aumentar bastante a performance do modelo em validação externa, passando o SDR de 1.4 para 1.8. Este valor permite realizar previsões médias diárias de TSS de elevada qualidade (SDR = 2.8). Demonstrou-se que mesmo numa conjuntura adversa de troca de espetrómetro, sem possibilidade de haver amostras comuns, é possível usar o modelo de calibração calculado num dado conjunto de frutos para prever o SSC de um conjunto de frutos independente (outro pomar e/ou ano). Na quarta parte da tese estuda-se a etapa de pós-colheita e armazenamento dos kiwis. Fez-se o estudo da variação dos PQI em função do tempo e realizou-se a análise dos dados sensoriais adquiridos a partir de painéis de provadores. A partir destes dados foi possível perceber quais são as características organoléticas mais valorizadas pelos consumidores. Por fim, procurou-se identificar algum tipo de padrão espetral que pudesse ser usado para correlacionar/antecipar a resposta sensorial, tendo se verificado uma boa correlação entre SSC e a refletância dos espectros dos kiwis nos comprimentos de onda entre 635 – 780 nm. De acordo com os resultados deste estudo, VisNIR-DRS é uma ferramenta promissora que pode ser usada para monitorizar o amadurecimento de kiwis na árvore, ou durante o armazenamento em pós-colheita. Isto é de grande importância para a indústria de kiwis, uma vez que permite que a monitorização do amadurecimento, seja feita de forma não destrutiva e num maior número de frutos, em menos tempo.The author acknowledges the Portuguese Foundation for Science and Technology – FCT for funding the PhD scholarship SFRH/BD/131462/ 2017

Zebrafish as a model for toxicological studies: is there a role for Paraoxonase?

Tese de mestrado, Biologia Humana e Ambiente, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2015Human PON1 enzyme is a multifaceted biomolecule with antioxidant, anti-atherogenic and detoxifying properties. In that way, it is considered one of the main human body endogenous free-radical scavenging system. PON1 actions are related with the three activities assigned to it: paraoxonase (POase), arylesterase (AREase) and lactonase (LACase). Due to the easy measurement of PON1 activities and to its association to several pathologies linked to oxidative stress, PON1 represents a potential biomarker of disease, in particular for renal disease. The general goal of this exploratory and pioneer study was to explore the PON1 activities in zebrafish animal model. Zebrafish is an emergent animal model that is becoming to be largely used as a model in human disease and toxicological studies. Zebrafish presents several characteristics that turns it in an extraordinary, even a unique, model for the toxicological study. Among these characteristics, we can identify the reduced size, the transparency of the embryo, the rapid organogenesis, the low cost of maintenance and the complete sequencing of its genome, where PON1 gene is included. The knowledge on the homology between the zebrafish and human at genetic, molecular and physiological levels is increasing. A good correlation between zebrafish and man has been found for organ toxicity as well. In the present study, the homology between human (HGNC:9204) and zebrafish (Zgc:91887) enzymes was firstly stablished, supporting that PON1 is highly preserved on the zebrafish, presenting 49% of similitude with the man. All experiments involving zebrafish were previously approved by the Ethical Committee at the Instituto Gulbenkian de Ciência (IGC). With the objective of determine if human PON1 activities were present on zebrafish, in the first part of this study, the quantification of the activities POase, AREase and LACase activities were carried out in the whole animal extract, using the same spectrophotometric methods which were validated for human plasma samples. Both AREase and LACase activities were determined while POase was not quantifiable. As the homogenate of whole animal was used, the contribution of other enzymes should not be excluded. For instance, the esterases, as the cholinesterases and the carboxylesterase, due to their capacity of hydrolyze the phenyl acetate, might increase the AREase activity. Also, the other paraoxonases of PON family (PON2 and PON3) may contribute for the AREase and LACase activities, when whole animal extract is used, comparatively to plasma. Aiming to exclude the contribution of the esterases, other than PON enzymes, and as anti-PON1 for the zebrafish was not available, a pharmacological approach was followed by using the paraoxon as an inhibitor of cholinesterase and carboxylesterase enzymes. A significant diminution of the AREase activity was observed when the zebrafish larvae were exposed to the xenobiotic. In attempting to clarify the contribution of PON1 for whole animal AREase and LACase activities, zebrafish larvae were exposed to acetylsalicylic acid, which is an inducer of PON1. No changes in AREase or LACase activities changes were observed upon exposition to the PON1 inducer. There are many factors that might influence the PON1 status. However, what turns out to be more dominant is age. In that regard, the AREase, LACase and POAse activities during the zebrafish development were explored in the second part of this study. The PON1 activities were determined in zebrafish larvae from day 1 to day 7 post fertilization (dpf). The contribution of chorion – structure that evolves zebrafish embryo – for the AREase and LACase activities was also tested. At 24 hours post fertilization, the zebrafish embryos are evolved by the chorion and within 48 hours post fertilization they may or may not present that structure. The comparison of AREase and LACase activities between groups with and without chorion, at 24 and 48 hours post fertilization disclosed that only AREase activity is influenced by the presence of chorion for embryos with 24 hours post fertilization. These results suggest that proteins with AREase activity integrate the chorion. The evaluation of AREase and LACase activities until 7 dpf pointed to an increase of both activities during the zebrafish development, in particular for the AREase activity. The zebrafish is being postulated as a good model for nephrotoxicity studies due to the similarity of its pronephro to the human kidney. As PON1 is being studied as a potential biomarker of renal disease, the third objective stablish was to evaluate the relation between PON1 activities and drugs associated to nephrotoxicity. Tenofovir disoproxil fumarate (TDF) and paracetamol (PCM), as drugs with proved association to nephrotoxicity on zebrafish and man, were tested in two concentrations. For both drugs, a decrease in the AREase activity was observed. The results herein presented show, for the first time, that the zebrafish presents AREase and LACase activities, although they are not to exclusively assign to PON1 enzyme. The POAse activity might not be present in this model. The LACase activity, and in particular the AREase activity, increase during zebrafish development. Moreover, it was for the first time showed that proteins with AREase activity are presented in zebrafish chorion. The characterization of this enzyme and other important enzymes for xenobiotics and drug detoxification is an important step for the proposal of zebrafish as a model for translational research and to disclose its applicability to pre-clinical studies. In this regard, the present work, give new insights on the three activities involved in endogenous and exogenous compounds metabolism.A enzima paraoxonase 1 (PON1) humana é uma biomolécula multifacetada com propriedades antioxidantes, anti-aterogénicas e destoxificantes., sendo considerada um dos principais sistemas de destoxificação de radicais livres endógenos humano. As suas acções estão relacionadas com as três actividades que lhe são associadas: paraoxonase (POase), arylesterase (AREase) e lactonase (LACase). O facto de estas actividades serem facilmente mensuráveis e de a actividade PON1 ter vindo a ser associada a diversas patologias relacionadas com stress oxidativo faz com que seja um potencial biomarcador de doença, particularmente de doenças renais. O objectivo geral deste estudo exploratório e pioneiro, foi explorar as actividades da PON1 no modelo animal zebrafish. O zebrafish é um modelo animal emergente que tem vindo a ser largamente utilizado como modelo em estudos de doença humana e em estudos toxicológicos. Apresenta diversas características que o tornam um modelo extraordinário, senão único, para o estudo em toxicologia. Entre elas podemos destacar o tamanho reduzido, a transparência do embrião, a rápida organogénese, o baixo custo de manutenção e a sequenciação completa do seu genoma, onde se inclui o gene PON1. O conhecimento acerca da homologia entre o zebrafish e o ser humano a nível genético, molecular e fisiológico tem vindo a aumentar. Além disso, tem vindo a ser estabelecida uma boa correlação órgão-toxicidade entre zebrafish e o homem. No presente estudo, começou por se estabelecer a homologia entre a enzima no homem (HGNC:9204) e no zebrafish (Zgc:91887), ficou demonstrado que a PON1 está altamente conservada no zebrafish, apresentando 49% de similitude com o homem. Todas as experiências realizadas com o zebrafish foram previamente aprovadas pelo Comité de Ética do Instituto Gulbenkian de Ciência (IGC). Na primeira parte deste estudo e com o objectivo de determinar as actividades da PON1 humana no zebrafish, procedeu-se à quantificação das actividades Poase, AREase e LACase nos homogenatos de embriões/larvas de zebrafish. Foi usado um método espectofotométrico validado para amostras humanas. Ambas as actividades AREase e LACase foram determinadas, enquanto que a Poase não foi quantificável. Contudo, pelo facto de se usar o homogenato de todo o animal, deve considerar-se a contribuição de outras enzimas. Por exemplo, as esterases, como as colinesterases e as carboxilesterases, pela sua capacidade de hidrolisar o fenilacetato, podem aumentar a actividade AREase. Também as outras paraoxonases da família PON (PON2 e PON3) podem contribuir para as actividades AREase e LACase quando o homogenato de todo o animal é usado, em comparação com o plasma. Com vista a excluir a contribuição das esterases que não as PONs, e dada a indisponibilidade comercial de anticorpos anti-PON1 para o zebrafish, optou-se por uma abordagem farmacológica, usando o paraoxono como inibidor das actividades enzimáticas colinesterase e carboxilesterase. As larvas expostas ao xenobiótico registaram uma diminuição significativa da actividade AREase. Procurando clarificar a contribuição da PON1 nas actividades AREase e LACase foi usado o ácido acetilsalícilico como indutor da PON1 e da sua actividade. Após a exposição ao fármaco não foram registadas alterações quer na actividade AREase, quer na actividade LACase. São conhecidos vários factores que influenciam o status da PON1 sendo o mais relevante a idade. Partindo deste princípio, na segunda parte deste estudo, quantificaram-se as actividades PON1 ao longo do desenvolvimento do zebrafish. A quantificação das actividades PON1 foi feita do dia 1 até ao dia 7 pós fertilização (dpf). A contribuição do córion – estrutura que envolve o embrião – para as actividades AREase e LACase foi também estudada. Os embriões zebrafish às 24 hours pós fertilização (hpf) encontram-se envolvidos pelo córion, ao passo que com 48 horas podem ou não apresentar esta estrutura. A comparação das actividades AREase e LACase entre grupos com e sem córion, às 24 e às 48 hpf mostrou que apenas a actividade AREase é influenciada pela presença do córion, para os embriões com 24 hpf. Estes resultados sugerem a presença de proteínas com actividade AREase no córion. A avaliação das actividades AREase e LACase até ao 7 dpf mostrou o aumento de ambas as actividades ao longo do desenvolvimento do zebrafish, em particular para a actividade AREase. O zebrafish é usado como modelo em estudos de nefrotoxicidade devido à semelhança entre o pronefro do zebrafish e do rim humano. Dado que a PON1 tem sido estudada como um potencial biomarcador de doença renal, o terceiro objectivo definido foi avaliar o efeito de fármacos associados a nefrotoxicidade nas actividades PON1. O tenofovir disoproxil fumarato (TDF) e o paracetamol (PCM), como fármacos com comprovada nefrotoxicidade no zebrafish e no homem, foram testados em duas concentrações. Para ambos os fármacos foi observada uma diminuição da actividade AREase. Em conjunto, estes resultados demostram, pela primeira vez, que o zebrafish apresenta actividades AREase e LACase, embora não permitam atribuir exclusivamente à PON1 as actividades quantificadas. A actividade Poase parece não estar presente neste modelo. A LACase, e em particular a actividade AREase, aumenta ao longo do desenvolvimento do zebrafish. Pela primeira vez foi também demonstrada a presenta de proteínas com actividade AREase no córion do zebrafish. A caracterização desta e de outras enzimas importantes para a destoxificação de fármacos e xenobióticos representa um passo crucial para a proposta do zebrafish como modelo para investigação de translação e para a avaliação da sua aplicabilidade em estudos pré-clínicos. Neste contexto, o presente trabalho contribui para o conhecimento de três actividades envolvidas no metabolismo de compostos endógenos e exógenos no zebrafish

Modelling the gait of healthy and post-stroke individuals

Gait is a complex mechanism which involves the actionof the musculoskeletal system, controlled by spinal andsupraspinal mechanisms [1]. After CerebrovascularAccident (CVA), or stroke, the damage of structuresinvolved in motor control from one side of the brain, cancause activation deficits in the muscles from thecontralesional (CONTRA) side of the body hemiparesis, leading to asymmetry in the gait pattern[2]. In gait analysis, a set of experimental methods haveben used to study the gait of one subject, including basedon: visual analysis, collection of kinematic parametersacquired using cameras and reflective body markers,kinetic analysis using force platforms to determine theground reaction force (GRF) and electromyography.Due to the recent technological advances, it becamepossible to create and implement complex dynamicalmulti-segmented models of the human body withseveral degrees-of-freedom to perform simulations fromexperimental data [3]. OpenSim is an open-sourcesoftware developed in Stanford University that allowsthe creation of models of the musculoskeletal systemand the development of subject-specific simulations ofseveral tasks [4].The present work describes a procedure used to performa simulation in OpenSim of a healthy and a post-strokeindividual, using real experimental data. The kinematicparameters were determined as well as the activation oftwo calf muscles: soleus (SOL) and medialgastrocnemius (MEDGAS)

Caso ortopédico

A term newborn, from a medically supervised pregnancy, had a hypoplasia of the right leg bones and ipsilateral deviation of the foot on the obstetric ultrasounds and presented at birth with a medial deviation of the inferior third of the right leg and dorsiflexion of the right foot. A right leg x-ray showed a congenital posteromedial bowing of the tibia (CPMBT). A favorable outcome was achieved with a conservative approach at eleven months old.CPMBT is the most benign of all the congenital deformities of the tibia. Usually it is obvious at birth as a calcaneal valgus deformity. It tends to resolve spontaneously, thus a conservative approach is adopted in most cases. Limb length discrepancy is the main complication, and so follow-up is recommended until skeletal maturity.Due to the rarity of these deformities, an early recognition and referral are fundamental.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Association between chronic pain and sociodemographic and health characteristics in workers at a higher education institution

Enquadramento: A dor é uma experiência multidimensional, desagradável, que envolve componentes sensoriais e emocionais, associada a uma lesão tecidular concreta ou potencial, ou descrita em função dessa lesão. As situações às quais os trabalhadores estão sujeitos nos seus locais de trabalho, podem ser fatores preditores de vários problemas de saúde, nomeadamente a presença de dor crónica. Por sua vez, a dor crónica pode ter implicações no desempenho do trabalho. Por esse motivo é importante investigar os determinantes da presença de dor crónica e a sua relação com os comportamentos de saúde numa população de trabalhadores. Objetivo: Este estudo tem como objetivo avaliar a associação entre as características sociodemográficas, de saúde e comportamentais e a dor crónica em trabalhadores de uma Instituição de Ensino Superior pública em Portugal. Métodos: Foi desenvolvido um estudo de abordagem qualitativo, observacional e transversal. A amostra de 82 participantes foi recolhida por conveniência no âmbito do programa Sistema Integrado Sustentável de Monitorização da Saúde pela Universidade de Aveiro (e.cuidHaMUsTM). Os dados para a caracterização da amostra (sociodemográficos, hábitos tabágicos e de saúde. doenças e dor, hábitos alimentares, atividade física e exames de diagnóstico) foram recolhidos através do questionário e.cuidHaMUs-QueST®. Foram ainda aplicados o Questionário PainDetect para despistar a presença de dor neuropática e o Inventário de Sensibilização Central para identificar os principais sintomas e comorbilidades associados à sensibilização central e quantificá-los. Uma análise de regressão logística examinou a associação entre a dor crónica e as variáveis de interesse. Resultados: Dos 82 trabalhadores (53,3% mulheres), trinta (36,6%) apresentaram dor crónica. As variáveis estatisticamente associadas à dor crónica no modelo final de análise, foram: idade inferior a 55 anos (OR=4,56; IC95%=1,30-16,00) e qualidade do sono razoável ou fraca (OR=4,33; IC95%=1,38-13,57). Conclusão: Nesta amostra de trabalhadores, maioritariamente proveniente de uma população com habilitações académicas elevadas, mais de um terço apresenta dor crónica. Salienta-se a necessidade da contínua vigilância dos comportamentos de saúde na instituição.Background: Pain is a multidimensional, unpleasant experience that involves sensorial and emotional mechanisms and it is associated with a potential or real tissue injury or is described according to these damages. Workplace factors can be associated with several health problems, namely the presence of chronic pain. In turn, chronic pain may have repercussions on job performance. Therefore, it is important to study the determinants of the presence of chronic pain and its relationship with health related behaviours in a population of workers. Objective: This study aims to assess the associations between sociodemographic, health and behavioural characteristics and chronic pain in workers of a public higher education institution in Portugal. Methods: This was a qualitative, observational and cross-sectional study. A convenience sample of 82 participants was recruited within the scope of the Integrated eHealth Monitoring System for Health management in Universities project by the University of Aveiro (e.cuidHaMUsTM). The data for the description of the sample (sociodemographic, smoking and health habits, diseases and pain, eating habits, physical activity and diagnostic tests) were collected through the e.cuidHaMUs-QueST® survey. The PainDetect survey was also applied to assess the presence of neuropathic pain and the Central Sensitization Inventory to identify the main symptoms and comorbidities associated with central sensitization and to quantify them. A logistic regression analysis examined the association between chronic pain and the variables of interest. Results: Of the 82 workers (53.3% women), thirty (36.6%) had chronic pain. The variables that were statistically associated with chronic pain in the final analysis model were: age below 55 years (OR=4,56; IC95%=1,30-16,00) and reasonable or poor sleep quality (OR=4,33; IC95%=1,38-13,57). Conclusion: In this sample of workers, mostly from a population with higher academic qualifications, more than a third have chronic pain. This emphasizes the need for continuous surveillance of health related behaviours in the institution.Mestrado em Fisioterapi

Protective effect of acetic acid against ethanol-induced cell death in "Saccharomyces cerevisiae"

Dissertação de mestrado em Genética MolecularO etanol é um produto final bem conhecido da fermentação alcoólica realizada por Saccharomyces cerevisiae. Em altas concentrações, é responsável pela redução de viabilidade celular e inibição da fermentação. Além disso, durante a fermentação alguns ácidos fracos, como os ácidos acético, butírico e pirúvico, produzidos pelo metabolismo da levedura, podem acumular-se no meio de crescimento e aumentar a toxicidade do etanol, o que resulta numa maior inibição de crescimento e fermentação (Gibson, et al., 2007). No entanto, dados obtidos anteriormente mostraram que culturas celulares de S. cerevisiae tratadas simultaneamente com concentrações tóxicas de etanol e baixas concentrações de ácido acético exibiam maiores taxas de sobrevivência (medido pela contagem de UFC e por ensaios citométricos) quando comparado com células tratadas apenas com etanol. Estes resultados indicam que o ácido acético induz uma resposta celular que confere proteção contra os efeitos citotóxicos do etanol (Vieira et al., resultados não publicados). Posteriormente, foi demonstrado que a MAP cinase Hog1p e a aquogliceroporina Fps1p, envolvidas na resistência em ácido acético, não mediam este efeito protetor do ácido (Trindade, 2009). O objetivo do presente trabalho foi estudar o papel de outras vias de sinalização e os mecanismos envolvidos na proteção do ácido acético contra a morte induzida pelo etanol (13% v / v, pH 3,5). Demonstramos que esse efeito depende da dose de ácido adicionado, sendo a concentração ótima 0,1% (v / v). Ácido propiónico, à semelhança do ácido acético e contrariamente ao ácido lático e fórmico, também confere proteção. O mutante na cinase Slt2/Mpk1, conhecida por ser ativada na presença de ácido acético (Mollapour e Piper, 2006), reverte parcialmente o efeito de proteção do ácido, especialmente em relação à preservação da integridade da membrana plasmática. A presença de trealose no meio de cultura promove o efeito protetor do ácido acético. O transporte e acumulação de trealose parecem ser necessários para a proteção por ácido acético contra a perda da integridade da membrana plasmática, mas não de viabilidade celular induzida por etanol. Culturas celulares com a cadeia respiratória afectada (ρ0) não apresentam maiores taxas de viabilidade célular na presença de ácido acético, quando comparado com as mesmas culturas tratadas apenas com etanol, sugerindo que a mitocôndria pode estar envolvida no efeito protetor.Ethanol is a well-known end product of alcoholic fermentation carried out by Saccharomyces cerevisiae. At high concentrations it reduces cell viability and inhibits fermentation. During fermentation, some weak acids such as acetic, butyric and pyruvic acids, produced by yeast metabolism, may accumulate in the growth medium and enhance ethanol toxicity, which results in a higher inhibition of yeast growth and of fermentation (Gibson, et al., 2007) However, previous data obtained in our lab showed that S. cerevisiae cells exposed simultaneously to toxic concentrations of ethanol and low concentrations of acetic acid displayed higher survival (measured either by CFU or by propidium iodide staining) than cells treated only with ethanol. These results indicated that acetic acid induces a cellular response that provides protection against the cytotoxic effect of ethanol (Vieira et al., unpublished results). Subsequently, it was shown that the Mitogen-Activated Protein Kinase (MAPK) Hog1p and the aquoglyceroporin Fps1p, involved in acetic acid resistance, did not mediate this protective effect of the acid (Trindade, 2009). The aim of the present work was to study the role of other signaling pathways and the mechanisms by which acetic acid confers protection against death induced by ethanol (13% v/v, pH 3.5). We found that this effect is dose-dependent and optimal for 0.1% (v/v) of acetic acid. Propionic, but not lactic or formic acids, also confer protection from ethanol-induced cell death. Deficiency in the MAPK Slt2/Mpk1, which is activated in the presence of acetic acid (Mollapour and Piper, 2006), partially reverts the acetic acid protective effect, especially in the preservation of plasma membrane integrity. We also found that the presence of trehalose in the culture medium promoted the protective effect of acetic acid. Trehalose transport and accumulation seem to be necessary for acetic acid to protect cells from loss of the plasma membrane integrity induced by ethanol, but not of cell viability. Finally, we show that the protective effect of acetic acid was not observed in a respiratory deficient mutant (ρ0), suggesting that mitochondria may be involved in this process.Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) - Projeto PEst-C/BIA/UI4050/2011 e PTDC/AGR-ALI/102608/2008Programa FEDER através do POFC–COMPET