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    Bases moleculares de la interacci贸n de la E3 ubiquitina ligasa TRIM7 con glucogenina-1 y su potencial relevancia en el contexto de la glucogenosis tipo XV

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    Tesis (Doctor en Ciencias Qu铆micas) - - Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas, 2021Resumen: La ubiquitinaci贸n es un tipo de modificaci贸n postraduccional caracter铆stico de organismos eucariotas, que requiere de la acci贸n conjunta de las enzimas E1 activadora, E2 conjugadora y E3 ligasa para mediar la transferencia de ubiquitina a una prote铆na sustrato. TRIM7 es una E3 ligasa que recientemente ha adquirido inter茅s por su rol en diversas patolog铆as, y pertenece a la familia de prote铆nas TRIM, caracterizadas por un motivo conservado tripartito (TRIM) N-terminal y una regi贸n C-terminal variable que puede mediar el reconocimiento de sustratos. Inicialmente, fue identificada como una prote铆na que interacciona a trav茅s de su dominio C-terminal B30.2 (TRIM7B30.2) con glucogenina-1 (GN1). Dicha prote铆na es responsable de la iniciaci贸n de la bios铆ntesis del gluc贸geno, por lo que las mutaciones que afectan al gen que la codifica se traducen en un trastorno extremadamente raro denominado glucogenosis tipo XV. El presente trabajo se centr贸 en caracterizar a TRIM7B30.2 por cristalograf铆a de rayos X, y describir detalles sobre las regiones relevantes para la interacci贸n con GN1. La estructura de TRIM7B30.2 revel贸 un plegamiento de tipo s谩ndwich-尾 formado por dos l谩minas 尾 antiparalelas caracter铆stico de este tipo de dominios, adem谩s de presentar una cavidad con carga positiva en la cara c贸ncava de dicho plegamiento. Adicionalmente, se logr贸 identificar a residuos clave que delimitan la zona involucrada en la interacci贸n con GN1, adem谩s de obtener indicios de que el extremo C-terminal de esta 煤ltima es necesario para su reconocimiento por TRIM7B30.2 y la prote铆na TRIM7 entera. Otra parte de este estudio se dedic贸 a conocer el impacto de la mutaci贸n patol贸gica Ala16Pro sobre GN1 de conejo, que presenta una alta homolog铆a con la prote铆na humana, mediante el uso de un amplio conjunto de t茅cnicas bioqu铆micas y biof铆sicas. El an谩lisis revel贸 un cambio estructural significativo que ocasion贸 una disminuci贸n de la afinidad por su sustrato y, en consecuencia, de la actividad de la prote铆na; adem谩s de una marcada p茅rdida de estabilidad. Por 煤ltimo, se busc贸 conocer si GN1 y sus mutantes patol贸gicas Ala16Pro y Thr83Met, son sustrato de su actividad E3 ligasa; y si esto podr铆a tener un rol relevante en la glucogenosis tipo XV. Los resultados de la reacci贸n in vitro mostraron que la transferencia de ubiquitina no ocurre bajo las condiciones empleadas, sin embargo, se encontr贸 que TRIM7 interacciona con la mutante patol贸gica GN1 Ala16Pro pese al cambio estructural de la prote铆na, lo que podr铆a implicar a TRIM7 en la v铆a de degradaci贸n de esta mutante, y por ello el estudio ser谩 continuado en cultivos celulares.Abstract : Ubiquitination is a common post translational modification in eukaryotes, which involves an E1 activating enzyme, an E2 conjugating enzyme, and an E3 ligase enzyme; in a process that mediates the transfer of ubiquitin to a substrate protein. TRIM7 is an E3 ligase member of the TRIM protein family, characterized by an N-terminal tripartite motif (TRIM) and a variable C-terminal region that can mediate substrate recognition, that has been recently linked to diverse pathological processes. TRIM7 was initially identified as a glycogenin-1 (GN1) interacting protein, and this interaction involves the C-terminal B30.2 domain of TRIM7 (TRIM7B30.2). GN1 is the protein that initiates glycogen biosynthesis, and mutations in the gene that encodes for this enzyme are involved in the onset of an extremely rare disease known as type XV glycogen storage disease. This work was mainly focused on the characterization of TRIM7B30.2, through the use of X-ray crystallography, and the details of the region involved in the interaction with GN1. The structure of TRIM7B30.2 revealed the characteristic B30.2 domain fold consisting of two 尾-sheets arranged as a distorted 尾-sandwich, and a positively charged cavity in the hypervariable region of this domain. Besides, key residues that define the zone of interaction with GN1 were identified, and evidence for the requirement of the latter鈥檚 C-terminal region in the binding was found. This study was also focused on the effect of the pathogenic Ala16Pro mutation on rabbit GN1, which displays a high sequence homology with the human protein; and to this end, a wide range of biophysical and biochemical techniques were applied. The analysis revealed a significant structural change which resulted in a decrease in substrate affinity and protein activity, besides a considerable loss of stability. Finally, the thesis was oriented towards analyzing the potential E3 ligase activity of TRIM7 on GN1 and the pathological mutants Ala16Pro and Thr83Met, and its possible functional role on type XV glycogen storage disease. The results have shown that in vitro, TRIM7 does not transfer ubiquitin to GN1 or the mutants in this experimental setup. However, it was found that despite the structural change caused by the mutation, TRIM7 still interacts with the Ala16Pro mutant of human GN1, which might implicate the intervention of TRIM7 in the degradation pathway of this mutant, and for this reason, this study will be continued in cell cultures.2023-08-30Fil: Mu帽oz Sosa, Christian Javier. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas; Argentina.Fil: Carrizo Garcia, Mar铆a Elena. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Qu铆mica Biol贸gica; Argentina.Fil: Carrizo Garcia, Mar铆a Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Qu铆mica Biol贸gica de C贸rdoba; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Bioqu铆mica Cl铆nica; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Bioqu铆mica Cl铆nica e Inmunolog铆a; Argentina.Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Fisicoqu铆mica; Argentina.Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto de Investigaciones en Fisicoqu铆mica de C贸rdoba; Argentina.Fil: Romero, Jorge Miguel. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas; Argentina.Fil: Erm谩cora, Mario Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto Multidisciplinario de Biolog铆a Celular; Argentina

    Uso de las histonas circulantes y sus modificaciones post-traduccionales como biomarcadores en sepsis y shock s茅ptico

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    La sepsis es una afecci贸n potencialmente mortal causada por una respuesta anormal del hu茅sped a una infecci贸n, produciendo respuestas fisiol贸gicas alteradas que da帽an los propios tejidos del paciente y pueden provocar disfunci贸n org谩nica e incluso la muerte. Asimismo, algunos pacientes s茅pticos progresan a shock s茅ptico, caracterizado por alteraciones circulatorias, celulares y metab贸licas sustanciales que aumentan el riesgo de mortalidad. A pesar de que la sepsis se caracteriza por un mal funcionamiento del sistema inmunol贸gico, lo que a su vez conduce a una respuesta inmune alterada e inmunosupresi贸n, la alta complejidad de la fisiopatolog铆a de la sepsis requiere una mayor investigaci贸n para comprender las respuestas inmunes que ocurren durante la sepsis. Asimismo, las histonas extracelulares circulantes han ganado relevancia como mediadores citot贸xicos en la sepsis, ya que act煤an como patrones moleculares asociados a da帽o, que inducen estr茅s oxidativo y activan el inflamasoma NLRP3. Estos mecanismos median la activaci贸n de la piroptosis, un mecanismo de muerte celular programada que produce inflamaci贸n mediante la expresi贸n de IL-18, IL-1尾 and IL-1伪. Sin embargo, a pesar de la evidencia de activaci贸n del inflamasoma en las c茅lulas inmunes durante la sepsis, se desconoce si las histonas extracelulares son capaces de activar los inflamasomas endoteliales y sus consecuencias. En este trabajo destacamos el papel previamente desconocido de las histonas extracelulares, mediando la activaci贸n del inflamasoma NLRP3 y la piroptosis en las c茅lulas endoteliales, contribuyendo a la disfunci贸n endotelial y la desregulaci贸n de la respuesta inmune mediada por el endotelio. Asimismo, tambi茅n demostramos c贸mo la acetilaci贸n de histonas disminuye la activaci贸n de la piroptosis. Adem谩s, demostramos que la piroptosis se produce en pacientes con shock s茅ptico y los niveles de histonas circulantes se correlacionan con la expresi贸n de citoquinas proinflamatorias y citoquinas piropt贸ticas, la liberaci贸n de factores de adhesi贸n endotelial y la gravedad de la enfermedad. Proponemos la piroptosis mediada por histonas como un nuevo objetivo para desarrollar intervenciones cl铆nicas. De manera similar, hemos analizado las respuestas inmunorelacionadas que ocurren durante las primeras etapas de la sepsis con el objetivo de proporcionar nuevos datos comparando las cantidades de citoquinas, inmunomoduladores y otros mediadores endoteliales en pacientes cr铆ticamente enfermos no s茅pticos, s茅pticos y de shock s茅ptico. Nuestro enfoque ayudar谩 a caracterizar r谩pidamente las respuestas inmunes alteradas en pacientes s茅pticos y de shock s茅ptico ingresados en la Unidad de Cuidados Intensivos. Finalmente analizamos el papel de la metilaci贸n del ADN en el control del sistema inmune s茅ptico. Nuestros resultados demostraron el papel central de la metilaci贸n del ADN modulando la respuesta molecular en los pacientes de shock s茅ptico y contribuyendo a la inmunosupresi贸n, a trav茅s de la alteraci贸n de los patrones de metilaci贸n de los promotores de IL-10 y TREM-2.Sepsis is a life-threatening condition caused by an abnormal host response to an infection that produce altered physiological responses which damages own tissues of the patient and can result in organ dysfunction and in some cases death. Likewise, a subset of septic patients progresses to septic shock, characterized by substantial circulatory, cellular and metabolic abnormalities, which substantially increase the risk of mortality. Sepsis is characterized by a malfunction of the immune system and it can lead to an altered immune response and immunosuppression. Moreover, the high complexity of the pathophysiology of sepsis requires of further investigation to characterize the immune responses in sepsis and septic shock. Likewise, circulating extracellular histones have gained relevance as cytotoxic mediators in sepsis pathophysiology, since they act as damage-associated molecular patterns, which induce oxidative stress and activate NLRP3 inflammasome. Subsequently, inflammasome mediates pyroptosis activation, a programmed cell death mechanism that produces inflammation through the release of IL-18, IL-1尾 and IL-1伪. However, despite inflammasome activation may occur in immune cells during sepsis, it is unknown if this process also takes place in endothelial cells and particularly whether extracellular histones are capable of activating endothelial inflammasomes and their consequences. In this work we highlight a previously unknown role for extracellular histones, that mediates the activation of NLRP3 inflammasome and pyroptosis in endothelial cells by contributing to endothelial dysfunction and the dysregulation of the immune response mediated by endothelium. Likewise, we demonstrated how histone acetylation decreases pyroptosis activation. Furthermore, we show how pyroptosis occurs in septic shock patients and how circulating histone levels correlate with the expression of pro-inflammatory and pyroptotic cytokines, the release of endothelial adhesion factors and septic shock severity. We propose histone-mediated pyroptosis as a new target to develop clinical interventions. Similarly, we have analyzed the immune-related responses occurring during the early stages of sepsis with the aim of providing new data by comparing the amounts of cytokines, immune modulators and other endothelial mediators in critically-ill non-septic patients, septic and septic shock patients. Our approach will help to rapidly characterize the altered immune responses in septic and septic shock patients admitted in the Intensive Care Unit. Finally, we also analyzed the role of DNA methylation in the control of septic immune system. Our results demonstrated the central role of DNA methylation modulating the molecular response in septic shock patients and contributing to immunosuppression, through the alteration of DNA methylation patterns of IL-10 and TREM2 promoters

    Strung pieces: on the aesthetics of television fiction series

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    As layered and long works, television fiction series have aesthetic properties that are built over time, bit by bit. This thesis develops a group of concepts that enable the study of these properties, It argues that a series is made of strung pieces, a system of related elements. The text begins by considering this sequential form within the fields of film and television. This opening chapter defines the object and methodology of research, arguing for a non-essentialist distinction between cinema and television and against the adequacy of textual and contextual analyses as approaches to the aesthetics of these shows. It proposes instead that these programmes should be described as televisual works that can be scrutinised through aesthetic analysis. The next chapters propose a sequence of interrelated concepts. The second chapter contends that series are composed of building blocks that can be either units into which series are divided or motifs that unify series and are dispersed across their pans. These blocks are patterned according to four kinds of relations or principles of composition. Repetition and variation are treated in tandem in the third chapter because of their close connection, given that variation emerges from established repetition. Exception and progression are also discussed together in the fourth chapter since they both require a long view of these serial works. The former, in order to be recognised as a deviation from the patterns of repetition and variation. The latter, In order to be understood in Its many dimensions as the series advances. Each of these concepts is further detailed with additional distinctions between types of units, motifs, repetitions, variations, and exceptions, using illustrative examples from numerous shows. In contrast, the section on progression uses a single series as case study, Carniv脿le (2003-05), because this is the overarching principle that encompasses all the others. The conclusion considers the findings of the research and suggests avenues for their application

    Reforming the United Nations

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    The thesis deals with the financial crisis that the United Nations faced starting in 1985 when the US Congress decided to withhold a significant part of the US contribution to the UN regular budget in order to force a greater say for the major contributors on budgetary issues, budgetary restraint and greater efficiency. The UN responded by the adoption of resolution 41/213 of 19 December 1986 that was based on the recommendations of a Group of High-level Intergovernmental Experts ("G-18") set up a year earlier. A new system was introduced regarding the formulation of the regular budget of the United Nations Organisation and a broader process of reform was initiated including a restructuring of the Secretariat and of the intergovernmental machinery in the economic and social fields. After an introductory chapter (Chapter I), the thesis examines the UN problems at the budgetary/financial and administrative/structural levels, the solutions proposed from within and without the United Nations established framework and the actual attempts at reform (Chapters II and ifi). The realisation that the implementation of reforms is rather disjointed and often unsuccessful (e.g. the failure to restructure the intergovernmental machi.neiy) prompts a search for the deeper causes of the UN problems at the political level and the attitudes of the main actors, namely the USA, the USSR, some up-and-coming states, notably Japan, the Third World states and, finally, of the UN Secretary-General and the Secretariat (Chapter 1V). Although the financial crisis may have subsided since 1988 and the USA seem committed to paying up their dues, the deeper UN crisis of identity has not been resolved and is expected to resurface if no bold steps are taken. In that direction, some possible alternative courses for the UN in the future are discussed drawing upon theory and practice (Chapte

    Food for thought! Inulin-type fructans: does the food matrix matter?

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    Food matrices can be described as the final composition of a food product which results from complex interactions between compounds found within different ingredients and the processing parameters used in production. These factors, not only impact on the final structure of a product, but also have the potential to alter both the structural integrity and bioavailability of potentially beneficial compounds present, for example, dietary fibres. As a result, there is growing curiosity amongst the scientific community on whether the food matrix may impact on the prebiotic efficacy of inulin-type fructans. Therefore, the purpose of this review is to explore previous food-based inulin-type fructan supplementation studies to determine whether the food matrix directly impacts on their prebiotic efficacy. Our working hypothesis is that other potentially prebiotic ingredients and components present within the food may alter inulin-type fructans prebiotic effect

    El factor de transcripci贸n KLF6 regula la proliferaci贸n, fusi贸n y migraci贸n de las c茅lulas trofobl谩sticas

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    Tesis (Doctora en Ciencias Qu铆micas) - - Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas, 2021RESUMEN La placenta es un 贸rgano temporal clave durante el embarazo ya que ejerce la conexi贸n entre la madre y el feto por lo que su correcta formaci贸n y funcionamiento es fundamental para el bienestar fetal y el progreso del embarazo. El desarrollo temprano de la placenta humana se considera, en algunos aspectos, similar a la carcinog茅nesis. Ambos se desarrollan en un ambiente con bajos niveles de ox铆geno, su desarrollo es modulado por el sistema inmunol贸gico, la expresi贸n de protooncogenes, microARNs y genes supresores tumorales. Adem谩s, las c茅lulas placentales y tumorales tienen una alta capacidad para proliferar, fusionarse, migrar e invadir. La principal diferencia entre la progresi贸n del c谩ncer y el desarrollo de la placenta es que, en esta 煤ltima, estos procesos est谩n estrictamente regulados. La desregulaci贸n de algunos de estos procesos se asocia con complicaciones del embarazo como preeclampsia, retardo del crecimiento intrauterino, placentas cretas, entre otras. Durante el desarrollo placentario las c茅lulas progenitoras de la placenta, los citotrofoblastos (CTB), proliferan r谩pidamente y comienzan a diferenciarse, algunas para dar origen por fusi贸n celular al sinciciotrofoblasto (STB) multinucleado y algunas hacia el trofoblasto extravelloso migratorio y altamente invasivo que permite anclar la placenta al 煤tero materno. KLF6 es un factor de transcripci贸n ubicuo con un dominio de transactivaci贸n 谩cido N-terminal y un dominio de uni贸n al ADN tipo dedos de zinc C-terminal. KLF6 es altamente expresado en la placenta. Los ratones Klf6-/- mueren en el d铆a embrionario 12,5 mostrando deterioro del desarrollo de la placenta. Previamente, se demostr贸 que KLF6 es necesario para la fusi贸n c茅lula-c茅lula en cultivos primarios de citotrofoblastos vellosos (CTBv), as铆 como en la l铆nea celular BeWo derivada de trofoblasto y modula la expresi贸n de la prote铆na inhibidora del ciclo celular p21, de sincitina-1 (Syn-1) y de la subunidad 尾 de la gonadotrofina cori贸nica humana (尾-hCG). Adem谩s, la inmunoreactividad de KLF6 es mayor en el lecho placentario de las placentas provenientes de embarazos con preeclampsia que en las de los embarazos sin complicaciones. Sin embargo, se desconoce el mecanismo por el cual KLF6 regula la diferenciaci贸n del CTBv y no existen reportes sobre el rol de KLF6 en el proceso de migraci贸n e invasi贸n de los citotrofoblastos extravellosos (CTBev). En contextos tumorales, KLF6 act煤a como un gen supresor de tumores. De hecho, la disminuci贸n en los niveles de KLF6 aumenta la tumorigenicidad y la met谩stasis en numerosos tipos de c谩ncer. No obstante, tambi茅n se ha informado el efecto contrario en c茅lulas normales y cancerosas. En esta tesis se estudi贸 el mecanismo por el cual KLF6 participa en la diferenciaci贸n de los CTBv los cuales fusionan para formar el STB. Se demostr贸 que KLF6 es suficiente para desencadenar la fusi贸n de c茅lulas BeWo. Adem谩s, KLF6 increment贸 la expresi贸n de mol茅culas importantes involucradas en este proceso, entre ellas 尾-hCG, Syn-1 y p21, y disminuy贸 la proliferaci贸n celular. Mientras que, una mutante de KLF6 que carece del dominio 谩cido, implicado en la actividad transcripcional (KLF6螖ac), disminuy贸 la sincicializaci贸n in vitro de cultivos primarios de CTBv, as铆 como, la expresi贸n de Syn-1 y 尾-hCG. Adem谩s, la fusi贸n celular desencadenada por KLF6 se redujo en c茅lulas silenciadas para p21. Estos resultados sugieren que KLF6 induce la sincicializaci贸n de CTBv a trav茅s de un mecanismo que involucra su dominio regulador de la transcripci贸n de una manera dependiente de p21. Por otro lado, se demostr贸 que KLF6 est谩 involucrado en la diferenciaci贸n del CTBev. La disminuci贸n en la expresi贸n de KLF6 o la sobreexpresi贸n de la mutante carente del dominio ac铆dico (KLF6螖ac) increment贸 la migraci贸n, la actividad de la metaloproteinasa 9 y la expresi贸n de mol茅culas importantes involucradas en la migraci贸n y la transici贸n epitelio-mesenquimal (EMT), como 尾-catenina, conexina-43, integrinas 伪5 y 尾1. Adem谩s, provoc贸 cambios morfol贸gicos compatibles con la EMT confirmados por estudios de microscop铆a de fuerza at贸mica y Raman. En l铆nea con los datos obtenidos in vitro, se demostr贸 que placentas cretas, caracterizadas por ser anormalmente invasivas, poseen niveles de inmunomarcaci贸n para KLF6 m谩s bajos con mayor localizaci贸n citoplasm谩tica en comparaci贸n con placentas normales. Los resultados obtenidos en esta tesis sugieren que KLF6 es un regulador maestro de la diferenciaci贸n celular en la v铆a sincicial y que su dominio de transactivaci贸n N-terminal es necesario para esta funci贸n. Mientras que, en la diferenciaci贸n de los CTBev, KLF6 act煤a regulando negativamente la migraci贸n a trav茅s de la modulaci贸n de la expresi贸n de mol茅culas importantes involucradas en este proceso. En resumen, los resultados actuales permiten proponer a KLF6 como un regulador clave de la diferenciaci贸n del trofoblasto a trav茅s de la v铆a vellosa y extravellosa, y sugieren que la desregulaci贸n en su nivel de expresi贸n o la p茅rdida de su actividad transcripcional contribuir铆a al desarrollo de patolog铆as como preeclampsia y placentas cretas.ABSTRACT The placenta is a key temporary organ during pregnancy. It establishes critical relationships between the mother and the fetus, so its correct formation and functioning is essential for fetal well-being and the outcome of the pregnancy. Early human placental development resembles carcinogenesis in otherwise healthy tissues. The placental and tumor development share numerous features. Both take place in an environment with low levels of oxygen, their development is modulated by the immune system and the expression of protooncogenes, microRNAs and tumor suppressor genes. Furthermore, placental and tumor cells have a high capacity to proliferate, fuse, migrate and invade. The main difference between cancer progression and placenta development is the tight regulation of these processes in the placenta. However, the dysregulation of these processes is associated with pregnancy complications such as preeclampsia, intrauterine growth restriction and placentas cretas, among others. During development, placental progenitor cells, the cytotrophoblasts (CTB), rapidly proliferate and begin to differentiate, some towards the villous pathway to form the multinucleated syncytiotrophoblast (STB) by cell-cell fusion and some towards the highly invasive and migratory extravillous trophoblasts (EVT) that anchor the placenta to the uterus. KLF6 is a ubiquitous transcription factor with an N-terminal acidic transactivation domain and a C鈥恡erminal zinc finger DNA-binding domain. KLF6 is highly expressed in placenta. Klf6-/- mice die at day E12.5 showing impaired placenta development. Previously, it was demonstrated that KLF6 is required for cell鈥揷ell fusion in primary culture of human villous cytotrophoblasts (vCTB) isolated from term placenta, as well as in the BeWo trophoblast-derived cell line and it modulates the expression of the cell cycle inhibitory protein p21, syncytin-1 (Syn-1), and the 尾 subunit of the human chorionic gonadotropin (尾-hCG). Additionally, KLF6 immunoreactivity is higher in the placental bed of preeclamptic pregnancies than in those of uncomplicated pregnancies. However, the mechanism by which KLF6 regulates CTBv differentiation is unknown and there are no reports about the role of KLF6 in the process of migration and invasion of the EVT. In cancer, KLF6 acts mainly as a tumor suppressor gene. Indeed, KLF6 knockdown increases the tumorigenicity and metastasis in numerous types of cancer. Nevertheless, the opposite effect has been also reported in normal and cancer cells. In this thesis, the mechanism by which KLF6 participates in CTB differentiation through the villous and extravillous pathways was explored. It was demonstrated that KLF6 is sufficient to trigger cell fusion and to increase the expression of important molecules involved in this process, such as 尾-hCG, Syn-1 and p21, in addition, it downregulates cell proliferation. Furthermore, a KLF6 mutant lacking the acidic domain involved in its transcriptional activity (KLF6螖ac) impaired the in vitro syncytialization of villous trophoblast cells isolated from human term placentas and decreased Syn-1 and 尾-hCG expression. Moreover, cell fusion triggered by KLF6 was reduced in cells silenced for p21. These results suggest that KLF6 induces vCTB syncytialization through a mechanism that involves its regulatory transcriptional domain in a p21-dependent manner. Additionally, the KLF6 involvement in EVT differentiation was established. The decrease in KLF6 expression or the overexpression of the transcriptionally inactive mutant (KLF6螖ac) increase cell migration, metalloproteinase 9 activity, and the expression of molecules involved in migration and epithelial mesenchymal transition (EMT) such as 尾-catenin, connexin-43, integrin 伪5 and 尾1. In addition, it causes morphological changes consistent with EMT, confirmed by atomic force microscopy and Raman studies. In line with the data obtained in vitro, it was shown that placentas cretas, characterized by being abnormally invasive, have lower KLF6 immunostaining levels and more cytoplasmic localization compared to normal placentas. The results obtained in this thesis suggest that KLF6 is a master regulator of cell differentiation into the syncytial pathway and that its N-terminal transactivation domain is required for this function. While in EVT differentiation, KLF6 negatively regulates migration by modulating the expression of important molecules involved in this process. In summary, current results allow proposing KLF6 as a key regulator of trophoblast differentiation through the villous and extravillous pathways and suggest that dysregulation in its expression level or the loss of its transcriptional activity may contribute to the development of pregnancy pathologies like preeclampsia and placentas cretas.2023-07-31Fil: Panzetta de Dutari, Graciela Mar铆a Del Valle. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Bioqu铆mica Cl铆nica; Argentina.Fil: Panzetta de Dutari, Graciela Mar铆a del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Bioqu铆mica Cl铆nica e Inmunolog铆a; Argentina.Fil: Miranda, Andrea Lis. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas; Argentina.Fil: Caputto, Beatriz Leonor. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Qu铆mica Biol贸gica; Argentina.Fil: Caputto, Beatriz Leonor. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Qu铆mica Biol贸gica de C贸rdoba; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Bioqu铆mica Cl铆nica; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Bioqu铆mica Cl铆nica e Inmunolog铆a; Argentina.Fil: Vivas, Laura Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto de Investigaci贸n M茅dica Mercedes y Mart铆n Ferreyra; Argentina.Fil: Varone, Cecilia L. Universidad Nacional de Buenos Aires; Argentina.Fil: Varone, Cecilia L. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto de Qu铆mica Biol贸gica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

    Relaciones intergeneracionales: beneficios, satisfacci贸n y limitaciones derivadas de la pr谩ctica de actividades presenciales y virtuales = Intergenerational relationships: benefits, satisfaction, and limitations derived from the practice of face-to-face and virtual activities

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    421 p.Introducci贸n Durante las 煤ltimas d茅cadas, el aislamiento social y la soledad entre los adultos mayores ha conducido a un mayor inter茅s en el estudio de las relaciones intergeneracionales. Los programas intergeneracionales constituyen una gran oportunidad para que los adultos mayores conecten con personas de otras generaciones. Numerosos estudios han descrito los efectos beneficiosos de estos programas, mejorando la salud mental y f铆sica de las personas mayores y contribuyendo a una mejor formaci贸n acad茅mica y habilidades sociales en los ni帽os. Las tecnolog铆as digitales se han vuelto necesarias para realizar las actividades diarias de personas de todas las edades, incluyendo cada vez m谩s a las personas mayores. Las TICs y las herramientas virtuales pueden ofrecer una gran oportunidad para que los adultos mayores conecten con personas de otras generaciones, lo que producir谩 beneficios en su calidad de vida y bienestar. Preguntas de investigaci贸n 驴Las intervenciones de base emp铆rica empleadas para la evaluaci贸n de los efectos de las interacciones intergeneracionales cumplen los indicadores IBE y en ello influye el tipo de modalidad presencial, virtual o combinada? 驴La realizaci贸n de actividades intergeneracionales de tipo presencial tiene un impacto positivo, en relaci贸n a sus beneficios, satisfacci贸n y limitaciones, en todas las personas involucradas? 驴La realizaci贸n de actividades intergeneracionales mediante el uso de herramientas virtuales tiene un impacto positivo, en relaci贸n a sus beneficios, satisfacci贸n y limitaciones, en todas las personas involucradas? Objetivos Identificar los elementos relevantes que aseguran la eficacia de las intervenciones intergeneracionales tanto presenciales como virtuales. Evaluar los beneficios, la satisfacci贸n y las limitaciones de las interacciones intergeneracionales derivadas de la realizaci贸n de actividades presenciales. Analizar los beneficios, la satisfacci贸n y las limitaciones de las interacciones intergeneracionales derivadas del uso de herramientas virtuales. Resultados Revisi贸n sistem谩tica (Art铆culo IV): Los an谩lisis descriptivos y multivariados realizados mostraron que los programas con mayor n煤mero de controles IBE tienen mayor eficacia, independientemente del modo de intervenci贸n empleado, y que esta eficacia tambi茅n est谩 modulada por otras variables como la discapacidad de los participantes, su nivel de alfabetizaci贸n o su pertenencia a una instituci贸n. An谩lisis de los beneficios, la satisfacci贸n y las limitaciones derivadas de la realizaci贸n de actividades intergeneracionales presenciales (Art铆culo VIII): El an谩lisis de las variables sociodemogr谩ficas revel贸 que personas de 40 a帽os o m谩s, con autonom铆a personal, solteras o casadas, convivientes con su pareja y/u otro familiar y no jubilados realizaban actividades presenciales con personas de otra generaci贸n con una frecuencia significativamente mayor que el resto de grupos para cada variable. La mayor铆a de los encuestados que participaron en actividades intergeneracionales presenciales indicaron beneficios en su salud f铆sica y mental, estado de 谩nimo, relaciones, autodeterminaci贸n, participaci贸n social y educaci贸n acad茅mica. La mayor铆a de los participantes se mostraron bastante o muy satisfechos con la persona con la que realizaban este tipo de actividades, especialmente si esta persona era un amigo o un familiar cercano. Excepto los abuelos, las personas que participaron en actividades intergeneracionales presenciales y que no ten铆an limitaciones o discapacidades fueron las que indicaron los participantes con mayor frecuencia. An谩lisis de los beneficios, la satisfacci贸n y las limitaciones derivadas de la realizaci贸n de actividades intergeneracionales virtuales (Art铆culo IX): El an谩lisis de los datos sociodemogr谩ficos de los encuestados mostr贸 asociaciones significativas entre el uso de redes sociales y todas las variables analizadas, excepto su nivel de autonom铆a. La mayor铆a de los participantes que participaron en actividades intergeneracionales virtuales refirieron beneficios en su participaci贸n social, relaciones, estado de 谩nimo, salud mental y educaci贸n acad茅mica. Adem谩s, la mayor铆a de los participantes estaban bastante o muy satisfechos con la persona con la que utilizaron las herramientas virtuales, especialmente si esta persona era un amigo, su pareja, un hermano, otro familiar o un colega. Excepto los abuelos, las personas que participaron en actividades intergeneracionales virtuales y que no ten铆an limitaciones o discapacidades fueron las indicadas por los participantes m谩s frecuentemente. Conclusiones El uso de herramientas digitales ofrece una gran oportunidad para el desarrollo de programas intergeneracionales con beneficios tanto para los ni帽os y j贸venes como para los adultos mayores. Sin embargo, se ha identificado la necesidad de incrementar el n煤mero de intervenciones de tipo virtual que puedan mejorar la eficacia de las actividades realizadas y, al mismo tiempo, asegurar que se cumplan los indicadores de base emp铆rica. Las interacciones intergeneracionales, tanto de tipo presencial como aquellas basadas en el uso de herramientas virtuales, pueden contribuir a mejorar la salud tanto f铆sica como mental, las habilidades y las relaciones sociales de todas las personas involucradas

    The Lived Experiences of Yoga Practice for Female Survivors of Child Sexual Abuse: An Interpretative Phenomenological Analysis

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    Childhood sexual abuse (CSA) permeates all aspects of personhood including the body. There is a surge in the interest in reviewing yoga鈥檚 potential usefulness for trauma survivors in clinical trials. However, very little research focuses on women鈥檚 perspectives who experienced CSA and have subsequently practised yoga in community settings. This study investigated six women鈥檚 lived experiences of yoga practice, mainly focusing on the helpful and unhelpful aspects of yoga that mediated their recovery. Adult women survivors with experience of movement-based yoga in a group setting for at least eight weeks in the last year were recruited. Data were collected using individual, face-to-face, and semi-structured interviews. The transcribed data were analysed using Interpretative phenomenological analysis (IPA) underpinned by constructivist ontology, phenomenological epistemology, and feminist axiology. Three emergent themes were identified- 鈥淐oming to yoga鈥, 鈥淧rocess of becoming鈥 and 鈥淩eclaiming life鈥. Women鈥檚 narratives in this study illustrated that they found yoga a useful and resilience-building resource in their journey of healing. With consistent and frequent practice, they reported feeling more present, self-aware, and compassionate towards themselves. Teacher鈥檚 qualities such as fostering safety, choice and holistic focus were identified as significant mediating factors that aided this journey, whereas crowded, mixed-gender, and posture-focused practice presented challenges for some respondents. This study has the potential to help Counselling psychologists (CoP), therapists, psychologists, mental health practitioners, yoga teachers, and health professionals involved in the care of the CSA survivors in implementing an evidence-based and holistic approach that facilitates self-directed recovery of CSA survivors. Further research is needed to establish if the benefits and challenges of different aspects of practice apply to the diverse population and its potential usefulness in various phases of recovery. Also, find ways to standardize the yoga practice considering variations in the approach to ensure safe and ethical practice
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