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    Estudo da melhoria da lavação de rolhas de cortiça

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    Cork is the outer bark extracted from the cork oak tree (Quercus suber L.) and is widely used in different materials due to its unique physical properties. Wine stoppers occupy the largest cork market segment with about 72%, where the natural cork stoppers have a distinct position with 56% of the total cork stoppers production. The main challenges in the area consist in finding ways to improve the performance of stoppers in winemaking applications and adjacent food areas. A better understanding of the fundamental aspects of cork chemical composition and structural features of its main components within the context of their behavior in cork processing is another research point to consider. Reactive washing (RW) is the main industrial process responsible for the disinfection, appearance and functional performance of stoppers. The main objective of this thesis, carried out at the University of Aveiro in collaboration with the Amorim Cork, S.A., was to study reactive washing (RW) process of natural cork stoppers in order to achieve their better appearance, color uniformity and technical performance. Special attention was given to the structural characteristics of the macromolecular components of natural cork stoppers and their surface response to RW. Accordingly, the isolated cork components were evaluated by wet chemistry methods, GC-MS, FTIR and 1D/2DNMR spectroscopy and X-ray scattering diffraction. The natural cork stopper morphology was studied by SEM and the surface chemistry by UV-vis DR, FTIR-ATR and confocal Raman spectroscopy. Surface properties were assessed by 3D optical profilometry and contact angle measurements. The optical properties were evaluated by ISO brightness and CIElab color parameters. The refinement of the chemical composition and structural characteristics of the main macromolecular components of natural cork stoppers (suberin, lignin, cellulose and xylan) were carried out and related to their surface properties. The anisotropy in the surface properties and the roughness of the top and lateral of natural cork stoppers was explained by the difference in the exposure of the phellogen cell wall layers and as a result of mechanical damage that occurred during the stopper production. The differences in the surface chemical composition and topology explain the higher polarity index of the top surface that predetermines it better wettability with water and hydroalcoholic solutions than the lateral surface of the stopper. . Reactive washing (RW), being an aggressive treatment with hydrogen peroxide under strong alkaline conditions, impairs the surface properties of cork stoppers regarding their wettability, which is due to the significant degradation of suberin on the cork surface. The surface degradation in RW deteriorates further processing of cork stoppers and their functional performance. The optimization of the conventional reactive washing with H2O2, the implementation of ozone as a bleaching agent for the natural cork stoppers and the combination of ozone treatment and optimized conventional reactive washing with H2O2 were proposed to improve the economic feasibility and the quality performance of cork stoppers. The optimization of the conventional reactive washing and the ozone treatment were accomplished using a three fractional factorial design and response surface methodology (RSM). The process variables conditions that maximize the effect of ozone on the stopper were chosen using statistical methods (ANOVA, Tukey test, and paired samples T-test). The results revealed that two variables of conventional RW (H2O2 and NaOH concentrations) have a greater effect on the response than the others (e.g. reaction time and volume of washing water). By applying numerical model optimization with an ISO brightness target (ca. 34 %ISO), it was possible to achieve a significant improvement in terms of reagent savings, with a reduction of 37% for H2O2, and 33% for NaOH and washing water, respectively. The introduction of ozone as RW reagent allowed the increase of ca. 5% ISO brightness of natural cork stoppers within 15 min with minimal degradation of their surface. The combination of a first RW stage with ozone and a second stage of optimized conventional reactive washing with H2O2 allowed the further reduction of hydrogen peroxide consumption, oxidation time and washing water volume, while maintaining the final natural stopper brightness and functional performance. This optimized RW processes (with and without ozone treatment) revealed better preservation of the stopper surface from suberin degradation with controlled wettability and improved performance towards functional coating with paraffin and silicone. At last, the basic quality parameters (pH, humidity, residual content of hydrogen peroxide, dust content, color migration, capillarity progression and absorption of wine by the stoppers) commonly used in the industry were evaluated for the cork stoppers from the different reactive washing processes. Similar results were obtained when comparing these quality parameters of the optimized RW with the conventional one, with lower consumption of reagents, less process time and better functional performance of stoppers.A corti√ßa √© a casca extra√≠da do sobreiro (Quercus suber L.), sendo vastamente utilizada em diversos materiais devido √†s suas propriedades f√≠sicas √ļnicas. As rolhas para a ind√ļstria vin√≠cola ocupam o maior segmento do mercado da corti√ßa com cerca de 72%, onde as rolhas naturais ocupam uma posi√ß√£o de destaque com 56% da produ√ß√£o total de rolhas. Os principais desafios nesta √°rea consistem em encontrar formas de melhorar o desempenho das rolhas em aplica√ß√Ķes relacionadas com a vinifica√ß√£o e √°reas alimentares adjacentes. O conhecimento mais aprofundado dos aspetos fundamentais da composi√ß√£o qu√≠mica da corti√ßa e das caracter√≠sticas estruturais dos seus principais componentes em termos do seu comportamento na transforma√ß√£o da corti√ßa √© outro ponto de investiga√ß√£o. A lava√ß√£o √© o principal processo industrial respons√°vel pela desinfec√ß√£o, apar√™ncia visual e desempenho funcional das rolhas. O principal objetivo desta disserta√ß√£o, realizada na Universidade de Aveiro em colabora√ß√£o com a Amorim Cork, S.A., foi estudar o processo de lava√ß√£o de rolhas de corti√ßa natural de forma a obter o melhor aspeto visual, uniformidade de cor e desempenho t√©cnico. Foi dada especial aten√ß√£o √†s caracter√≠sticas estruturais dos componentes macromoleculares das rolhas naturais e √† sua resposta superficial em rela√ß√£o √† lava√ß√£o. Assim, os componentes isolados da corti√ßa foram avaliados por m√©todos de qu√≠mica h√ļmida, espectroscopia GC-MS, FTIR e 1D/2D RMN e difrac√ß√£o por espalhamento de raios-X. A morfologia da rolha natural foi estudada por SEM e a qu√≠mica de superf√≠cie por UV-vis DR, FTIR-ATR e espectroscopia Raman confocal. As propriedades da superf√≠cie foram avaliadas por profilometria √≥ptica 3D e medi√ß√£o de √Ęngulo de contato. As propriedades √≥pticas foram avaliadas pela brancura ISO e pelos par√Ęmetros de cor CIElab. Procedeu-se ao estudo da composi√ß√£o qu√≠mica e das caracter√≠sticas estruturais dos principais componentes macromoleculares das rolhas naturais (suberina, lenhina, celulose e xilana) e relacionou-se com as suas propriedades superficiais. A anisotropia nas propriedades superficiais e a rugosidade do topo e lateral das rolhas naturais de corti√ßa foi explicada pela diferen√ßa de exposi√ß√£o das camadas da parede celular do felog√©nio e pelos danos mec√Ęnicos ocorridos durante a produ√ß√£o da rolha. As diferen√ßas na composi√ß√£o qu√≠mica da superf√≠cie e topologia explicam o maior √≠ndice de polaridade do topo que predetermina melhor molhabilidade com √°gua e solu√ß√Ķes hidroalco√≥licas do que para a lateral da rolha. A lava√ß√£o, sendo um tratamento agressivo com per√≥xido de hidrog√©nio em condi√ß√Ķes de forte alcalinidade, prejudica as propriedades superficiais das rolhas no que se refere √† molhabilidade, que se deve √† significativa degrada√ß√£o da suberina na superf√≠cie da corti√ßa. A degrada√ß√£o da superf√≠cie durante a lava√ß√£o deteriora o processamento posterior das rolhas de corti√ßa e o seu desempenho funcional. A otimiza√ß√£o da lava√ß√£o convencional com H2O2, a implementa√ß√£o de ozono como agente branqueador de rolhas naturais e a combina√ß√£o do ozono com a otimiza√ß√£o da lava√ß√£o convencional com H2O2 foram propostas com o intuito de melhorar a viabilidade econ√≥mica e o desempenho das rolhas de corti√ßa. A otimiza√ß√£o da lava√ß√£o convencional e a implementa√ß√£o do ozono foram realizadas utilizando um desenho de experi√™ncias fatorial fracionado e metodologia de resposta de superf√≠cie (MRS). As condi√ß√Ķes das vari√°veis de processo que maximizam o efeito do ozono na rolha foram escolhidas usando m√©todos estat√≠sticos (ANOVA, teste de Tukey e teste T de amostras emparelhadas). Os resultados revelaram que duas vari√°veis da lava√ß√£o convencional (concentra√ß√Ķes de H2O2 e NaOH) t√™m um efeito superior na resposta do que as outras (por exemplo, tempo de oxida√ß√£o e volume de √°gua de lavagem). Ao aplicar a otimiza√ß√£o do modelo num√©rico com um objetivo de brancura ISO (aprox. 34% ISO), foi poss√≠vel obter uma melhoria significativa em termos de economia de reagente, com uma redu√ß√£o de 37% para H2O2 e 33% para NaOH e √°gua de lavagem, respetivamente. A introdu√ß√£o do ozono como reagente na lava√ß√£o permitiu o aumento da brancura ISO nas rolhas naturais em cerca 5%, em apenas 15 min com uma degrada√ß√£o m√≠nima da superf√≠cie. A combina√ß√£o de um primeiro est√°gio de lava√ß√£o com ozono e um segundo est√°gio de lava√ß√£o convencional otimizada com H2O2 permitiu a redu√ß√£o adicional do consumo de per√≥xido de hidrog√©nio, tempo de oxida√ß√£o e volume de √°gua de lavagem, mantendo a brancura ISO e desempenho funcional do produto final. Estes processos de lava√ß√£o otimizados (com e sem tratamento de ozono) revelaram uma melhor preserva√ß√£o da superf√≠cie da rolha relacionada com uma menor degrada√ß√£o da suberina, obtendo uma molhabilidade controlada e um melhor desempenho da rolha em rela√ß√£o ao revestimento funcional com parafina e silicone. Por fim, foram avaliados os par√Ęmetros b√°sicos de qualidade aplicadas na ind√ļstria (pH, humidade, teor residual de per√≥xido de hidrog√©nio, teor de p√≥, migra√ß√£o de cor, progress√£o da capilaridade e absor√ß√£o do vinho pelas rolhas) em rolhas provenientes dos diferentes processos de lava√ß√£o. Ao comparar os resultados dos par√Ęmetros de qualidade da lava√ß√£o otimizada com a lava√ß√£o convencional, verificaram-se resultados semelhantes, com um menor consumo de reagentes, menor tempo de processo e melhor desempenho funcional das rolhas.Programa Doutoral em Engenharia Qu√≠mic

    Cardiomiopatia Hipertrófica felina: a correlação entre a sintomatologia e os achados ecocardiograficos

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    A presente disserta√ß√£o est√° dividida em dois cap√≠tulos principais. No primeiro encontra-se descrito uma revis√£o bibliogr√°fica da doen√ßa cardiomiopatia hipertr√≥fica felina, no segundo o estudo desenvolvido pela estagi√°ria. A aluna, durante o est√°gio curricular, recolheu 15 casos cl√≠nicos que atrav√©s de uma an√°lise de frequ√™ncias absolutas e relativas, da correla√ß√£o de pearson e do teste anova, permitiu averiguar a correla√ß√£o existente entre os sinais cl√≠nicos e os achados ecocardiogr√°ficos, assim como o paralelismo entre as informa√ß√Ķes recolhidas e a literatura. O destaque da presente disserta√ß√£o consistiu na diverg√™ncia com os dados bibliogr√°ficos, nomeadamente, no que confere √† preval√™ncia racial e √† presen√ßa de CMH obstrutiva em animais assintom√°ticos. No que se refere as vari√°veis, foi not√≥ria a correla√ß√£o entre os sinais cl√≠nicos mais graves e os par√Ęmetros ecocardiogr√°ficos mais severos; Abstract: Feline hypertrophic cardiomyopathy - The present dissertation is divided into two main chapters. The first describes a bibliographical review of the disease feline hypertrophic cardiomyopathy, the second the study developed by the intern. The student, during the curricular internship, collected 15 clinical cases that, through an analysis of absolute and relative frequencies, the Pearson correlation and the Anova test, allowed to verify the correlation between the clinical signs and the echocardiographic findings and the parallelism between the information collected and the literature. The highlights of the present work was the incompatibility between the available literature and the data regarding (racial prevalence, echocardiographic findings, and presence of obstructive hypertrophic cardiomyopathy), as well as the correlation between the most severe clinical signs and the most severe echocardiographic parameters

    Otimiza√ß√£o do sistema lipossomal DODAB:MO: desenvolvimento de uma vacina contra infe√ß√Ķes sist√©micas causadas pela Candida albicans

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    Disserta√ß√£o de mestrado em Biof√≠sica e BionanossistemasLiposomes have been the hallmark of lipid-based nanoparticles for site-specific delivery of drugs and pharmaceuticals. Previous studies have indicated that cationic liposomes are efficient liposomal delivery systems for vaccine antigens compared with other liposome systems. Indeed, it has been previously showed that cationic liposomes prepared with DODAB:MO (1:2) loaded with Candida albicans cell wall surface proteins are promising nanovehicles for vaccine strategy. C. albicans is an opportunistic yeast responsible for life threatening infections, mainly in immunocompromise patients. The use of a specific C. albicans one cell wall protein Cht3p, as an antigen could lead to the development of a more reproducible and stable formulation against these infections. So, the main objective of this work is to encapsulate this protein in the DODAB:MO (1:2) liposomes to protect the antigen and enhance its immunogenicity. In this work, the incorporation of recombinant Cht3p within the DODAB:MO (1:2) liposomes in different protein:lipid ratios (P/L) with two different encapsulation methods, incubation and hydration, was studied. These vesicles were evaluated in terms of size and surface charge of the liposomes, encapsulation efficiency, stability and in vitro cytotoxicity studies. The physicochemical properties of these liposomal nanoparticles (LNPs) were assessed at different P/L ratios in a range between 0.056 and 3.76. LNPs with P/L ratios higher than 0.11 destabilized and aggregate completely. So, the formulations with P/L ratios below 0.11 prepared by both encapsulation methods were studied, particularly ratios of P/L of 0.0056 and 0.0111. Liposomes prepared by the incubation method exhibited positively charged surfaces with ő∂-potential values around +40 mV and mean sizes around 200 nm. While liposomes prepared by the hydration method were highly polydisperse (PDI values 0.6 to 0.9) with ő∂-potentials values between +53 mV and +79 mV, and particle sizes with mean values between 708 nm and 1483 nm. No significant differences were observed in the encapsulation efficiency assays between the formulations prepared by both encapsulation methods, with values around 68 %. No clear differences were observed by extrusion procedure of LNPs prepared by the incubation method, but liposomes with Cht3p loaded by the hydration method showed a marked decrease in the particle size and a uniform size distribution. However, after two weeks of liposomal preparation, nanoparticles prepared by the hydration method started to destabilize. The long-term stability of the formulations was also tested by the lyophilization of the LNPs but showed the complete disruption of the all formulations. The in vitro cytotoxicity tests demonstrated that the Cht3p alone was cytotoxic to RAW 264.7 macrophage like cell line and when the Cht3p was encapsulated inside the liposomes the toxicity of the protein decreased. In conclusion, these experimental results indicate that the best encapsulation method for this protein is the incubation methodology. LNPs prepared by the incubation method with P/L ratios of 0.0056 and 0.011, using a final lipid concentration of 1 mM and 2 mM and 5 őľg/mL of Cht3p, were more stable, presenting a particle size range between 88 nm and 173 nm, a monodisperse population (PDI values between 0.1 and 0.3) and ő∂-potential values between +30 mV and +52 mV. These characteristics combined with their low cytotoxicity, makes this LNPs suitable to be used to be excellent candidates for use as delivery systems in an immunization strategy.Os lipossomas t√™m sido um marco importante de nanopart√≠culas com base lip√≠dica para a entrega espec√≠fica de compostos e f√°rmacos. Estudos anteriores demonstraram que os lipossomas cati√≥nicos s√£o sistemas de entrega de antig√©nios eficazes no desenvolvimento de vacinas, comparando com outros sistemas lipossomais. De facto, prote√≠nas da superf√≠cie da parede celular da Candida albicans encapsuladas em lipossomas cati√≥nicos de DODAB:MO (1:2) apresentaram um grande potencial para o desenvolvimento de uma nova vacina. C. albicans √© uma levedura oportunista respons√°vel por infe√ß√Ķes potencialmente fatais, principalmente em pacientes imunocomprometidos. O uso de um ant√≠geno espec√≠fico da parede celular de C. albicans, a Cht3p, identificada anteriormente, poder√° tornar a formula√ß√£o mais reprodut√≠vel e est√°vel, levando ao desenvolvimento de uma nova formula√ß√£o contra estas infec√ß√Ķes. Assim, o objetivo principal deste trabalho √© encapsular este ant√≠geno nos lipossomas DODAB:MO (1:2) para o proteger e aumentar o seu efeito imunog√©nico. Nesta investiga√ß√£o, estudou-se a incorpora√ß√£o da Cht3p recombinante com os lipossomas DODAB:MO (1:2) em diferentes r√°cios de prote√≠na/l√≠pido (P/L), preparados por dois m√©todos de encapsula√ß√£o diferentes, o de incuba√ß√£o e o de hidrata√ß√£o. Estas ves√≠culas foram avaliadas em termos de tamanho e carga superficial dos lipossomas, efici√™ncia de encapsula√ß√£o, estabilidade e citotoxicidade in vitro. As propriedades f√≠sico-qu√≠micas destas nanopart√≠culas lipossomais (LNPs) foram avaliadas em diferentes r√°cios P/L que variaram entre 0,056 e 3,76. Os resultados indicaram que LNPs r√°cios superiores a 0,11 desestabilizaram e agregaram completamente. Assim, as formula√ß√Ķes com r√°cios abaixo de 0,11 preparadas por ambos os m√©todos de encapsula√ß√£o foram escolhidos, mais especificamente as LNPs com r√°cios P/L de 0,0056 e 0,0111. Os lipossomas preparados pelo m√©todo de incuba√ß√£o apresentaram superf√≠cies carregadas positivamente com valores de potencial zeta de cerca de +40 mV e tamanhos m√©dios das part√≠culas com cerca de 200 nm. Segundo o m√©todo de hidrata√ß√£o, os LNPs apresentaram popula√ß√£o mais heterog√©nea (PDI de 0,6 a 0,9), com valores de potenciais zeta entre +53 mV e +79 mV, e tamanhos das part√≠culas entre 708 nm e 1483 nm. N√£o foram observadas diferen√ßas significativas nos ensaios de efici√™ncia de encapsula√ß√£o entre as formula√ß√Ķes preparadas por ambos os m√©todos de encapsula√ß√£o, com valores em torno dos 68 %. Depois do processo de extrus√£o, n√£o foram observadas altera√ß√Ķes nas LNPs preparadas pelo m√©todo de incuba√ß√£o. Contudo, nas LNPs preparadas pelo m√©todo de hidrata√ß√£o, observou-se uma diminui√ß√£o acentuada no tamanho das part√≠culas e uma distribui√ß√£o uniforme do tamanho. No entanto, ap√≥s duas semanas da prepara√ß√£o lipossomal, as LNPs preparadas pelo m√©todo de hidrata√ß√£o come√ßaram a desestabilizar. A estabilidade a longo prazo das LNPs foi tamb√©m testada pelo processo de liofiliza√ß√£o, verificando-se uma instabilidade de todas as formula√ß√Ķes. Os testes de citotoxicidade demonstraram que a Cht3p administrada sozinha era mais citot√≥xica para a linha celular de macr√≥fagos RAW 264.7 do que quando encapsulada no interior dos lipossomas. Em conclus√£o, estes resultados experimentais indicaram que o melhor m√©todo de encapsula√ß√£o para a Cht3p √© o de incuba√ß√£o. Neste m√©todo, as LNPs com r√°cios P/L de 0,0056 e 0,011, usando as concentra√ß√Ķes lip√≠dicas de 1 mM e 2 mM e com 5 őľg/mL de Cht3p, apresentaram uma maior estabilidade, com um tamanho m√©dio das part√≠culas entre 88 nm e 173 nm, com uma popula√ß√£o monodispersa (PDI de 0,1 a 0,3) e valores de potencial zeta entre +30 mV e +52 mV. Esta combina√ß√£o de caracter√≠sticas, juntamente com uma menor citotoxicidade fazem destas LNPs excelentes candidatos para o uso de sistemas de entrega de antig√©nio numa estrat√©gia de imuniza√ß√£o

    Fabrico de uma plataforma de microcápsulas de levedura para regeneração do tecido ósseo

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    Bone is considered a mechanical support system of the human body, which imparts protection for internal organs, being also a reservoir of minerals. During life, bone tissue remains in constant remodelling and has the capacity to regenerate small lesions. Nevertheless, in situations of critical bone fractures and/or chronic diseases, endogenous bone regeneration is limited and generally results in non-union of the fracture fragments and in loss of tissue function. Bearing in mind that the improvement in life-expectancy is accompanied with a higher incidence of bone defects, it is urgent the development of biomaterials, which can deliver proosteogenic drugs or be able to instruct the differentiation of adult stem cells into progenitor bone cells. Given this, hydrogels have been increasingly explored as a tridimensional (3D) platform for support and delivery of stem cells to bone tissues, due to their permeability and similarities to the extracellular matrix (ECM). However, as a result of their high permeability, hydrogels have a low capacity for drug delivery. Yeast microcapsules (YMCAPs) have been mentioned as alternatives with the potential to encapsulate, transport and deliver therapeutic agents in a specific and localized manner. These microcapsules can be obtained through the reuse of spent yeasts discarded as a by-product of brewing industry. In this dissertation, it was aimed to obtain YMCAPs from the brewer‚Äôs spent yeast Saccharomyces pastorianus and promote their inclusion into a 3D hydrogel, through a photocrosslinking process. For that, the yeast‚Äôs cell wall was isolated through thermal autolysis, obtaining YMCAP_Aut (diameter: 3 - 7.5 ¬Ķm; zeta potential: -13.9 mV) composed of 38 % of proteins and 41 % of carbohydrates (essentially, mannans and ő≤-glucans). The ő≤-glucans present in YMCAPs_Aut are constituted by glucose residues with (1‚Üí4), (1‚Üí3) and (1‚Üí6) linkages in a proportion of 50.2, 13.5 and 2.5 mol %, respectively. The (1‚Üí4) linkages are divided in (őĪ1‚Üí4) and (ő≤1‚Üí4). The mannans present in YMCAPs_Aut are constituted by mannose residues with (1‚Üí2), (1‚Üí3) and (1‚Üí6) linkages in a proportion of 3, 1.4 and 0.2 mol %, respectively. Through alkaline extraction using 4M KOH, the mannoproteins were solubilized and ő≤-glucans were exposed in the microcapsule surface, obtaining YMCAPs_4M (diameter: 3 - 7.5 ¬Ķm; zeta potential: 0.25 mV) composed of 34 % proteins and 54 % carbohydrates (essentially, ő≤-glucans). The ő≤-glucans present in YMCAPs_4M are constituted by glucose residues with (1‚Üí4), (1‚Üí3) and (1‚Üí6) linkages in a proportion of 52.8, 20.0 and 2.7 mol %, respectively. The (1‚Üí4) linkages are also divided in (őĪ1‚Üí4) and (ő≤1‚Üí4). YMCAPs were subsequently used for the development of a photocrosslinkable multi-YMCAPs platform. For this, YMCAPs were chemically modified with methacrylate groups or with norbornene groups. With a chemically modified surface, YMCAPs were covalently crosslinked to methacrylated gelatin (GelMA), forming a 3D multi-YMCAPs/GelMA platform with YMCAPs acting as structural/functional units, and with gelatin acting as a 3D structure for cell adhesion. Glycosidic analysis and FTIR and NMR spectroscopic confirmed the successful synthesis of functionalized YMCAPs with the different chemical groups. After, the fabricated hybrid hydrogel was applied to human adipose stem cells (hASCs) encapsulation. In vitro viability studies revealed the biocompatibility of YMCAPs when directly administered or included within the 3D matrix containing stem cells. Moreover, the potential of this hybrid hydrogel/YMCAPs platform to act as drug delivery system was explored. YMCAPs demonstrated to be an effective vehicle for hydrophobic drugs encapsulation, as observed with the use of a fluorescent molecule (e.g., Nile red) and with the use of carvacrol, antiosteoclastogenic monoterpenoid, as a medium of encapsulation of dexamethasone. Overall, the results highlight the possible use of these hybrid platform as a delivery system of stem cells and bioinstructive molecules for bone regeneration application.O osso √© o sistema de suporte mec√Ęnico do corpo humano, constituindo tamb√©m uma prote√ß√£o dos √≥rg√£os internos e um reservat√≥rio de minerais. Durante a vida, o tecido √≥sseo permanece em constante remodela√ß√£o e tem capacidade de regenerar pequenas les√Ķes. No entanto, em situa√ß√Ķes de fraturas √≥sseas cr√≠ticas e/ou doen√ßas cr√≥nicas, a regenera√ß√£o √≥ssea end√≥gena √© bastante limitada, resultando geralmente na n√£o-uni√£o dos fragmentos √≥sseos, e na perda da fun√ß√£o tecidular. Tendo em conta que o aumento da esperan√ßa m√©dia de vida, √© acompanhado por um aumento da incid√™ncia de defeitos √≥sseos, torna-se urgente o desenvolvimento de biomateriais que possam entregar f√°rmacos pr√≥-osteog√©nicos, ou que tenham a capacidade de instruir a diferencia√ß√£o de c√©lulas estaminais adultas em c√©lulas progenitoras do osso. Neste sentido, os hidrog√©is t√™m sido cada vez mais explorados como plataforma tri-dimensional (3D) para suporte e entrega de c√©lulas estaminais nos tecidos √≥sseos, devido √† sua permeabilidade e semelhan√ßas com a matriz extracelular (ECM). No entanto, devido √† sua elevada permeabilidade, os hidrog√©is apresentam uma fraca capacidade para entrega de f√°rmacos. As microc√°psulas de leveduras (YMCAPs) t√™m sido mencionadas como alternativas com potencial para encapsular, transportar e entregar agentes terap√™uticos de uma forma espec√≠fica e localizada. Estas microc√°psulas podem ser obtidas atrav√©s da reutiliza√ß√£o das leveduras descartadas pela ind√ļstria cervejeira. Nesta disserta√ß√£o, pretende-se obter YMCAPs a partir da levedura excedent√°ria Saccharomyces pastorianus e promover a sua inclus√£o num hidrogel 3D atrav√©s de um processo de fotoreticula√ß√£o. Para isso, a parede celular da levedura foi isolada por aut√≥lise t√©rmica, obtendo-se YMCAPs_Aut (di√Ęmetro: 3 - 7.5 ¬Ķm; potencial zeta: -13.9 mV) compostas por 38 % de prote√≠nas e 41 % de carboidratos (essencialmente mananas e ő≤-glucanas). Nas YMCAPs_Aut, as ő≤-glucanas s√£o constitu√≠das por res√≠duos de glucose em liga√ß√£o (1‚Üí4), (1‚Üí3) e (1‚Üí6), na propor√ß√£o de 50.2, 13.5 e 2.5 mol %, respetivamente. As liga√ß√Ķes (1‚Üí4) est√£o divididas em (őĪ1‚Üí4) e (ő≤1‚Üí4). As mananas presentes nas YMCAPs_Aut s√£o constitu√≠das por res√≠duos de manose em liga√ß√£o (1‚Üí2), (1‚Üí3) e (1‚Üí6), na propor√ß√£o de 3, 1.4 e 0.2 mol %, respetivamente. Por extra√ß√£o alcalina com KOH 4M, as manoprote√≠nas foram solubilizadas, expondo as ő≤-glucanas na superf√≠cie da microc√°psula, obtendo-se YMCAPs_4M (di√Ęmetro: 3 - 7.5 ¬Ķm; potencial zeta: 0.25 mV) compostas por 34 % de prote√≠nas e 54 % de carboidratos (essencialmente ő≤-glucanas). Nas YMCAPs_4M, as ő≤-glucanas s√£o constitu√≠das por res√≠duos de glucose em liga√ß√£o (1‚Üí4), (1‚Üí3) e (1‚Üí6), na propor√ß√£o de 52.8, 20.0 e 2.7 mol %, respetivamente. As liga√ß√Ķes (1‚Üí4) est√£o tamb√©m divididas em (őĪ1‚Üí4) e (ő≤1‚Üí4). As YMCAPs foram posteriormente utilizadas para o desenvolvimento de uma plataforma fotoreticul√°vel. Para isso, as YMCAPs foram modificadas quimicamente com grupos metacrilato ou com grupos norborneno. Com uma superf√≠cie quimicamente modificada, as YMCAPs foram covalentemente reticuladas com gelatina-metacrilada (GelMA), formando uma plataforma 3D multi-YMCAPs/GelMA, onde as YMCAPs atuam como unidades estruturais/funcionais, e a gelatina como estrutura 3D para ades√£o celular. A an√°lise das liga√ß√Ķes glicos√≠dicas e espetroscopia de FTIR e RMN confirmou a s√≠ntese de YMCAPs funcionalizadas com os diferentes grupos qu√≠micos. O hidrogel h√≠brido fabricado foi posteriormente aplicado para a encapsula√ß√£o de c√©lulas estaminais humanas derivadas do tecido adiposo (hASCs). Estudos de viabilidade celular in vitro revelaram a biocompatibilidade das YMCAPs quando administradas diretamente ou inclu√≠das dentro da matriz 3D contendo c√©lulas estaminais. Adicionalmente, o potencial desta plataforma h√≠brida hidrogel/c√°psulas funcionar como um sistema de liberta√ß√£o de f√°rmacos foi explorado. As YMCAPs demonstraram ser um ve√≠culo eficaz para a encapsula√ß√£o de f√°rmacos hidrof√≥bicos, conforme observado utilizando uma mol√©cula fluorescente (i.e., vermelho de nilo) e com o uso de carvacrol, monoterpen√≥ide antiosteoclastog√©nico, como meio de encapsula√ß√£o da dexametasona. Os resultados obtidos evidenciam a poss√≠vel utiliza√ß√£o destas plataformas h√≠bridas como um sistema de entrega de c√©lulas estaminais e mol√©culas bioinstrutivas para aplica√ß√£o na regenera√ß√£o √≥ssea.Mestrado em Materiais e Dispositivos Biom√©dico

    Significance of mycobacterial peptidoglycan amidation in host immune recognition and antibiotic resistance

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    Tese de mestrado em Biologia Molecular e Gen√©tica, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ci√™ncias, 2020A tuberculose √© uma das 10 principais causas de morte a n√≠vel mundial e √© causada pela bact√©ria intracelular Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis). De acordo com a Organiza√ß√£o Mundial de Sa√ļde, em 2019, aproximadamente 1,5 milh√Ķes de pessoas morreram com tuberculose e estima-se que, atualmente, um quarto da popula√ß√£o mundial (cerca de 1,9 mil milh√Ķes de pessoas) esteja infetada com tuberculose latente. O aparecimento de estirpes multi e extensivamente resistentes √© um problema cada vez mais grave e reflete a necessidade urgente de desenvolver novos medicamentos e estrat√©gias que sejam eficazes no tratamento desta doen√ßa. Uma caracter√≠stica t√≠pica de M. tuberculosis √© a sua complexa parede celular, normalmente conhecida como complexo micolil-arabino-galactano-peptidoglicano (mAGP). Tal como o nome indica, o complexo mAGP √© principalmente constitu√≠do por uma camada de √°cidos mic√≥licos de cadeia longa, um polissac√°rido de arabinogalactano altamente ramificado e uma camada de peptidoglicano (PG). Todos estes componentes contribuem para a resist√™ncia natural destas bact√©rias a muitos antibi√≥ticos e para a modula√ß√£o da resposta imune do hospedeiro. O PG √© altamente respons√°vel pela conserva√ß√£o da integridade celular e os seus processos de bioss√≠ntese e reciclagem envolvem v√°rios enzimas essenciais para a viabilidade das micobact√©rias, sendo considerados, portanto, como potenciais alvos terap√™uticos. O PG micobacteriano √© caracterizado por diversas modifica√ß√Ķes qu√≠micas, tais como a amida√ß√£o dos res√≠duos de D-iso-glutamato (D-iGlu) e √°cido meso-diaminopim√©lico (mDAP). Recentemente, foi descoberto que estas rea√ß√Ķes s√£o catalisadas pelo complexo enzim√°tico MurT/GatD e pelo enzima AsnB, respetivamente. Foi demonstrado que a amida√ß√£o do D-iGlu tem influ√™ncia na suscetibilidade a antibi√≥ticos, especialmente a antibi√≥ticos ő≤ lact√Ęmicos, e no cross-linking, enquanto que a amida√ß√£o do mDAP parece influenciar a modula√ß√£o da hidr√≥lise do PG. Al√©m disso, a presen√ßa destas duas modifica√ß√Ķes tem sido associada a uma redu√ß√£o da ativa√ß√£o da prote√≠na recetora nucleotide-binding oligomerization domain (NOD) 1 do hospedeiro, indicando um poss√≠vel papel da amida√ß√£o do PG no reconhecimento pelo sistema imune do mesmo. Para compreender o papel da amida√ß√£o do PG em micobact√©rias tanto na resist√™ncia a antibi√≥ticos, como no reconhecimento imune do hospedeiro, o sistema clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) de interfer√™ncia (CRISPRi) foi utilizado para construir mutantes knockdown dos genes murT, gatD e asnB (mutantes murT- , gatD e asnB- , respetivamente) em Mycobacterium smegmatis mc2 155 (M. smegmatis), um dos modelos mais utilizados no estudo da tuberculose. O CRISPRi baseia-se na express√£o indut√≠vel de uma prote√≠na endonuclease Cas9 enzimaticamente inativa (dCas9), em conjunto com um pequeno RNA guia (sgRNA), que pode ser desenhado para ter como alvo uma sequ√™ncia de DNA espec√≠fica. Recentemente, este sistema foi desenvolvido e otimizado para micobact√©rias, sendo simples, pr√°tico e econ√≥mico na inibi√ß√£o da express√£o quer de genes essenciais, quer de genes n√£o essenciais, sem provocar clivagem, nem efeitos off-target. O CRISPRi utiliza como indutor a anidrotetraciclina (ATc) e pode ser modelado por diferentes fatores, nomeadamente a concentra√ß√£o de ATc, o grau de complementaridade entre o sgRNA e a sequ√™ncia-alvo, e o uso de um motivo de DNA de 2-5 par de bases, situado a jusante da sequ√™ncia-alvo, designado de proto-spacer adjacent motif (PAM), com ‚Äúfor√ßas‚ÄĚ distintas. Para avaliar os efeitos do silenciamento dos genes gatD, murT e asnB na viabilidade e crescimento micobacteriano, foram realizadas experi√™ncias de spotting. Atrav√©s das mesmas, os genes murT e gatD, que pertencem a um oper√£o com um promotor comum, foram confirmados como genes essenciais em M. smegmatis, ao contr√°rio do gene asnB. O n√≠vel de knockdown dos dois primeiros genes pareceu estar diretamente relacionado com a for√ßa da PAM associada a cada mutante. Nos mutantes associados a PAMs fracas, a dist√Ęncia desde a regi√£o alvo ao in√≠cio do gene tamb√©m pareceu influenciar o silenciamento mediado pelo CRISPRi. Contudo, atrav√©s da realiza√ß√£o de curvas de crescimento dos controlos e mutantes gatD- , esta √ļltima correla√ß√£o n√£o foi observada, uma vez que o perfil de crescimento dos mutantes associados a PAMs fracas aparentou ser semelhante entre si. Apesar das diversas vantagens do CRISPRi, na aus√™ncia de indutor, o perfil de crescimento dos mutantes gatD pareceu indicar a exist√™ncia de uma express√£o leaky da dCas9Sth1, assim como algum n√≠vel de toxicidade causado pela sobrexpress√£o da mesma no controlo de M. smegmatis contendo um plasm√≠deo CRISPRi vazio n√£o-digerido, na presen√ßa de ATc. Os n√≠veis de knockdown de um mutante gatD foram avaliados atrav√©s de qRT-PCR e obteve-se uma diminui√ß√£o na express√£o do gatD de 8,8 vezes, comparando com a estirpe wild-type na presen√ßa de ATc. Este resultado salienta a capacidade do CRISPRi de alcan√ßar uma inibi√ß√£o consider√°vel da express√£o de genes espec√≠ficos em M. smegmatis e, em conjunto com os resultados de caracteriza√ß√£o fenot√≠pica, indica que esta inibi√ß√£o √© suficiente para causar defeitos no crescimento. Em contraste com resultados anteriormente publicados, n√£o se observou nenhuma evid√™ncia da exist√™ncia de um efeito polar provocado pelo CRISPRi, fen√≥meno que √© bastante frequente quando se silenciam genes pertencentes a oper√Ķes. Para investigar o papel da amida√ß√£o do PG na resist√™ncia a antibi√≥ticos, foram determinadas as concentra√ß√Ķes m√≠nimas inibit√≥rias e bactericidas (MICs e MBCs, respetivamente) de tr√™s antibi√≥ticos ő≤-lact√Ęmicos de tr√™s classes diferentes (amoxicilina, cefotaxima e meropenemo), na presen√ßa e na aus√™ncia de um inibidor de ő≤-lactamases (clavulanato), e de dois antibi√≥ticos anti-tuberculose de primeira-linha (isoniazida e etambutol) para todos controlos e mutantes gatD- . Diversos mutantes gatD mostraram uma suscetibilidade aumentada aos antibi√≥ticos ő≤-lact√Ęmicos testados, especialmente na presen√ßa de clavulanato. Em particular para a cefotaxima, o silenciamento do gatD pareceu contribuir para um maior efeito bactericida. Estes resultados sugerem que a aus√™ncia de amida√ß√£o nos precursores de PG destes mutantes pode fazer com que estes sejam substratos mais pobres para as penicillin binding proteins (PBPs) que catalisam as rea√ß√Ķes de cross-linking, levando a que estas rea√ß√Ķes sejam menos eficientes e a que as PBPs sejam mais suscet√≠veis √† a√ß√£o deste tipo de antibi√≥ticos. Assim, a inibi√ß√£o da amida√ß√£o do res√≠duo de D-iGlu do PG atrav√©s do sistema de CRISPRi e a utiliza√ß√£o de antibi√≥ticos ő≤-lact√Ęmicos poderia funcionar para produzir um efeito antimicrobiano sin√©rgico mais eficaz. Com o objetivo de compreender a contribui√ß√£o desta modifica√ß√£o do PG no reconhecimento pelo sistema imune do hospedeiro, foram realizadas infe√ß√Ķes de macr√≥fagos de ratinho RAW 264.7 com um mutante gatD e foi investigada a sobreviv√™ncia intracelular bacteriana. Os resultados indicaram um decr√©scimo no n√ļmero de unidades formadoras de col√≥nias (CFUs)/mL deste mutante, na presen√ßa de ATc, √†s 1, 4 e 24 h p√≥s-infe√ß√£o, comparando com a estirpe wild-type na presen√ßa de ATc e com o mesmo mutante na aus√™ncia de ATc. Sabendo que a amida√ß√£o do res√≠duo de D-iGlu est√° ausente neste mutante, esta redu√ß√£o do fitness intracelular poder√° ser explicada por um maior reconhecimento das micobact√©rias pelo macr√≥fagos, resultando numa maior taxa de fagocitose e, consequentemente, numa menor capacidade de sobreviv√™ncia intracelular. Estes resultados sustentam a ideia de que esta modifica√ß√£o do PG pode ser uma estrat√©gia das micobact√©rias para evitar o seu reconhecimento por parte do sistema imune inato do hospedeiro, contudo dever√£o ser realizadas experi√™ncias adicionais. Os resultados apresentados nesta tese mostram o potencial da amida√ß√£o do PG como poss√≠vel alvo terap√™utico e constituem um bom ponto de partida para uma posterior investiga√ß√£o desta mesma modifica√ß√£o em M. tuberculosis. Paralelamente √† constru√ß√£o dos mutantes em M. smegmatis, tamb√©m diversos mutantes murT- , gatD e asnB foram constru√≠dos em M. tuberculosis H37Ra e todos os sgRNA desenhados foram confirmados como id√™nticos para M. tuberculosis H37Rv, o que facilitar√° uma aplica√ß√£o futura destas experi√™ncias nestas estirpes, ou ainda, em estirpes cl√≠nicas, incluindo estirpes multi e extensivamente resistentes, em condi√ß√Ķes de biosseguran√ßa de n√≠vel 3.Tuberculosis (TB) belongs to the top 10 causes of death in the world and it is caused by the intracellular pathogen Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis). The emergence of multi- and extensive-drug resistant strains of M. tuberculosis remains a serious growing problem and reflects the urgent need to develop new drugs and effective treatment approaches. A typical feature of M. tuberculosis is its complex cell wall structure, well-known as the mycolyl-arabino-galactan peptidoglycan (mAGP) complex and highly responsible for the resistance to many antimicrobial drugs. The mAGP complex includes a distinctive mycobacterial peptidoglycan (PG) layer that undergoes several relevant modifications, of which the amidation of D-iso-glutamate (D-iGlu) and meso-diaminopimelic acid residues are of special interest. Recently, these reactions were found to be catalysed in mycobacteria by the essential MurT/GatD enzymatic complex and by the AsnB enzyme, respectively. Both PG modifications have been shown to influence the bacterial antibiotic resistance, especially to ő≤-lactams, and the host immune recognition. Therefore, to further understand the significance of PG amidation in both contexts, murT, gatD, and asnB knockdown mutants were constructed in the mycobacterial study model, Mycobacterium smegmatis (M. smegmatis), using the clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR) interference (CRISPRi) system. CRISPRi is based on the anhydrotetracycline (ATc)-inducible expression of an enzymatically inactive Cas9 protein together with a small single guide RNA (sgRNA) specific to a target gene sequence. It has been proven to be a very simple, useful, and cost-effective platform to repress the expression of either essential or non-essential genes. Using this system, murT and gatD were confirmed to be essential in M. smegmatis, in contrast to asnB, and the level of gatD and murT knockdown seemed to be directly related with the associated proto-spacer adjacent motif (PAM) strength. In murT and gatD- mutants associated with weaker PAMs, the distance of the target gene region from the beginning of the gene appeared to also influence the CRISPRi-mediated gene silencing and, consequently, the growth defects, although this was not confirmed by growth curves. By assessing the levels of knockdown in one gatD mutant, a 8.8-fold decrease in gatD mRNA expression was obtained, compared to the ATc-treated wild-type (WT) strain and, in contrast to previous results, there was no evidence of a polar effect by CRISPRi. Several gatD- mutants showed increased susceptibility to ő≤-lactams (amoxicillin, cefotaxime, and meropenem), particularly in the presence of a ő≤-lactamase inhibitor (clavulanate). This suggested that the lack of amidation displayed by the PG precursors of these mutants could make them poorer substrates for penicillin binding proteins (PBPs) and thus, it could lead to a less efficient cross-linking and to PBPs being more susceptible to the action of these antibiotics. Moreover, it was observed a significant decrease in the bacterial intracellular survival of a gatD knockdown mutant within RAW 264.7 murine macrophages, compared to the ATc-treated WT strain and to the untreated mutant. The absence of a D-iGlu amidation in the mycobacterial PG caused a reduced resistance to ő≤-lactams and appeared to contribute to a higher recognition of mycobacteria by host macrophages

    Fun√ß√£o e regula√ß√£o de transportadores de √°cidos carbox√≠licos em Candida albicans e C. glabrata e o seu papel na forma√ß√£o de biofilmes, resist√™ncia a antif√ļngicos e fagocitose

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    PhD Thesis Doctoral Program in Molecular and Environmental Biology Branch of Cellular Biology and HealthCandida species are the most frequent opportunistic fungal pathogens in humans and a common source of life-threatening infections in intensive care patients. The urgent need to find adequate therapeutic approaches to treat these infections has boosted the efforts to elucidate the genetic circuits governing immune evasion and host adaptation, but also antifungal resistance in Candida species. This thesis displays a set of studies addressing the physiological impact of two non-fermentable carbon sources commonly found in the human host, namely lactate and acetate, in both C. albicans and C. glabrata. Under certain circumstances, these carboxylic acids represent the main carbon and energy sources that sustain the survival of these pathogens. The efficient uptake of these substrates by regulated plasma membrane transporters play a critical role in such conditions. Therefore, Candida carboxylate transporters were studied regarding their physiology and regulation, as well as their potential role in biofilm formation, antifungal drug resistance and immune recognition. Growth of C. albicans in the presence of lactate was found to affect biofilm formation and morphology, as well as susceptibility to fluconazole. These phenotypes are dependent on Jen1 and Jen2 carboxylate transporters. Adaptation to lactate induces cell wall remodeling, a process that was found to be partially mediated by the Rlm1 transcription factor and to affect the interaction of C. albicans with immune cells. In a second part of the work, global transcriptomic analyses in C. glabrata revealed that fluconazole treatment induces gene expression reprogramming in a carbon source and pH-dependent manner. The mitochondrial cochaperone Mge1 has emerged as a key regulator of fluconazole susceptibility during these conditions, by reducing the metabolic flux towards toxic sterol formation. Additionally, three putative carboxylate transporters of C. glabrata, that belong to the AceTr family, were also studied. These transporters were shown to play a critical role in acetate assimilation and contribute to the persistence of C. glabrata within the human host. The systematic analysis of how host microenvironments influence the physiology of Candida species highlighted important mediators of host-pathogen interactions, such as carboxylate transporters. These proteins allow a rapid adaptation of Candida to the human host, contributing to their pathogenic potential.As leveduras oportunistas mais frequentes em humanos pertencem ao g√©nero Candida e s√£o uma fonte comum de infe√ß√Ķes sist√©micas em pacientes hospitalizados. A procura urgente de novas terapias para tratar estas infe√ß√Ķes tem aumentado os esfor√ßos para elucidar, em Candida, os circuitos gen√©ticos que governam a evas√£o imune, a adapta√ß√£o ao hospedeiro, mas tamb√©m a resist√™ncia a antif√ļngicos. Esta tese apresenta um conjunto de estudos que abordam o impacto fisiol√≥gico de duas fontes de carbono n√£o-ferment√°veis, os √°cidos l√°ctico e ac√©tico, em C. albicans e C. glabrata. Em certos microambientes, estes substratos s√£o as principais fontes de energia e carbono dispon√≠veis e o seu transporte para o interior da c√©lula, de um modo eficiente, √© fundamental. Esta tese teve como principal objetivo compreender a fisiologia e a regula√ß√£o de transportadores de √°cidos carbox√≠licos em Candida, assim como o seu papel na forma√ß√£o de biofilmes, resist√™ncia a antif√ļngicos e reconhecimento imunol√≥gico. Numa primeira parte do trabalho, foi demonstrado que a presen√ßa de lactato afeta a forma√ß√£o e morfologia de biofilmes em C. albicans, bem como a sua suscetibilidade ao fluconazol. Estes fen√≥tipos s√£o dependentes dos transportadores de √°cidos carbox√≠licos Jen1 e Jen2. Foi tamb√©m revelado que a adapta√ß√£o ao lactato induz a remodela√ß√£o da parede celular, um processo que, em parte, √© mediado pelo fator de transcri√ß√£o Rlm1, e afeta a intera√ß√£o de C. albicans com as c√©lulas do sistema imunit√°rio. Numa segunda parte do trabalho, foi realizada uma an√°lise transcript√≥mica em C. glabrata. Esta an√°lise revelou que o tratamento com fluconazol induz uma reprograma√ß√£o da express√£o gen√©tica, de um modo dependente da fonte de carbono e do pH. Nessas condi√ß√Ķes, o cochaperone mitocondrial Mge1 apresenta-se como um regulador chave da suscetibilidade a este antif√ļngico, por reduzir o fluxo metab√≥lico em dire√ß√£o √† forma√ß√£o de ester√≥is t√≥xicos. Por fim, foi tamb√©m demonstrado que tr√™s transportadores da fam√≠lia AceTr desempenham um papel cr√≠tico na assimila√ß√£o de acetato, contribuindo para a persist√™ncia deste microrganismo no hospedeiro humano. A an√°lise sistem√°tica da influ√™ncia dos microambientes do hospedeiro na fisiologia das esp√©cies de Candida revelou importantes mediadores, como os transportadores de √°cidos carbox√≠licos, que permitem uma r√°pida adapta√ß√£o destas esp√©cies ao hospedeiro e contribuem para o seu potencial patog√©nico

    Contribuição para o estudo do linfoma gastrointestinal em gatos : análise retrospetiva de 19 casos clínicos

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    Disserta√ß√£o de Mestrado Integrado em Medicina Veterin√°riaO linfoma √© o tumor maligno mais comum em gatos, representando cerca de 90% dos tumores hematopoi√©ticos e aproximadamente 30% de todas as neoplasias nesta esp√©cie animal. Esta doen√ßa tem vindo a aumentar a sua incid√™ncia nos gatos e envolve com maior frequ√™ncia os linfonodos e o ba√ßo. Apesar de noutras formas de linfoma parecer haver uma associa√ß√£o com o v√≠rus da leucemia felina, nesta forma concreta tal n√£o parece acontecer. Desconhece-se a causa, mas sabe-se que est√° associada a uma predisposi√ß√£o gen√©tica, o que explica ofacto de ser mais comum em algumas ra√ßas como os siameses. Pressup√Ķe-se ainda que a doen√ßa intestinal inflamat√≥ria cr√≥nica possa progredir, em alguns casos, para linfoma. O presente estudo retrospetivo tem como objetivos a caracteriza√ß√£o de uma amostra de 19 felinos com linfoma gastrointestinal em rela√ß√£o √† ra√ßa, g√©nero, idade, idadeao diagn√≥stico, estado em rela√ß√£o ao FIV e ao FeLV; sinais cl√≠nicos, imagem ecogr√°fica, m√©todo laboratorial de diagn√≥stico definitivo, resultados da imunohistoqu√≠mica, resultados do PARR; tratamento e resposta ao mesmo e sobreviv√™ncia; e a an√°lise comparativa dos dados obtidos com a informa√ß√£o que √© poss√≠vel obter na literatura existente. Os resultados obtidos est√£o de acordo com a literatura, permitindo afirmar que o linfoma gastrointestinal afeta, na maioria, gatos dom√©sticos de pelo curto (73,68%), machos (63,16%) e geri√°tricos (n=12 anos - 21,05%; n=10 anos - 15,79%; n=7 anos - 10,53%). Ao contr√°rio do esperado, nesta amostra, os animais jovens com 4 anos de idade diagnosticados com linfoma gastrointestinal apresentam uma preval√™ncia significativa de 15,79%. Confirma-se a n√£o rela√ß√£o entre a presen√ßa de infe√ß√Ķes retrovirais (FIV e FeLV) e o desenvolvimento da neoplasia, uma vez que neste estudo apenas 1 fel√≠deo testou positivo a FIV.ABSTRACT - Lymphoma is the most common malignant tumor in cats, representing about 90% of hematopoietic tumors and approximately 30% of all neoplasms in this animal species. This disease most often involves the lymph nodes and spleen. Gastrointestinal lymphoma has increased it‚Äôs incidence in cats and is currently the most common type of lymphoma in this species. Although in other forms of lymphoma there seems to be an association with the Feline Leukosis Virus, in this specific form this does not seem to happen. The cause is unknown, but it is known that a genetic predisposition is important, which explains why it is more common in some breeds such as the Siamese. It is thought that chronic inflammatory disease can progress, in some cases, to lymphoma. The present retrospective study aims to characterize a sample of 19 felines with gastrointestinal lymphoma in relation to race, gender, age, age at diagnosis, status in relation to FIV and FeLV; clinical signs, echographic image, laboratory method of definitive diagnosis, immunohistochemistry results, PARR results; treatment and response to it; and a comparative analysis of the data obtained with the information that it is possible to obtain in the existing literature. The results are in accordance with the literature, allowing us to state that gastrointestinal lymphoma affects, in the majority, short-haired domestic cats (73.68%), male (63.16%) and geriatric (n=12 years - 21, 05%; n=10 years - 15.79%; n=7 years - 10.53%). Contrary to expectations, in this sample, 4-year-old young animals diagnosed with gastrointestinal lymphoma have a significant prevalence of 15.79%. The non relationship between the presence of retroviral infections (FIV and FeLV) and the development of the neoplasm is confirmed, since in this study only 1 felid tested positive for FIV.N/

    Utiliza√ß√£o de plasma aut√≥logo no tratamento de √ļlceras da c√≥rnea no c√£o : estudo retrospetivo de 30 casos

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    Disserta√ß√£o de Mestrado Integrado em Medicina Veterin√°ria. √Ārea Cient√≠fica - Cl√≠nicaO plasma sangu√≠neo apresenta caracter√≠sticas semelhantes √†s da pel√≠cula lacrimal. Cont√©m componentes que, quando aplicados topicamente, promovem a regenera√ß√£o do tecido corneal e asseguram a sua integridade e viabilidade. Col√≠rios formulados a partir de sangue do paciente s√£o relativamente f√°ceis de obter e normalmente bem tolerados, sendo usados no tratamento de diversas doen√ßas oculares. Em √ļlceras de c√≥rnea complicadas, para al√©m de potenciar a cura, diminui ainda a atividade das colagenases envolvidas no processo. O presente estudo teve como objetivo realizar uma avalia√ß√£o retrospetiva sobre a utiliza√ß√£o de plasma aut√≥logo no tratamento de √ļlceras da c√≥rnea em c√£es. Para isso, foram avaliados pacientes diagnosticados com √ļlceras corneais no HRVM num per√≠odo de seis meses. Foi feita a caracteriza√ß√£o da amostra, da doen√ßa e do tratamento. Para determinar a efic√°cia da plasmaterapia, foram comparados os tempos medianos de cicatriza√ß√£o das les√Ķes superficiais tratadas com e sem plasma. Para defeitos graves (indolentes e profundos), estes tempos foram correlacionados de acordo com a frequ√™ncia da administra√ß√£o. Recorreu-se a uma an√°lise de sobreviv√™ncia para tratamento estat√≠stico destes dados. A amostra incluiu 30 c√£es de 14 ra√ßas distintas, maioritariamente braquic√©falas (70%). A idade m√©dia foi de 6.69 ¬Ī 4.03 anos (compreendida entre 0.17-14 anos). 43.33% (n=13) das les√Ķes eram estromais e 56.67% (n=17) afetaram apenas o epit√©lio. Destas, 40% (n=12) responderam ao tratamento e 16.67% (n=5) tiveram um comportamento indolente. A maioria das √ļlceras superficiais n√£o era extensa (n=6; 50%) e as profundas eram predominantemente vastas e mal√°cicas (n=4; 30.77%). O tratamento variou, tendo sido aplicado plasma aut√≥logo em 5 das 12 les√Ķes superficiais e em todas as graves (n=18). N√£o se encontraram diferen√ßas estatisticamente significativas entre os tempos medianos de recupera√ß√£o das les√Ķes superficiais tratadas com e sem plasma (Kaplan Meier; p=0.9), nem entre os tempos de cura dos defeitos graves de acordo com a frequ√™ncia de administra√ß√£o (Kaplan Meier; p=0.9). No presente estudo n√£o foram observados efeitos adversos decorrentes da utiliza√ß√£o de col√≠rios de plasma aut√≥logo, tendo sido demonstrado ser um produto bem tolerado pelos pacientes. N√£o foi poss√≠vel obter resultados estatisticamente significativos que comprovem a sua efic√°cia, devido √† heterogeneidade da amostra, diferen√ßas nos protocolos terap√™uticos adotados e aus√™ncia de grupos controlo. Estudos adicionais poder√£o contribuir para evidenciar os seus benef√≠cios terap√™uticos.ABSTRACT - Use of autologous plasma in the treatment of corneal ulcers in the dog: a retrospective study of 30 cases - Blood plasma presents characteristics similar to those of the tear film. It contains components that, when applied topically, promote corneal tissue regeneration and ensure its integrity and viability. Eye drops formulated from the patient's blood are relatively easy to obtain and usually well tolerated, and are used in the treatment of various ocular diseases. In complicated corneal ulcers, not only enhances healing but also decreases the activity of the collagenases involved in the process. The present study aimed to perform a retrospective evaluation on the use of autologous plasma in the treatment of corneal ulcers in dogs. Patients diagnosed with corneal ulcers at the HRVM were evaluated over a six-month period. Characterization of the sample, disease and treatment was performed. To determine the efficacy of plasmatherapy, median healing times of superficial lesions treated with and without autologous plasma were compared. For severe defects (indolent and deep) these times were correlated according to the administration frequency. Survival analysis was used for statistical treatment of these data. The sample included 30 dogs of 14 different breeds, mostly brachycephalic (70%). The mean age was 6.69¬Ī4.03 years (range 0.17-14 years). 43.33% (n=13) of the lesions were stromal and 56.67% (n=17) affected the epithelium only. From these, 40% (n=12) responded to treatment and 16.67% (n=5) had an indolent behavior. The majority of the superficial ulcers were not extense (n=6; 50%) and the deep ones were predominantly wide and melting (n=4; 30.77%). The treatment varied, with plasma being applied to 5 of the 12 superficial lesions and in all (n=18) severe ulcers. Median recovery times for superficial lesions treated with or without plasma were compared (Kaplan Meier; p=0.9) as well as healing times in severe defects according to the frequency of administration (Kaplan Meier; p=0.9). No significant statistical differences were found. In the present study, no adverse effects from the use of autologous plasma eye drops were observed, having been shown to be a product well tolerated by patients. It was not possible to obtain statistically significant results that prove its efficacy, due to the heterogeneity of the sample, differences in the therapeutic protocols adopted and the absence of control groups. Further studies may contribute to evidence its therapeutic benefits.N/

    Favela tour virtual: Sobre mobilidades turísticas em favelas no contexto da pandemia de Covid-19 = Favela virtual tour: Tourism mobility in favelas in the context of the Covid-19 pandemic

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    Seletas favelas do Rio de Janeiro se consolidaram como atra√ß√£o tur√≠stica no contexto dos megaeventos. No entanto, desde 2016, uma s√©rie de crises econ√īmicas e pol√≠ticas se desdobraram e provocaram uma redu√ß√£o acentuada do n√ļmero de turistas. Com a pandemia do novo coronav√≠rus, em 2020, a situa√ß√£o se agravou e os projetos de turismo em favelas foram paralisados. Nesse contexto, o grupo de pesquisadores e autores deste artigo, em parceria com moradores de favelas engajadas no turismo, iniciou um projeto para a produ√ß√£o de tours virtuais com o objetivo de manter as favelas no fluxo tur√≠stico global, ainda que de forma virtual. Nesse sentido, este artigo descreve um dos resultados dessa iniciativa, quatro tours virtuais realizados em favelas do Rio em 2020, e analisa o que precisou ser mobilizado para converter as favelas tur√≠sticas em atrativos virtuais. = Some favelas in Rio de Janeiro have become a tourist attraction. However, since 2016, a series of economic and political crises in Rio have caused a sharp reduction in the number of tourists, as well as in investments to these areas. With the covid-19 pandemic in 2020, the situation worsened and tourism projects in favelas were paralyzed. The authors of this article in partnership with favela residents initiated a project to stage virtual tours aiming to keep favelas within the global tourist flow. The article discusses the outcomes of the project, referring to four virtual tours conducted in Rio's favelas in 2020, analyzes what is needed to convert tourist favelas into virtual attractions

    Diabetes Mellitus felina

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    O est√°gio curricular do Mestrado Integrado em Medicina Veterin√°ria da Universidade de √Čvora realizado durante seis meses no Hospital Veterin√°rio de S√£o Bento, em Lisboa, deu origem ao presente relat√≥rio. Este relat√≥rio √© constitu√≠do por duas partes. Na primeira parte fez-se uma breve an√°lise descritiva dos casos cl√≠nicos assistidos durante o per√≠odo de est√°gio, abordando de forma sum√°ria as patologias mais relevantes para a estagi√°ria. Por sua vez, a segunda parte compreende uma monografia com o tema ‚ÄúDiabetes Mellitus Felina‚ÄĚ, onde se realizou uma revis√£o bibliogr√°fica abordando a fisiologia do p√Ęncreas, a classifica√ß√£o da afe√ß√£o, a etiologia e patofisiologia, a epidemiologia, a apresenta√ß√£o cl√≠nica, o diagn√≥stico, o tratamento, as complica√ß√Ķes associadas, a monitoriza√ß√£o e o progn√≥stico. A Diabetes Mellitus √© uma doen√ßa end√≥crina comum no paciente felino que √© identificada pela presen√ßa de sinais cl√≠nicos t√≠picos. Por fim, foi apresentado um caso cl√≠nico num gato sendo realizada uma discuss√£o do mesmo; Abstract: Feline Diabetes Mellitus The internship of the master‚Äôs degree in Veterinary medicine from the University of √Čvora, was held for six months at Hospital Veterin√°rio S√£o Bento, in Lisbon, and resulted in the present report. This report consists of two parts. The first part, was held a brief descriptive analysis of clinical cases assisted during the probationary period, briefly addressing the most relevant pathologies for the intern. In turn, the second part is comprised of the monography with the theme Feline Diabetes Mellitus, where a literature review was carried out addressing physiology of the pancreas, classification of the disease, etiology and pathophysiology, epidemiology, clinical presentation, diagnosis, treatment, associated complications, monitoring and prognosis. Diabetes Mellitus is a common endocrine disease in feline patients that is identified by specific clinical signals. Lastly, a clinical case in a cat was presented and a discussion was carried out
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