Frecuencia fenotípica de los cinco antígenos mayores del sistema sanguíneo Rh en donantes voluntarios de sangre de la región del Maule

38 p.La sangre obtenida por donación es usada para realizar transfusiones a pacientes enfermos que así lo requieran. La terapia transfusional tiene por objetivo mejorar la salud del paciente evitando posibles reacciones adversas postransfusionales. Actualmente se usan unidades de glóbulos rojos compatibles con el grupo sanguíneo ABO y antígeno D del sistema Rh, pero existiendo esta compatibilidad igual se producen reacciones adversas postransfusionales hemolíticas causadas por otros sistemas sanguíneos como Kell, Duffy y Rh C, E, c y e. Los antígenos mayores del sistema Rh D, C, E, c y e, son proteínas altamente inmunogénicas capaces de provocar una respuesta inmunológica en aquellos individuos que no los poseen. El propósito de este estudio es determinar la frecuencia fenotípica de los antígenos mayores del sistema RH en donantes de sangre voluntarios. Se incluyó un total de 200 donantes de sangre voluntarios a quienes se les determinó la frecuencia fenotípica de los antígenos mayores del Sistema RH. Las pruebas fueron realizadas utilizando la técnica de hemaglutinación en tubo. De las 200 muestras de donantes de sangre analizadas, 96% presentaba el antígeno D, 97,5% presentaba el antígeno e, un 35,5% el antígeno E, un 79% presentaba antígeno C y un 65,5% el antígeno c. La estrategia de fenotipar otros antígenos diferentes a los del sistema ABO y Rh D en unidades de glóbulos rojos donadas es un paso más para mejorar la seguridad de las transfusiones de sangre

Expression and refolding of the protective antigen of Bacillus anthracis: A model for high-throughput screening of antigenic recombinant protein refolding

Bacillus anthracis protective antigen (PA) is a well known and relevant immunogenicprotein that is the basis for both anthrax vaccines and diagnostic methods. Properly foldedantigenic PA is necessary for these applications. In this study a high level of PA was obtained inrecombinant Escherichia coli. The protein was initially accumulated in inclusion bodies, whichfacilitated its efficient purification by simple washing steps; however, it could not be recognizedby specific antibodies. Refolding conditions were subsequently analyzed in a high-throughputmanner that enabled nearly a hundred different conditions to be tested simultaneously. Therecovery of the ability of PA to be recognized by antibodies was screened by dot blot usinga coefficient that provided a measure of properly refolded protein levels with a high degreeof discrimination. The best refolding conditions resulted in a tenfold increase in the intensityof the dot blot compared to the control. The only refolding additive that consistently yieldedgood results was L-arginine. The statistical analysis identified both cooperative and negativeinteractions between the different refolding additives. The high-throughput approach describedin this study that enabled overproduction, purification and refolding of PA in a simple andstraightforward manner, can be potentially useful for the rapid screening of adequate refoldingconditions for other overexpressed antigenic proteins.Fil: Pavan, María Elisa. Biochemiq; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; ArgentinaFil: Pavan, Esteban E.. Politecnico di Milano; ItaliaFil: Cairo, Fabian Martin. Biochemiq; ArgentinaFil: Pettinari, María Julia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Sistema de presentación de antígenos basado en el virus de la sharka

Referencia OEPM: P9800623.-- Fecha de solicitud: 24/03/1998.-- Titulares: Inmunología y Genética Aplicada, S.A., Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC).El sistema de presentación de antígenos heterólogos basado en el virus de la sharka (PPV) comprende una partícula de PPV quimérica formada por ensamblaje de la proteína de la cápsida (CP) de PPV modificada que contiene, al menos, un antígeno heterólogo en dicha CP modificada, estando dicho antígeno dispuesto en la superficie exterior de dicha partícula viral de PPV. Preferentemente, dicho antígeno heterólogo se encuentra en el extremo amino terminal de la CP modificada de PPV. En una realización concreta se describe la construcción de un sistema de presentación de un epítopo inmunológicamente activo derivado de la proteína VP2 del parvovirus canino (CPV). Estos sistemas de presentación de antígenos tienen utilidad en diagnóstico y vacunas.Peer reviewe

Intranasal sensitization with Blomia Tropicalis antigens induces allergic responses in mice characterized by elevated antigen-specific and non-specific serum ige and peripheral blood eosinophil counts

In order to evaluate the potential allergenicity of Blomia tropicalis (Bt) antigen, IgE production of both specific and non-specific for Bt antigen was monitored in BALB/c mice after exposure to the antigen by nasal route. It was evidenced that B. tropicalis contains a functional allergen in its components. The allergenic components, however, when administered intranasally without any adjuvant, did not function to induce IgE response within a short period. On the other hand, intranasal inoculation of Bt antigens augmented serum IgE responses in mice pretreated by a subcutaneous priming injection of the same antigens. Inoculation of Bt antigen without subcutaneous priming injections induced IgE antibody production only when the antigen was continuously administered for a long period of over 24 weeks. Even when the priming injection was absent, the Bt antigen inoculated with cholera toxin (CT) as a mucosal adjuvant also significantly augmented the Bt antigen-specific IgE responses depending on the dose of CT co-administered. The present study also demonstrated that Bt antigen/CT-inoculated mice showed increased non-specific serum IgE level and peripheral blood eosinophil rates without noticeable elevations of the total leukocyte counts. The immunoblot analysis demonstrated 5 main antigenic components reactive to IgE antibodies induced. These components at about 44-64 kDa position were considered to be an important candidate antigen for diagnosis of the mite-related allergy.Para avaliar a capacidade alergizante do antígeno da Blomia tropicalis (Bt) a produção de IgE específica e não específica a antígeno Bt foi monitorada em camundongos BALB/c após exposição ao antígeno por via nasal. Foi evidenciado que Bt contem um alérgeno funcional em seus componentes. Os componentes alergênicos entretanto, quando administrados por via intra-nasal, sem qualquer adjuvante, não induzem resposta IgE durante um pequeno período. Por outro lado, a inoculação intra-nasal de antígenos Bt aumentou a resposta sérica de IgE em camundongos pré-tratados por uma injeção inicial sensibilizante sub-cutânea aos mesmos antígenos. A inoculação do antígeno Bt sem as injeções sensibilizantes iniciais induziu a produção de anticorpos IgE somente quando o antígeno foi administrado de maneira contínua, por um período longo de mais de 24 semanas. Mesmo quando as injeções sensibilizantes iniciais foram ausentes, o antígeno Bt inoculado com a toxina de cólera (CT) como adjuvante mucoso também aumentou de maneira significante a resposta IgE antígeno específica do Bt dependendo da dose de CT administrada conjuntamente. O presente estudo também demonstrou que camundongos inoculados com antígeno Bt/CT mostram aumento do nível IgE não específico no soro e médias de eosinófilos no sangue periférico sem qualquer elevação da contagem total de leucócitos. A análise por Immunoblot demonstrou cinco principais componentes antigênicos reativos aos anticorpos IgE induzidos. Estes componentes na posição 44-64 kilodaltons foram considerados importantes antígenos-candidatos para o diagnóstico da alergia relacionada ao ácaro

Exámenes de Antígeno de Histocompatibilidad

Esta investigación tuvo como objetivo principal abordar la importancia del sistema HLA haciendo énfasis en los exámenes de antígeno de histocompatibilidad. Se estudiaron aspectos, tales como: Describir la función que desempeña el sistema mayor de histocompatibilidad (HLA) en los trasplantes, exponer los tipos de antígenos de histocompatibilidad del sistema HLA. explicar los métodos de detección en la investigación del sistema HLA, así como también valorar la importancia del sistema HLA en la actualidad. El diseño de la investigación se basó en un estudio documental descriptivo, donde se abordaron los aspectos señalados en los objetivos propuestos. Para obtener la información que sustenta este trabajo se utilizaron técnicas para la recolección de datos como fichas bibliográficas, análisis de literatura y documentos encontrados en internet para lograr el propósito de la investigación. Así como también programas de Microsoft Word 2010 para la realización y entrega del trabajo y PowerPoint 2010 para la presentación y defensa del trabajo. Finalmente se concluye que: El Sistema HLA y los exámenes de antígeno de histocompatibilidad, desempeña una función importante en los trasplantes de órganos con el reconocimiento de antígenos y anticuerpos que pueden producir una reacción adversa en los trasplantes. La dinámica de los holotipos del Sistema HLA consiste en diferenciar lo propio de lo ajeno. En el reconocimiento de aloantígenos, las células del donante reconocerían los antígenos HLA extraños del receptor, que podrían activarse, proliferarse y atacar al huésped. Las pruebas celulares, serológicas y moleculares se utilizan en la tipificación HLA para determinar el grado de compatibilidad que exhibe el receptor donador, detectar en el receptor anticuerpos anti–HLA clínicamente relevantes dirigidos en contra de las especificidades antigénicas de su potencial donador, conocer el grado de aloinmunización humoral del paciente (sensibilización) y conocer la especificidad del anticuerpo anti HLA presente para evaluar el estatus inmunológico del paciente y la selección del donador

Transformação de plantas de tabaco (Nicotiana tabacum L.) com os genes recombinantes 35SHBsAg e 35SHBsAgER do vírus da hepatite B.

O antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) recombinante, purificado de plantas transgênicas, mostrou-se bastante eficiente quando utilizado para a indução da produção de anticorpos anti-HBs para a prevenção da hepatite B. Devido ao importante papel demonstrado pelo antígeno HBsAg para a prevenção da hepatite B, a sequência codificadora do antígeno HBsAg, adicionada ou não da sequência carboxi-terminal para retenção da proteína no retículo endoplasmático, foi ligada ao promotor 35S do vírus do mosaico da couve-flor, à sequência líder ? do vírus do mosaico do tabaco, e à sequência terminadora da transcrição. O objetivo deste trabalho foi realizar a clonagem do gene quimérico 35SHBsAgER no vetor de expressão em plantas pGPTV/Kan/Asc. O plasmídio resultante, denominado pG35SHBsAgER, e um plasmídio produzido anteriormente em nosso laboratório, denominado pG35SHBsAg, foram transferidos para Agrobacterium tumefaciens e folhas de tabaco, cultivar SR1, foram utilizadas como explantes para transformação genética. Foram obtidas 21 plantas completas, dez para a construção pG35SHBsAg, e 11 para a construção pG35SHBsAgER. O DNA genômico de todas as plantas foi analisado por PCR e foi observada a presença do transgene em todas as plantas

Antígeno HLA y su asociación a las enfermedades

Esta investigación tuvo como objetivo principal, indagar acerca de la importancia del Sistema Mayor de Histocompatibilidad “HLA” y su asociación a las enfermedades. Así como mostrar la importancia de este sistema característicamente polimórfico de sumo interés en el área de inmunohematología, a la misma vez destacar las distintas técnicas de identificación para HLA. De igual manera se abordaron otros aspectos, tales como los tipos de HLA, la clasificación de las enfermedades, los mecanismos de asociación. El diseño estadístico de esta investigación estuvo basado en un estudio documental descriptivo, en el cual se pudo abordar cada uno de los aspectos que se propusieron. Para poder obtener la información que sustenta nuestro trabajo, utilizamos técnicas para recolectar datos como fichas bibliográficas, se analizó diversas literaturas y documentos encontrados para lograr el propósito de esta investigación Concluyendo que: El sistema HLA es el sistema más complejo y polimórfico conocido en el hombre. Del que se puede destacar su reconocida y valiosa importancia en la aceptación y rechazo de aloinjertos, del que se ha demostrado que desempeña un papel de suma importancia en la susceptibilidad a una gran cantidad de enfermedades, destacándose aquellas de carácter inmunológico o autoinmune. Aquellas enfermedades que se asocian al sistema HLA, generalmente son de etiología desconocida, presentando alteraciones de procesos inmunológicos, además que pueden presentar un agrupamiento familiar y afectar a más de un caso entre consanguíneos. Estas enfermedades se lograron clasificar en dos tipos; un grupo son las basadas en mecanismos de patogénesis y el segundo grupo se clasifica teniendo como base las características de los antígenos HLA responsables de asociació

Desarrollo de una prueba de ELISA para el diagnóstico de infección por Brucella canis en perros

El diagnóstico definitivo y específico de la brucelosis en caninos causada por Brucella canis (B. canis) serealiza mediante el aislamiento de la bacteria desde muestras patológicas o sangre. Sin embargo, como laenfermedad se caracteriza por presentar periodos abacterémicos, un cultivo negativo no excluye laposibilidad de infección. La alternativa más ampliamente utilizada es la detección de anticuerpos frente a lainfección y debido a que tanto B. ovis y B. canis comparten componentes antigénicos con la cepa vacunaBrucella abortus RB51 (B. abortus CRB51), ésta podría ser usada como antígeno en el diagnósticoserológico de la enfermedad. En el presente estudio, se describe un enzimoinmunoensayo indirecto (ELISAI)para el serodiagnóstico de brucelosis canina utilizando un extracto altamente purificado delipopolisacárido rugoso (LPS-R) de Brucella abortus CRB51, cuyos resultados son comparados con latécnica contra inmunoelectroforesis (CIEF), que utiliza un antígeno extraído de una cepa de B. ovis, quecontiene tanto proteínas como al LPS rugoso. El análisis de los resultados indicó asociación estadística entreambas pruebas (p>0,05) para el diagnóstico de brucelosis canina. Además, ambas pruebas obtuvieron un altoíndice de concordancia (K= 0.961). Estos resultados hacen del ELISA-I propuesto una prueba promisoria alutilizar un antígeno más purificado y entregar resultados cuantitativos.  

Desenvolvimento de dot-blot para detecção de anticorpos para o vírus da Artrite Encefalite Caprina em caprinos.

Resumo: A técnica de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) é empregada mundialmente como método de triagem e monitoramento das fases iniciais de programas de controle das lentiviroses de pequenos ruminantes, mas apesar da boa especificidade, a IDGA pode apresentar resultados falso-negativos. Este trabalho teve como objetivo padronizar o teste Dot-Blot (DB) para a detecção de anticorpos, em caprinos, contra o Lentivírus Caprino (LVC), utilizando antígeno experimental preparado a partir do vírus total, e compará-lo com a IDGA e com ELISA indireto (ELISA-i). Na realização do (DB) a membrana de nitrocelulose (MN) foi disposta num aparelho de blot de 96 poços acrescentando antígeno com uma concentração de 0,5 mg de proteína/poço. Colocaram-se as tiras de MN em tubos de ensaio contendo soro teste diluído (1:50). Após, distribuiu-se o conjugado (peroxidase IgG coelho anti-cabra) diluído 1:500 em PBS-T e revelou-se a MN numa solução de DAB/4-Cloronapthtol. Num total de 327 amostras verificou-se que o ELISA-i detectou 209 caprinos positivos, o DB detectou 200, enquanto a IDGA detectou 144 animais. O DB mostrou concordância de 90,2% (p<0,01) com o Elisa-i. O DB é um teste mais sensível que a IDGA e comparável ao ELISA-i, além de não necessitar da indumentária tecnológica do ELISA-i, podendo ser utilizado em eventos agropecuários ou até mesmo na propriedade. Summary: The imunodifusion in agar gel technique (IDGA) is used worldwide as a screening method of monitoring the initial phases of programs to control lentivirosis of small ruminants. Despite of the good specificity, the IDGA can present false-negative results. The objective of this work was to standardize the Dot-Blot test (DB) for the detention of antibodies against Lentivírus Caprine (LVC), using a prepared experimental antigen from the total virus. The DB was compared with the IDGA and indirect ELISA (ELISA-i) tests. The DB test was accomplished by used a nitrocelulose membrane (MN) in a device of blot of 96 wells and the antigen placed in a concentration of 0.5 mg of protein/well. The strips of MN placed in separated tubes and serum tests added at dilution of 1:50. After that, the conjugated peroxidase IgG rabbit anti-goat diluted 1:500 in PBS-T was incubated for 60 minutes. The DAB/4-Cloronapthtol solution was used to reveal the reaction. From a total of 327 samples, we verified that the ELISA-i detected 209 positives goat, the DB detected 200, while the IDGA 144 animals. The DB showed agreement of 90.2% (p<0.01) with the Elisa-i. The DB is a test more viable than the IDGA and comparable to the ELISA-i test. Besides being more sensible than the IDGA, it does not need the technological equipment of the ELISA-i, being able to be used in animals for events or in the field