12 research outputs found
PROGRAMME CRYOCONSERVATION OF LYMPHOCYTES IN THE PRACTICE OF IMMUNOLOGICAL DEPARTMENT OF TRANSPLANTATION CENTER
No abstrac
Development of embryonic kidney biobanks as an unlimited grafts source for renal replacement therapy
Hoy en día, es bien sabido que, debido a la escasez de órganos, el alotrasplante no puede ser la solución para todos los pacientes que padecen una enfermedad orgánica en etapa terminal. Según la Organización Mundial de la Salud, el trasplante de órganos cubre apenas el 10% de la necesidad mundial. Por lo tanto, se necesitan soluciones alternativas. La medicina regenerativa busca diferentes tecnologías para generar órganos a demanda, ya sea mediante estrategias in vitro o in vivo. En particular, el trasplante de riñones embrionario ha sido considerado durante mucho tiempo como una posible solución a la enfermedad renal en etapa terminal, con ventajas particulares sobre otras opciones. Los metanefros, extraídos y trasplantados en el momento oportuno, son capaces de continuar su crecimiento sin desencadenar una respuesta inmunológica, dando lugar a estructuras renales vascularizadas por el huésped y con funcionalidad tanto excretora como endocrina. El objetivo de esta tesis fue utilizar el conejo como modelo animal para avanzar en el establecimiento de estrategias que conviertan el trasplante de metanefros en una realidad clínica cada vez más cercana.
En particular, el objetivo del Capítulo I fue evaluar la viabilidad de un abordaje laparoscópico para el trasplante de metanefros, como una alternativa mínimamente invasiva a las cirugías abiertas que se realizan actualmente. Debido a su tamaño intermedio entre los roedores y los animales de granja más grandes, el conejo constituye un modelo adecuado para modelizar el abordaje laparoscópico. La técnica de trasplante laparoscópico descrita en este capítulo se validó al tiempo que se determinó por primera vez el momento ideal para trasplantar metanefros de conejo sin tratamiento inmunosupresor. Los metanefros de fetos de conejo de 15 (E15) y 16 días (E16) crecieron con una eficiencia media cercana al 50%, exhibiendo glomérulos, túbulos proximales y distales, y conductos colectores normales sin cambios inmunológicos relevantes en los hospedadores. Con ligeras adaptaciones, esta técnica laparoscópica podría utilizarse para impulsar tanto los ensayos preclínicos como los clínicos, garantizando el control y la seguridad del procedimiento.
Buscando estrategias que permitan que los metanefros trasplantados generen estructuras renales más grandes con una funcionalidad compatible con la vida, en el Capítulo II se evaluaron los efectos promotores del crecimiento del citrato de sildenafilo. Satisfactoriamente, la adición de pequeñas dosis de citrato de sildenafilo (10 μM) durante el trasplante de los metanefros, permitió incrementar tanto la neo- vascularización como el crecimiento de las estructuras renales resultantes, así como su filtración glomerular. El citrato de sildenafilo podría ejercer sus acciones promotoras del crecimiento a través de la potenciación de la angiogénesis, la mejora hemodinámica y los efectos renoprotectores. El tratamiento con citrato de sildenafilo puede contribuir al desarrollo de un procedimiento estandarizado que permita la formación de riñones de soporte vital, esenciales para garantizar la viabilidad del trasplante de metanefros para aplicación clínica.
Por último, los Capítulos III, IV y V se diseñaron para evaluar si era posible la creación de un banco de metanefros mediante técnicas de vitrificación. Utilizando el cryotop® como dispositivo de carga, se vitrificaron metanefros de conejo (E15 y E16) utilizando dos soluciones de vitrificación (VM3 y M22), caracterizadas por su baja toxicidad y su idoneidad para la preservación del tejido renal. Después de un almacenamiento criogénico a largo plazo, los metanefros se desvitrificaron y se trasplantaron por vía laparoscópica en huéspedes no inmunodeprimidos. En conjunto, los resultados mostraron que la eficiencia del trasplante fue similar independientemente del origen de los metanefro, ya fuese fresco (49,2 ± 8,2%), vitrificado con VM3 (37,5 ± 8,0%) o vitrificado con M22 (33,5 ± 7,6%). La edad de los metanefros (E15 y E16) no tuvo un efecto significativo. En todos los casos, los metanefros generaron estructuras renales vascularizadas por el huésped sin desencadenar una respuesta inmunológica, y presentaron glomérulos maduros cuya capacidad de filtración fue probada por el estado hidronefrótico. Por lo tanto, quedó demostrado que la criopreservación de metanefros mediante vitrificación conserva su viabilidad y capacidad de desarrollo. Si se pudiera equilibrar la oferta y la demanda de órganos utilizando riñones embrionarios, este enfoque de criopreservación podría disociar el momento de la recuperación del órgano y su trasplante, permitiendo su distribución a los pacientes que lo necesiten en cualquier lugar, y garantizando un adecuado control de inventario y calidad.
En conjunto, estos hallazgos deberían alentar el diseño de estudios adecuados para respaldar la translación clínica del trasplante de metanefros como terapia de la enfermedad renal en etapa terminal. Con las nuevas herramientas descritas a lo largo de esta tesis en nuestras manos, los futuros estudios preclínicos se vuelven más factibles, lo que hace que la aplicación clínica de la ésta técnica esté un paso más cerca
New insights in Autoimmune Polyendocrine Syndromes 1 and 2
Autoimmune polyendocrinopathy-candidiasis-ectodermal dystrophy (APECED, OMIM 240300) is a rare autosomal recessive disorder caused by mutations in the autoimmune regulator (AIRE) gene located on chromosome 21 (21q22.3). AIRE deficiency causes a loss in central immune tolerance, leading to the failure to eliminate autoreactive T cells in the thymus and allowing their escape to the periphery. Because of a founder effect, APECED is particularly prevalent in Finland (1/25,000) but is observed worldwide with variable prevalence. APECED patients are susceptible to mucocutaneous candidiasis and multiple endocrine autoimmune diseases such as primary hypoparathyroidism, adrenal insufficiency, primary hypogonadism, type 1 diabetes, hypothyroidism, and hypophysitis. They may also develop additional nonendocrine autoimmune diseases, such as alopecia areata/totalis, vitiligo, gastro-intestinal (GI) diseases, keratitis or tubulointerstitial nephritis (TIN). In addition, the patients typically develop a variety of serum tissue-specific autoantibodies, which are predictive of the development of autoimmune disease and anticytokine antibodies such as those against type I interferons and Th17-related interleukin IL-17 and IL-22.
The aim of this thesis was to study such manifestations of APECED that have not been well characterized before and also, to study health-related quality of life among Finnish APECED and Addison s disease/APS2 patients.
We evaluated the clinical GI features and searched for novel markers of GI dysfunction in a Finnish cohort of 31 APECED patients. The main upper GI symptoms were dysphagia and retrosternal pain (45%) and the lower GI symptoms were constipation (48%), diarrhoea (45%) and malabsorption (16%). Previously, L-amino-acid decarboxylase (AADC) and tryptophan hydroxylase type 1 (TPH-1) antibodies have been demonstrated in APECED. AADC antibodies were found in 51% and TPH-1 antibodies in 39% of all patients. Also, a T cell response to AADC was detected in 43%. One third of the patients had autoimmune enteropathy (AIE)-related 75 kDa antigen (AIE-75, 33%) and villin (29%) autoantibodies, and antibodies against brush borders and Paneth cells (PCs) were detected in 29% and 20%, respectively. Mucosal intestinal IL-17 expression was decreased or negative in 77% of the intestinal samples. Duodenal chromogranin A and serotonin expression was absent or decreased in 50% and 66% of the patients, respectively. Of the clinical symptoms, constipation correlated with negative serotonin staining (p less than 0.05) and with AADC antibodies (p = 0.019). Importantly, we found a correlation between autoantibodies against AADC, which are critical for serotonin and DOPA synthesis, and constipation. Constipation was also associated with a lack of serotonin expression in the enteroendocrine cells (EECs). Paneth cells (PCs) were lacking in the duodenum in 20% of our intestinal samples, even though this was not associated with GI symptoms. In this Finnish APECED patient cohort, 17% (5/30) had moderate-to-severe renal failure, including 10% (3/30) with TIN requiring transplantation, haemodialysis or immunosuppressive treatment. However, the latter did not seem to be efficient in controlling disease progression. All 3 patients with TIN had circulating antibodies against the distal part of the nephron, as did 30% of all cohort cases. The pathogenic relevance of such circulating antibodies is still unclear.
The immunological basis of hypoparathyroidism in APECED was explored by studying circulating calcium-sensing receptor (CaSR) and NALP5 antibodies. Although they were detected in 16 of 44 (36%) and 13 of 44 (30%) patients, respectively, we failed to find any clinically relevant statistical association. These APECED patients did not present circulating antibodies for other autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, celiac disease, bullous pemphigoid or pemphigus vulgaris. Some patients had antinuclear antibodies at a low-titre without clinical significance. Secondly, we evaluated the health-related quality of life among Finnish APECED and Addison s disease/APS2 patients and sought to determine which factors may predict a possible impairment.
Using health-related quality of life (HRQoL) questionnaires for APECED (SF-36) and Addison s disease/APS2 patients (SF-36, 15D), we indeed observed impaired HRQoL. For the APECED patients, general health, emotional well-being and energy/vitality were the most diminished aspects of HRQoL. Among the patients with Addison s disease/APS2, compared to a large control population, physical or emotional role functioning, energy/vitality and general health were most affected. Discomfort and symptoms, vitality, and sexual activity were the most affected dimensions of the 15D scores. Affiliation with a patients association, female gender, the presence of non-APS2 inflammatory comorbidities, lower educational level and a longer disease duration were independent predictors of impaired HRQoL in these patients. Taken together, the results of this thesis show that APECED patients are genetically prone to develop autoantibodies to a multitude of tissue antigens but are still tolerant to some common autoantigens. The true clinical and biological relevance of these circulating autoantibodies has not yet been elucidated, and it is possible that they are only a reflection of T cell-mediated immunity. They may, however, have a cumulative effect and clinical disease may arise only in patients with a combination of circulating antibodies, as seen in diabetes type 1. This may explain why we failed to find any association between any single type of antibody and a given symptom. For the lower GI track manifestations, we hypothesise a cumulative effect of the autoimmunity directed against both the enteroendocrine cells and the Paneth cells, leading to a dysfunction in both the secretion of serotonin in the gut and the secretion of antimicrobiobial defensins. Such a disturbance would have an effect on the gut microbiota.
The question of whether the neutralising antibodies against cytokines may have a paradoxical protective effect is open to debate. Lastly, despite having a high number of manifestations, patients with APECED seem to cope with their disease. Patients with Addison s disease have significantly impaired HRQoL compared to the general population.Autoimmuunipolyendokrinopatia-kandidiaasi-ektodermidystrofia (APECED, OMIM 240300) on harvinainen, autosomissa peittyvästi periytyvä sairaus, joka aiheutuu mutaatioista kromosomissa 21 (21q22.3) sijaitsevassa autoimmune regulator (AIRE) geenissä. AIRE:n toiminnallinen puutos johtaa n.s keskusimmuunitoleranssin menetykseen siten että autoreaktiiviset T-solut eivät tuhoudu kateenkorvassa vaan pääsevät karkaamaan perifeeriseen verenkiertoon. APECED:in esiintyvyys Suomessa on erityisen korkea (1/25,000) johtuen ns. perustaja-mutaatiosta AIRE-geenissä, mutta tautia tavataan myös muualla maailmassa vaihtelevalla esiintyvyydellä. APECED-potilaat ovat alttiita ihon ja limakalvojen krooniselle hiivatulehdukselle ja heillä voi esiintyä useita autoimmuunitauteja, kuten lisäkilpirauhasen, lisämunuaisen kuoren, kilpirauhasen sekä sukuelinten vajaatoimintaa, tyypin 1 diabetesta ja aivolisäkkeen tulehdusta. Näiden lisäksi APECED-potilaat kärsivät usein myös muista ei-endokriinisistä autoimmuunitaudeista kuten pälvikaljusta (alopesia), valkopälvestä (vitiligo), silmän sarveiskalvon tulehduksesta, munuaisputkien tulehduksesta (tubulointerstitiaalinen nefriitti, TIN),) sekä suoliston sairauksista. Potilailla havaitaan tyypillisesti seerumissa erilaisia kudos- ja elinspesifejä autovasta-aineita sekä vasta-aineita useita tulehdusvälittäjäaineita eli sytokiineja kohtaan. Viime mainitut kohdistuvat tavallisimmin tyypin I interferonia sekä Th17-immuunivasteeseen liittyviä interleukiineja IL-17 ja IL-22 kohtaan ja ennakoivat autoimmuunitaudin puhkeamista.
Tässä väitöskirjassa on tutkittu tarkemmin kahta aiemmin huonosti tunnettua APECED:iin liittyvää oireistoa: ruoansuolatuskanavan sekä munuaisten ja virtsateiden oireita. Kyselytutkimuksen avulla kartoitimme potilaiden kokemat ruuansulatuskanavaperäiset oireet ja tutkimme suoliston toimintahäiriöiden tautimekanismia 31 suomalaista APECED-potilasta käsittävässä aineistossa. Tyypillisiä ylemmän ruoansulatuskanavan oireita olivat nielemishäiriöt ja rintalastan takainen kipu (45%) ja alemman ruoansulatuskanavan osalta ummetus (48%), ripuli (45%) ja imeytymishäiriöt (16%). Jo aiemmin on tiedetty APECED-potilailla esiintyvän vasta-aineita suoliston toiminnan kannalta keskeisten enteroendokriinisten (EE) solujen erittämiä entsyymejä tryptofaanihydroksylaasia (TPH-1) ja aromaattista L-aminohappodekarboksylaasia (AADC) kohtaan. Potilasaineistossamme AADC-vasta-aineita esiintyi 51%:lla sekä TPH-1 vasta-aineita 39%:lla potilaista. Uutena löydöksenä osoitimme T-soluperäisen immuunivasteen AADC:tä kohtaan 43%:llä. Kolmasosalla potilaista oli osoitettavissa autovasta-aineita myös autoimmuuni enteropatiaan liittyvää antigeenia (AIE-75) sekä ravinnon imeytymisestä vastaavien enterosyyttien mikrovilluksissa esiintyvää villiiniä vastaan. Lisäksi löysimme vasta-aineita suolen sukasaumaa (29% potilaista) ja suolirauhasten Panethin soluja (20% potilaista) vastaan. Suolen limakalvon IL-17:ää tuottavien solujen määrä oli alentunut tai puuttui 77%:ssa tapauksista. Pohjukkaissuolen kromograniini-A-proteiinia tuottavien EE- solujen määrä oli vähentynyt tai puuttui 50%:ssa ja vastaavasti serotoniinia tuottavien solujen määrä 66%:ssa suolistonäytteistä. Potilaiden oireista ummetus korreloi negatiivisesti EE- solujen serotoniini-ilmentymisen (p alle 0.05) sekä AADC-vasta-aineiden kanssa (p alle 0.05). Huomionarvoista on, että havaitsimme merkittävän yhteyden ummetuksen ja serotoniini- ja dopamiinisynteesille keskeistä AADC-entsyymiä vastaan muodostuneiden vasta-aineiden välillä. Uusi havainto oli myös se, että suolistoon antimikrobisia defensiinejä tuottavat Panethin solut puuttuivat 20%:ssa potilaiden duodenum-näytteistä, joskaan tämä ei suoraan korreloinut kliinisten oireiden kanssa. Tutkimistamme APECED- potilaista 17% (5/30) kärsi keskivaikeasta tai vaikeasta munuaisen vajaatoiminnasta, ja 10%:lla (3/30) potilaista oli TIN, joka vaati elinsiirteen, hemodialyysiä tai immunosuppressiivistä hoitoa. Näistä viime mainittu ei kuitenkaan osoittautunut riittäväksi taudinkulun hallinnoimisessa. Kaikilla kolmella TIN:istä kärsivällä potilaalla todettin verenkierrossa vasta-aineita nefronin distaalista osaa, munuaistiehyettä kohtaan. Samoja vasta-aineita löytyi kaikkiaan 30%:lta aineistomme potilaista, mutta niiden merkitys TIN:in patogeneesissä on vielä tuntematon. Tutkimme myös APECED:issä esiintyvään lisäkilpirauhasen vajaatoimintaan liittyviä immunologisia taustamekanismeja määrittämällä verenkierrossa olevia kalsiumia tunnistavaa reseptoria (CaSR) ja NALP5-valkuaista kohtaan muodostuneiden vasta-aineiden määrän. Huolimatta siitä, että osoitimme vasta-aineita CaSR:ia vastaan 16/44 (36%) potilaalla ja NALP5:ttä vastaan 13/44 (30%) potilaalla, emme löytäneet kliinisesti relevanttia korrelaatiota. APECED-potilaillamme ei ollut veressään muussa väestössä tavallisten autoimmuunitautien kuten nivelreuman, keliakian, ihon autoimmuuni rakkulatautien (pemfigoidi ja pemfigus) vasta-aineita, mutta joillakin heistä oli matala-tiitterisiä tumavasta-aineita ilman niihin liittyviä kliinisiä muutoksia.
Väitöskirjaan sisältyvät myös alkuperäistutkimukset potilaiden elämänlaadun kannalta keskeisistä tekijöistä ja terveyteen liittyvästä elämänlaadusta suomalaisilla APECED- ja Addisonin tauti/APS2 potilailla. Käyttäessämme terveyteen liittyviä kyselytutkimuksia (SF-36) APECED-potilailla sekä (SF-36 sekä 15D) Addisonin tauti/APS2-potilailla, kävi ilmi, että molempien potilasryhmien elämänlaatu oli alentunut. APECED-ryhmässä elämänlaatuun vaikuttivat negatiivisimmin heikentyneet yleinen terveydentila, henkinen hyvinvointi sekä energisyys/elinvoima. Addisonin tauti/APS2-potilailla elämänlaatuun negatiivisimmin vaikuttivat alentunut yleinen fyysinen ja emotionaalinen toiminta, terveydentila sekä energisyys/elinvoima. 15D-kyselyn merkittävimmin muuttuneita tekijöitä olivat vaivat ja oireet, elinvoima sekä seksuaalinen aktiivisuus. Näiden potilaiden heikentyneeseen elämänlaatuun vaikuttivat eniten seuraavat erilliset tekijät: potilasyhdistykseen kuuluminen, naissukupuoli, muut kuin APS-2:een kuuluvat tulehdustaudit, alempi koulutustaso sekä pitkittynyt sairauden kesto.
Tässä väitöskirjassa esitetyt tulokset osoittavat, että APECED-potilailla on runsaasti autovasta-aineita monia kudosantigeeneja vastaan mutta samalla potilaat ovat tolerantteja tietyille yleisille autoantigeeneille. Näiden kiertävien autovasta-aineiden lopullinen kliininen sekä biologinen merkitys on vielä tuntematon mutta on mahdollista, että ne ovat vain yksi T-soluvälitteisen immuniteetin osa-alue. On mahdollista, että näillä kiertävillä vasta-aineilla on kumulatiivinen vaikutus ja oireiden puhkeamiseen vaaditaan vasta-aineiden yhdistelmä, kuten on esimerkiksi tyypin 1 diabeteksessä. Tämä voisi selittää myös miksi yksittäisten vasta-aineiden ja kliinisten oireiden välillä ei tässä työssä aina voitu osoittaa merkitsevää assosiaatiota
Extracellular vesicles from glioblastoma cells as potential drug-delivery vehicles to isotypic tumours
The role of biotechnology in animal agriculture to address poverty in Africa: opportunities and challenges
Dietary Habits, Beneficial Exercise and Chronic Diseases
Several lines of evidence indicate that healthy diet and exercise can prevent cardiovascular diseases, stroke, diabetes, and some types of cancer such as colon cancer, and smoking-related cancers. Dietary patterns defined as the quantities, proportions, variety, or combination of different foods and drinks, and the frequency with which they are habitually consumed are also associated with an increased or decreased incidence of chronic diseases. Lately, an association has been found between eating habits, exercise, and psychological and/or mental disorders. This Special Issue of Nutrients, entitled “Dietary Habits, Beneficial Exercise, and Chronic Diseases: Latest Advances and Prospects”, contains 20 manuscripts, either describing original research or reviewing the scientific literature, focused on the relationship between dietary habits (macronutrients, micronutrients, etc.) and/or exercise with metabolic, cardiovascular, neurological, mental, rheumatic, inflammatory, gastrointestinal, odontostomatological, and other chronic diseases
Entschlüsselung der Rolle eosinophiler Granulozyten in einem Mausmodell von Allergisch-Bronchopulmonaler Aspergillose (ABPA)
Allergic Bronchopulmonary Aspergillosis (ABPA) is a severe and incurable complication, predominantly diagnosed in patients with underlying allergic asthma or cystic fibrosis and approximately affects around five million people worldwide. This hypersensitivity pneumonia against Aspergillus fumigatus (Af) is characterized by an overshooting type 2 immune response and comprises elevation of serum IgE, interleukin (IL)-4, -5, and -13, goblet cell hyperplasia with increased mucus production and accumulation of Th2 cells and eosinophils in the lung. To investigate the role of eosinophils in ABPA, we established an in vitro co-culture system of bone marrow-derived eosinophils (BMDEos) confronted with different morphotypes of Af and furthermore a mouse model of repetitive respiratory low dose Af infection, mirroring the chronicity of this disease in vivo.
By using several mutant mice, we could demonstrate that Af-induced lung eosinophilia required the signalling adaptor GRB2 and T-cell derived IL-4/IL-13, while basophils were not involved in this process. BMDEos were strongly activated, when directly exposed to Af in vitro, assessed by the release of various eicosanoids and cytokines, as well as altered expression of a set of activation-associated surface proteins. Eosinophils did in majority not rely on canonical TLR and CLR pathways, but required signalling of the kinases SYK and PI3K for activation. Af-stimulated eosinophils were releasing high levels of IL-4 in vitro, while eosinophil-deficient mice lacked induction of this cytokine in the lung after repetitive Af infection in vivo. We observed an eosinophil-associated increase in serum IgE and a minor increase of Th2 cell numbers in the lung parenchyme, while no link between eosinophils and alternative activation of macrophages, mucus production or oedema formation could be established. Interestingly, eosinophilic lungs exhibited not only a Th2-, but also a Th17-associated cytokine signature. Strikingly, allergic pathology was critically controlled by Th2 cells, as mice deficient in T cell-derived Il4/Il13 were not inducing type 2 cytokines, IgE or mucus production, alternative activation of macrophages or oedema formation after Af treatment.
We furthermore assessed potential roles of eosinophils during resolution of inflammation after repetitive Af treatment by comparing WT and eosinophil-deficient mice at a later time point. At this stage, we observed several hints at anti-inflammatory functions of eosinophils like induction of coagulation-associated genes or reduced B cells in the lung and less serum IgE. Overall, we identified Th2 cells as critical source of the allergy driving cytokines IL-4 and IL-13 for establishment of ABPA-like disease, while eosinophils were only minorly contributing to pathology during acute inflammation and potentially could even act beneficial later during resolution of allergic inflammation.Allergisch bronchopulmonale Aspergillose (ABPA) ist eine schwerwiegende und nicht heilbare Komplikation, die überwiegend in Patienten mit Vorerkrankungen wie allergischem Asthma oder zystischer Fibrose auftritt und geschätzt fünf Millionen Menschen weltweit betrifft. Diese hypersensibilitätsbedingte Lungenentzündung gegen Aspergillus fumigatus (Af) zeichnet sich durch eine übermäßige Typ 2-Immunantwort aus, was erhöhte Werte von Serum IgE, Interleukin (IL)-4, -5 und -13, Becherzell-Hyperplasie mit starker Mukusproduktion, sowie Anreicherung von Th2-Zellen und eosinophilen Granulozyten in der Lunge, beinhaltet. Um die Rolle von Eosinophilen während ABPA zu untersuchen, haben wir ein in vitro Ko-Kultursystem etabliert, bei dem aus Knochenmark differenzierte Eosinophile mit verschiedenen Morphotypen von Af konfrontiert werden.
Des Weiteren haben wir ein Mausmodell entwickelt, bei dem wir durch wiederholte Atemwegsinfektion mit geringer Dosis, den chronischen Aspekt dieser Erkrankung in vivo nachstellen. Mithilfe mehrerer Maus-Mutantenlinien konnten wir herausfinden, dass Af-induzierte Lungeneosinophilie das Signalling-Adaptermolekül GRB2, sowie IL-4/IL-13 von T-Zellen benötigte, während Basophile nicht in diesen Vorgang involviert waren. Aus Knochenmark differenzierte Eosinophile wurden durch direkte Exposition mit Af in vitro stark aktiviert, was nachgewiesen wurde durch die Freisetzung verschiedener Eicosanoide und Zytokine, wie auch der Expressionsstärke von Oberflächenproteinen, die mit Aktivierung assoziiert sind. Die Aktivierung von Eosinophilen verhielt sich größtenteils unabhängig von kanonischen TLR- und CLR-Signalwegen, benötigte aber die Kinasen SYK und PI3K. Mit Af stimulierte Eosinophile setzten in vitro große Mengen an IL-4 frei, während Eosinophil-defiziente Mäuse einen Defekt in der Induktion dieses Zytokins nach wiederholter Gabe von Af in vivo zeigten. Eosinophil-defiziente Mäuse zeigten einen verminderten Anstieg der Serum IgE-Konzentrationen und eine geringere Zunahme von Th2-Zellen im Lungenparenchym, jedoch konnten wir keine Verbindung zwischen Eosinophilen und der Zunahme alternativ aktivierter Makrophagen (AAM), Mukusproduktion oder Ödembildung feststellen. Interessanterweise zeigten Lungen mit Eosinophilie nicht nur eine Th2-assoziierte, sondern zusätzlich eine Th17-assoziierte Zytokinsignatur. Die allergische Pathologie wurde jedoch entscheidend von Th2-Zellen gesteuert, da T-Zell-spezifische Il4/Il13-defiziente Mäuse nach Af-Gabe keinerlei Produktion von Typ 2-Zytokinen, IgE oder Mukus, AAM oder Ödembildung induzierten.
Zusätzlich untersuchten wir den möglichen Einfluss von Eosinophilen während dem Entzündungsrückgang nach wiederholter Af-Gabe, indem wir WT und Eosinophil-defiziente Mäuse zu einem späteren Zeitpunkt verglichen. In dieser Phase stießen wir auf mehrere Hinweise zu anti-inflammatorischen Funktionen von Eosinophilen wie der Induktion von koagulationsassoziierten Genen, der Reduktion von B-Zellen in der Lunge, sowie verminderter IgE-Produktion. Insgesamt konnten wir Th2-Zellen als die entscheidende Quelle der allergiefördernden Zytokine IL-4 und IL-13 ausmachen, um eine ABPA-artige Erkrankung auszulösen. Eosinophile hingegen trugen während der akuten Entzündung eher geringfügig zur Pathologie bei und könnten möglicherweise später sogar förderlich bei der Auflösung der allergischen Entzündung wirken