荜茇酰胺通过诱导口腔鳞癌细胞自噬抑制增殖

目的探讨荜茇酰胺（PPLGM）对口腔癌存活的影响及机制。方法体外培养口腔鳞状细胞癌Cal27及UM1细胞株，经不同浓度的荜茇酰胺处理后，MTT比色法检测荜茇酰胺对增殖的影响，蛋白质印迹法检测胞内微管相关蛋白轻链 3-I、3-Ⅱ （LC3-I、 LC3-Ⅱ）、Beclin1、p62、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及ribosomal S6 （S6） 的表达或活性变化；用自噬抑制剂3-Methyladenine（3-MA）或者Bafilomycin A1（BAFA1）和荜茇酰胺共处理细胞后，检测LC3-Ⅱ、p62表达和细胞活力。结果与对照组比较，荜茇酰胺显著抑制Cal27及UM1细胞株增殖能力，呈浓度及时间依赖性（P<0.05）；Western blot结果显示，不同浓度（1.0、3.0和5.0 μmol/L）荜茇酰胺处理细胞均使LC-I、LC3-Ⅱ表达水平显著高于对照组（P<0.05），而Beclin1和p62表达低于对照组（P<0.05）；荜茇酰胺处理组中p-mTOR和p-S6磷酸化水平显著低于对照组（P<0.05）；与单独荜茇酰胺处理比较，3-MA和荜茇酰胺共处理使胞内LC3-I和LC3-Ⅱ表达水平明显下降，p62表达升高（P<0.05），但BAFA1和荜茇酰胺共处理使细胞内p62表达升高（P<0.05），LC3-Ⅱ表达水平无明显改变；3-MA和B AFA1处理都能拮抗荜茇酰胺对细胞活力的抑制效应。结论荜茇酰胺通过抑制mTOR/S6通路活性诱导口腔鳞癌细胞发生自噬，进而抑制增殖

口腔鳞状细胞癌中 Tip60（KAT5）的表达及其相关性分析

【目的】探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）分化程度与Tip60（KAT5）表达相关性。【方法】选取口腔鳞状细胞共49例及癌旁正常口腔组织36例，采用免疫组化方法检测Tip60（KAT5）的表达状态。体外培养口腔鳞状细胞癌Cal27及UM1细胞株，Tip60（KAT5）抑制剂Nu9056处理Cal27及UM1细胞株后，MTT比色法检测Nu9056对Cal27及UM1细胞株增殖的影响。【结果】口腔鳞状细胞癌中Tip60（KAT5）的表达均明显高于癌旁正常组织中的表达（P=0.000）；随着组织学分化程度的降低，Tip60（KAT5）的表达增高，且其表达与组织学分化程度的降低呈明显正相关（r=0.461，P=0.001）；随着浓度及时间的增加，Nu9056对Cal27及UM1细胞株的增殖抑制率逐渐增加，呈浓度及时间依赖关系（P<0.05）。【结论】Tip60（KAT5）蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中表达上调，且与其的组织学分化程度相关，Tip60（KAT5）可作为预测口腔鳞状细胞癌进展和预后的生物学指标

疏血通抑制Bim依赖的小脑颗粒神经元凋亡

目的探究疏血通及其主要成分水蛭素对Sprague-Dawley（SD）大鼠小脑颗粒神经元（CGNs）凋亡的影响及机制。方法体外成熟7 d的CGNs分为存活对照组（用含K+浓度为25 mmol/L的培养基，即25 K组）、凋亡组（用含K+浓度为5 mmol/L的培养基，即5 K组）、以1/50、1/40、1/30、1/20、1/10浓度（稀释50、40、30、20、10倍）疏血通注射液处理组（25 K以及5 K合并疏血通处理组）以及对应不同浓度（2 U/mL、2.5 U/mL、3.34 U/mL、5 U/mL、10 U/mL）水蛭素处理组（25 K以及5 K合并水蛭素处理组），用Hoechst染色法观察并统计凋亡率。在蛋白印迹实验中，在25 K和5 K条件下用1/50、1/10浓度疏血通注射液以及对应2 U/mL、10 U/mL浓度水蛭素处理细胞，用Western blot法检测Cleaved Caspase-3、Bim、VEGF的表达水平。结果核染色结果显示，与25 K存活对照组比较，5 K凋亡组凋亡率增加；与25 K存活对照组比较，不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率无明显变化；与5 K凋亡组比较，不同浓度疏血通注射液与水蛭素处理细胞后凋亡率下降，且随着浓度的升高，凋亡率下降越明显。Western blot结果显示，与5 K凋亡组比较，不同浓度疏血通与水蛭素处理细胞后Cleaved Caspase-3、Bim蛋白表达水平均下降，VEGF蛋白表达水平升高。结论疏血通及其主要成分水蛭素通过抑制Bim表达，进而抑制线粒体依赖的小脑颗粒神经元凋亡

抑制HDAC4 减少JNK/c-Jun 活性及其依赖的神经元凋亡

【目的】研究抑制组蛋白去乙酰化酶成员HDAC4对SD大鼠小脑颗粒神经元（CGNs）凋亡的影响及机制。【方法】将原代培养6～9 d的CGN分为存活对照组（用含K+浓度为25 mmol/L的培养基，即25 K组）、凋亡组（用含K+浓度为5 mmol/L的培养基，即5 K组）和LMK-235处理组（5 K合并LMK-235处理组），在5 K条件下用不同浓度HDAC4 抑制剂LMK-235 处理细胞。在转染实验中，将CGN 分为25 K+siNC 组、5 K+siNC 组、5 K+siH?DAC4-1组和5 K+siHDAC4-2组，共转染GFP标记目的细胞。用Western blot法检测p-JNK、JNK、 p-c-Jun、 c-Jun的表达水平，用Hoechst 染色法观察并统计核固缩情况，用免疫荧光检测c-Jun 磷酸化水平。【结果】Westernblot结果显示，与5 K组比较，LMK-235处理细胞后JNK、c-Jun磷酸化水平下降。核染色结果显示，与25 K组比较，5 K组核固缩率明显增多（P < 0.05）；与5 K组比较，LMK-235处理细胞后核固缩率明显减少（P < 0.05）。与5K+siNC组比较，小分子干扰HDAC4后，HDAC4的表达下调，c-Jun的磷酸化水平降低，CGNs核固缩率明显减少（P < 0.05）。【结论】抑制HDAC4通过下调JNK/c-Jun活性使神经元核固缩率减少，从而抑制神经元凋亡

通过抑制ATM上调Bim促进小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究抑制共济失调毛细血管扩张突变（ATM）蛋白对SD大鼠小脑颗粒神经元（CGN）凋亡的影响及机制。【方法】将原代培养7~8d的CGN分为25K组、5K组和ATM抑制组。分别应用含有25和5mmol/LKCl的培养基处理25K组和5K组，建立体外神经元存活和凋亡模型。在25K神经元存活模型中，应用ATM抑制剂KU-55933（10μmol/L，ATM抑制组）、KU-55933联合MithramycinA（1μmol/L，MMA组）或ChromomycinA3（0.3μmol/L，CMA3组）处理，用WesternBlot方法检测p-ATM、ATM、Bim、Caspase3的表达水平，用Hoechst染色法观察并统计核固缩情况。【结果】WesternBlot结果显示，与25K组比较，5K组和ATM抑制组的Bim、Caspase3蛋白表达均上调（P<0.05）。核染色结果显示，与25K组比较，5K组和ATM抑制组核固缩率均明显增多（P<0.05）。与ATM抑制组比较，MMA组和CMA3组中Bim表达、Caspase3活性及核固缩率均明显减少。【结论】抑制ATM上调Bim活性，促进小脑颗粒神经元凋亡

固原县农林牧生产结构与经济效益研究

本研究以农业生态理论为依据，用系统工程方法进行优化结构总体设计，调整农、林、牧用地比例为:农业占23.4％，林业占20％，草地占56.6％。从而基本解决了&ldquo;三料&rdquo;俱缺的问题，人均草质燃料900公斤，人均有粮518公斤，有油料53公斤，纯收入人均355元，比1981年增加7.5倍。实验所在的上黄村初步建成本县黄土丘陵区农林牧综合发展的样板。同时在学术上提出了&ldquo;土地综合利用配置的镶嵌模式&rdquo;、&ldquo;优化建模中的潜力设计&rdquo;、&ldquo;草种适宜性选择&rdquo;、&ldquo;立地条件划分及适地适树，造林技术&rdquo;等新的概念与方法，具有显著的经济效益和社会效益，已在200平方公里的河川乡推广。本项目的综合、单项研究选题正确，技术资料齐全，数据充实准确。对投资效果、防护效益、减少土壤侵蚀量、农林牧优化结构等方面作了定性、定量、定位的科学分析和研究，其综合性、科学性、实用性强，方法先进，不仅为固原黄土丘陵区综合治理提供了科学依据，而且达到国内先进水平，在黄土丘陵区居领先地位，在国际土壤保持会议上受到重视

组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过下调MCM2-7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）抑制神经胶质瘤细胞增殖的机制。方法体外培养U251和H4细胞，用组蛋白去乙酰化酶抑制剂：包括帕比司他（LBH589）和M344、伏立诺他（SAHA）处理后，MTT比色法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期进程改变，Western blotting和RT-qPCR法分别检测minichromosome maintenance （MCM）蛋白家族成员MCM2、MCM3、MCM4、MCM5、MCM6和MCM7的mRNA和蛋白表达水平。用组蛋白去乙酰化酶抑制剂：包括帕比司他和曲古霉素（TSA）处理U251细胞后，BrdU掺入实验检测细胞增殖和DNA复制能力。用MCM抑制剂环丙沙星（CPX）处理U251和H4细胞，MTT法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞周期进程改变。结果与对照组相比，HDACIs降低了U251和H4活细胞数量（P&lt;0.05）；HDACIs组BrdU的掺入率降低（P&lt;0.05）；HDACIs减少细胞周期S期的比率（P&lt;0.05）；Western blotting和qPCR结果显示，HDACIs降低MCM2-7 mRNA和蛋白表达水平（P&lt;0.05）；与对照组相比，CPX降低了U251和H4活细胞数量（P&lt;0.05），减少细胞周期S期的比率（P&lt;0.05）。结论HDACIs通过下调MCM2-7表达抑制神经胶质瘤细胞增殖