Mélanome uvéal : rôle de l'orthoptiste dans le diagnostic et la prise en charge

Les mélanomes uvéaux sont les tumeurs intraoculaires malignes les plus fréquentes chez l’adulte. On dénombre 500 à 600 nouveaux cas de mélanomes uvéaux par an en France. La tumeur, très rare chez l’enfant, atteint principalement des patients autour de la cinquantaine et au début de la soixantaine ; elle survient de façon préférentielle chez des patients peu pigmentés. En effet, le mélanome uvéal touche très faiblement les personnes africaines, latino-américaines ou asiatiques. En clinique, on distingue généralement les mélanomes de l’uvée antérieurs (iriens) et postérieurs (corps ciliaires et choroïdes). Les mélanomes de l’iris ne représentent qu’un dixième ou moins des mélanomes uvéaux. Longtemps considéré comme la première tumeur maligne intraoculaire, sa fréquence est légèrement inférieure à celle des métastases oculaires. L’ophtalmologiste oncologue est confronté à la difficulté de prendre sa décision thérapeutique sans preuve histologique et doit s’appuyer sur un faisceau d’arguments. Ce diagnostic s’est affiné en 20 ans, la fréquence d’énucléation pour un diagnostic erroné de mélanome est passée de 20 % à moins de 1 %. Face aux mélanomes uvéaux, Shields a décrit les critères TFSOM : To Find Small Ocular Melanomas. En effet, « Le diagnostic et le traitement du mélanome de la choroïde au début de son développement sont essentiels pour fournir au patient le meilleur pronostic. Les patients atteints de petit mélanome choroïdien ( 8 mm d'épaisseur) développent des métastases dans 32 % et 53%, respectivement. La difficulté du diagnostic précoce du mélanome de la choroïde se rapporte à sa similitude clinique avec un nævus bénin de la choroïde ». Dans le cas des tumeurs ne correspondant pas à des tumeurs franchement évocatrices de mélanome, la surveillance est de rigueur et le principal argument reste actuellement la croissance de la tumeur. Si cette attitude de surveillance ne semble pas affecter le pronostic vital, elle n’apparaît pas complètement satisfaisante alors que, pour la plupart des autres cancers, l’amélioration du pronostic vital passe par le dépistage et le traitement précoce, au stade in situ. Alors que le pronostic vital et fonctionnel du patient sont en jeu, il est important de connaître les caractéristiques cliniques et les modalités de prise en charge de cette pathologie. Le diagnostic repose sur un faisceau d’arguments : l’aspect clinique, échographique, rétinographique, angiographique et le bilan d’extension

Développement d'un modèle de tumeur oculaire dans un hydrogel pour les mesures de dose en brachythérapie du mélanome uvéal

Le mélanome uvéal est la tumeur primaire intraoculaire la plus fréquente chez l'adulte. L'un des traitements le plus souvent utilisé afin d'obtenir un contrôle local de la tumeur s'appelle la curiethérapie par plaque. Malgré un faible taux de récidive locale avec cette technique, la grande majorité des patients développeront des complications oculaires secondaires à la radiation cinq ans après le diagnostic initial. Le manque de modèles ex vivo ou in vitro de mélanome uvéal rend difficile la validation de plaques de curiethérapie personnalisées et le calcul des différents profils de dose par les algorithmes Monte-Carlo. Un fantôme dosimétrique bio-imprimé représentant l'œil humain contenant une tumeur uvéale de forme définie serait un modèle in vitro optimal pour l'évaluation de différents profils de dose dans le développement de plaques de curiethérapie personnalisées. Dans cette étude, la viabilité et la prolifération des cellules cancéreuses du mélanome uvéal ainsi que des fibroblastes et mélanocytes choroïdiens en culture dans un environnement tridimensionnel, soit une matrice extracellulaire commerciale (Matrigel®) ou un hydrogel imprimable, ont d'abord été mesurées par microscopie en contraste de phase ou en fluorescence. Ensuite, l'expression de marqueurs de prolifération, d'hypoxie et de dommages à l'ADN a été déterminée dans les cellules cancéreuses du mélanome uvéal cultivées en monocouche ou enrobées dans le Matrigel®, dans l'optique future d'étudier ces marqueurs lors de l'irradiation du modèle bio-imprimé de tumeur uvéale avec une plaque personnalisée. L'évaluation chirurgicale de prototypes de plaques de curiethérapie non radioactives a été faite afin de comparer les différentes itérations entre elles et aux plaques conventionnelles. Enfin, les caractéristiques à améliorer pour le développement d'un modèle biologique contenant une tumeur uvéale ont été discutées et les aspects techniques problématiques des premières plaques imprimées ont été identifiés afin d'optimiser les prochains prototypes de plaques personnalisées. Mes travaux représentent un avancement des connaissances sur les modèles in vitro 3D du mélanome uvéal et le traitement de cette tumeur oculaire par curiethérapie par plaque. Mon mémoire pourra servir de base aux projets subséquents visant soit i) à élucider l'impact des interactions des cellules cancéreuses avec leur microenvironnement sur la résistance thérapeutique de ce cancer ou ii) à tester de nouvelles stratégies thérapeutiques sur un modèle bio-imprimé de mélanome uvéal primaire.Uveal melanoma is the most common primary intraocular tumor in adults. One of the treatments most often used to achieve local tumor control is called plaque brachytherapy. Despite a low local recurrence rate with this technique, most patients will develop ocular complications secondary to radiation five years after the initial diagnosis. The lack of ex vivo or in vitro models of uveal melanoma makes it difficult to validate personalized brachytherapy plates and to calculate the different dose profiles by Monte-Carlo algorithms. A bioprinted dosimetry phantom representing the human eye containing a defined uveal tumor would be an optimal in vitro model for the evaluation of different dose profiles in the development of personalized brachytherapy plates. In this study, the viability and proliferation of uveal melanoma cells, as well as choroidal fibroblasts and melanocytes in culture in a three-dimensional environment, either a commercial extracellular matrix (Matrigel®) or a printable hydrogel, were first measured by phase contrast or fluorescence microscopy. Then, the expression of markers of proliferation, hypoxia and DNA damage was determined in uveal melanoma cells cultured as monolayer or embedded in Matrigel®, in the future perspective of studying these markers after the irradiation of the bioprinted uveal tumor model using a personalized plate. The surgical evaluation of prototypes of non-radioactive brachytherapy plates was done in order to compare the different iterations with each other and with conventional plates. Finally, the characteristics to be improved for the development of a biological model containing an uveal tumor were discussed, and the problematic technical aspects of the printed plates were identified in order to optimize the next prototypes of personalized plates. My work represents an advancement of knowledge on in vitro 3D models of uveal melanoma and the treatment of this ocular tumor by plaque brachytherapy. My master's thesis could serve as a basis for subsequent projects aiming either i) to elucidate the impact of interactions of cancer cells with their microenvironment on the therapeutic resistance of this cancer or ii) to test new therapeutic strategies on a bioprinted model of primary uveal melanoma

Caractérisation des mécanismes de remodelage du microenvironnement hépatique par le mélanome uvéal

Le mélanome uvéal (MU) est la tumeur primaire intraoculaire la plus fréquente chez l’adulte. Divers traitements sont offerts afin d’obtenir un contrôle local de la tumeur. Malgré les interventions locales, 34% des patients développent des métastases fatales au foie moins de dix ans après le diagnostic initial. Les cellules stellaires hépatiques (CSH) sont des cellules quiescentes du foie, qui, une fois activées, se dédifférencient en myofibroblastes et produisent de la matrice extracellulaire (MEC). Les CSH sont des acteurs majeurs de la fibrose et ont été étudiées pour leur participation dans la pathogenèse des cancers primaires hépatiques et des cancers gastro-intestinaux métastatiques. Nous avons donc étudié les interactions entre les CSH et les cellules cancéreuses du mélanome uvéal (CCMU) en réalisant des cocultures en insert dans le but de mieux comprendre le phénomène de tropisme hépatique. Le profil d’expression des co-cultures CSH/CCMU a ensuite été comparé à celui des monocultures par profilage génique sur biopuces à ADN. Nous avons recensé de multiples gènes dont la transcription était dérégulée pour des acteurs de l’angiogenèse, de la MEC, de la prolifération et de la défense cellulaire. Nous nous sommes également intéressés à la sécrétion de 105 cytokines en réalisant des analyses protéomiques. Nous avons ensuite déterminé que la capacité de migration des CSH en présence de CCMU était plus efficace que celle des CSH en monoculture. Enfin, nous avons réalisé le premier modèle 3D de stroma du foie reconstruit avec des CSH grâce à la technique d’auto-assemblage du Centre LOEX. Nous avons observé une désorganisation matricielle importante lorsque les stromas ont été ensemencés avec des CCMU. Mes travaux représentent une avancée des connaissances sur le mélanome uvéal métastatique et son tropisme hépatique. Mon mémoire pourra guider d’autres projets visant à élucider les interactions entre les CCMU et les cellules du foie afin d’identifier une cible thérapeutique potentielle pour ralentir la croissance des métastases.Uveal melanoma (UM) is the most common primary intraocular tumor in adults. Different treatments are offered in order to control the tumor locally. Despite local interventions, 34% of patients develop fatal metastases to the liver less than ten years after the initial diagnosis. Hepatic stellate cells (HSC) are quiescent cells of the liver, which, once activated, dedifferenciate into myofibroblasts and produce an extracellular matrix (ECM). HSCs are major players in fibrosis and have been studied for their role in the pathogenesis of primary liver cancers and metastatic gastrointestinal cancers. We thus studied the interactions between HSCs and uveal melanoma cells (UMCs) by realizing their co-culture in insert in order to better understand the hepatic tropism phenomenon. The gene expression profile of HSC/UMC cocultures was then compared to that of monocultures using DNA microarrays. Several genes that participate in the ECM synthesis, proliferation and host defense were found to be deregulated between these conditions. We also focused on the secretion of 105 cytokines by performing cytokine arrays. We then determined that the migration capacity of HSCs in the presence of UMCs was more efficient than that of HSCs grown in monoculture. Moreover, we produced the first 3D model of liver stroma with HSCs using the self-assembly method of the Centre LOEX. We observed an important disorganization of the ECM when stromas were seeded with UMCs. My work represents an advanced of knowledge on metastatic UM and its liver tropism. My master’s thesis can guide other projects to elucidate interactions between UMCs and hepatic cells in order to identify a potential therapeutic target on which we may act upon to slow down the growth of metastases

Etude préliminaire de l'intérêt du marqueur de prolifération Ki-67 pour le pronostic des mélanomes oculaires des carnivores domestiques

Les mélanomes sont les tumeurs oculaires les plus fréquentes chez le chien et le chat. Ce travail présente, dans une première partie bibliographique, une synthèse des données sur ce sujet, en envisageant notamment les aspects de pathologie comparée et les éléments à valeur pronostique éventuelle. La seconde partie de ce travail est constituée d'une étude rétrospective sur 43 cas de mélanomes oculaires du chien et du chat après diagnostic histopathologique. Des corrélations sont étudiées entre différents éléments épidémiologiques, cliniques lorsqu'ils sont connus, et histopathologiques parmi les différentes catégories de mélanomes oculaires (mélanomes de l'uvée, mélanomes épiscléraux) chez le chien et le chat. L'index de prolifération Ki-67 est aussi réalisé et confronté aux données précédentes

Naevus d’OTA révélant un glaucome secondaire a angle ouvert

Le nævus d’ôta est un désordre pigmentaire rare, acquis ou congénital, correspond en anatomie pathologique à une forme particulière de nævus : le nævus bleu. Le glaucome chronique et la transformation en mélanome malin, sont les risques principaux de cette pathologie justifiant une surveillance régulière. OBSERVATION : Nous rapportons le cas d’une patiente de 60ans sans antécédents personnel ni familial, qui présente une lésion hyper pigmentée, bleuâtres de la joue droit (mélanocytose oculodermique) depuis l’âge de 30 ans. L’examen ophtalmologique objective une hypertonie oculaire homolatérale. Le tonus oculaire était de 28 mm hg. L’examen du segment antérieur trouvait ; une hyperpigmentation de l’iris avec la présence de mammillations, L’angle irido cornéen est ouverte et hyper pigmenté à la gonioscopie et le fond d’œil est strictement normale. L’examen de l’œil controlatéral est normal. L’étudie du complexe ganglionnaire maculaire (CCG) en OCT était altéré. Le diagnostic d’un glaucome secondaire a angle ouvert a était retenue. La patiente a bénéficié d’un traitement hypotonisant locale à base de prostaglandine. L’évolution a été marquée par une baisse de la pression intra oculaire de 35%. Sans signe de progression clinique ni fonctionnel ainsi que structurale.CONCLUSION : Le Nævus d’Ota est une pathologie rare le plus souvent bénigne, qui nécessite néanmoins une surveillance régulière du fond d’œil et du tonus oculaire, vu le risque accru de survenue du glaucome et du mélanome choroïdie