Herpes simplex : isolamento, caracterização citopatológica e sensibilidade aos antivirais

Abstract

O objetivo deste estudo foi isolar o vírus herpes simplex (HSV) de amostras clínicas provenientes de pacientes acometidos de lesões clinicamente diagnosticadas como herpes simplex e adaptá-las em cultura de células HEp-2, através de sucessivas passagens, com a observação do efeito citopático (ECP). As culturas de células infectadas foram estudadas quanto às características citopatológicas, incluindo o desenvolvimento de plaques. Avaliamos também a sensibilidade dos isolados (inibição viral) aos anti-herpesvirais comercialmente disponíveis, aciclovir (ACV), foscarnet (PFA), arabino citosina (Ara-C) e trifluridina (F3T), através do ensaio de plaque ou dose infectante em cultura de células. Vinte isolados foram obtidos a partir de vinte e duas amostras clínicas. As amostras desenvolveram ECP representado por arredondamento das células, aumento do volume celular e refringência, formação de grumos celulares, 24-48 h após a inoculação. Este efeito foi, inicialmente, detectado de forma focal no tapete celular e posteriormente, com o comprometimento de toda monocamada celular e desprendimento das células 72-96 h após a inoculação. A presença de sincícios foi observada 48 h após a inoculação e coloração com hematoxilina-eosina (HE). Das vinte amostras adaptadas, seis desenvolveram plaques. Os isolados S1-S4 produziram plaques predominantemente grandes com diâmetro médio de 1.0 mm e os isolados S5 e S6 produziram plaques predominantemente pequenos de 0.4 mm de diâmetro. Onze isolados S1-S11 foram testados frente aos antivirais ACV, PFA, Ara-C, F3T e foram considerados sensíveis. A porcentagem de inibição viral variou entre 61-100%. Portanto, no presente trabalho nós estudamos os isolados selvagens circulantes de HSV, bem como tentamos uma abordagem ao conceito de antivirograma, considerado um instrumento importante no tratamento e controle da infecção pelo HSV.This work presents the results of the isolation of herpes simplex virus (HSV) from clinical specimens whose patients were suffering mostly with oral lesions and secondly with genital lesions. The isolation and HSV adaptation was carried out in HEp-2 cell culture through successive passages monitored by the development of the cytophatic effect (CPE). Cultures infected with isolates were studied under cytopathological ground and plaque forming features. We also evaluated the sensitivity of the isolates (viral inhibition) to commercially available anti-HSV drugs, such as, acyclovir (ACV), foscarnet (PFA), arabinofuranosylcytosine (Ara-C) and trifluridine (F3T) based in the assay of antiviral activity, monitored by plaque assay and tissue culture infectious dose. From 22 clinical specimens we could isolate and adapt twenty strains. Overall, the CPE was mostly detected 24-48 h post-infection (p.i.), represented by focally rounding and increased refringence of the infected cells and later with the spread of the effect. Total destruction of the cell monolayer was observed at 72-96 h p.i. The presence of syncytia was remarkable 48 h p.i. observed after cell staining. Out of 20 isolates six developed plaques. The plaques of the isolates S1-S4 were predominantly large with diameter of 1.0 mm and isolate S5 and S6 produced mostly small plaques of 0.4 mm size. Eleven isolates S1-S11 were sensitive to ACV, PFA, Ara-C and F3T antiviral tested. The percentage of virus inhibition (%VI) ranged from 61-100%. Therefore, in this work we studied the circulating wild strains of HSV, as well as, tried an approach to the concept of antivirogram, as a useful tool for the treatment and the control of HSV infections