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Detecção dos genes de hemolisinas em isolados uropatogênicos de Proteus mirabilis e caracterização físico-quimica da hemolisina HpmA

By Silvia Emanoele Cestari

Abstract

Infecção do trato urinário (ITU) é uma das infecções bacterianas mais freqüentemente documentados em humanos. Proteus mirabilis está associado principalmente a ITU em indivíduos com anormalidade urinária ou relacionada com cateterismo vesical e que podem ser difíceis de tratar, devido à formação de cálculos na bexiga e rins. Estes cálculos são formados devido à presença de urease sintetizada pelas bactérias. Outro fator importante é que a hemolisina HpmA produzida por P. mirabilis é utilizada pelas bactérias para danificar os tecidos renais. Amostras de Proteus spp. também podem expressar hemolisina HlyA, semelhante à encontrada em Escherichia coli. Um total de 211 isolados uropatogênicos de P. mirabilis foram analisados para detectar a presença dos genes hpmA e hpmB pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e dot blot e o gene hlyA por PCR. Os genes hpmA e hpmB foram expressos pela técnica RT-PCR e dois isolados de P. mirabilis foram sequenciados para os genes hpmA e hpmB. A presença dos genes hpmA e hpmB foi confirmada por PCR em 205 (97,15%) dos 211 isolados. O dot blot confirmou a presença dos genes hpmA e hpmB nos isolados que não amplificaram na PCR. Nenhum dos isolados estudados apresentou o gene hlyA. Os genes hpmA e hpmB que foram sequenciados apresentaram 98% de identidade com os mesmos genes da amostra de P. mirabilis HI4320. Este estudo mostrou que a técnica de PCR apresenta boa sensibilidade para detectar os genes hpmA e hpmB de P. mirabilis.Urinary tract infection (UTI) is one of the bacterial infections frequently documented in humans. Proteus mirabilis is associated with UTI mainly in individuals with urinary tract abnormality or related with vesicular catheterism and it can be difficult to treat because of the formation of stones in the bladder and kidneys. These stones are formed due to the presence of urease synthesized by the bacteria. Another important factor is that P. mirabilis produces hemolysin HpmA, used by the bacteria to damage the kidney tissues. Proteus spp. samples can also express HlyA hemolysin, similar to that found in Escherichia coli. A total of 211 uropathogenic P. mirabilis isolates were analyzed to detect the presence of the hpmA and hpmB genes by the techniques of polymerase chain reaction (PCR) and dot blot and hlyA by PCR. The hpmA and hpmB genes were expressed by the RT-PCR technique and two P. mirabilis isolates were sequenced for the hpmA and hpmB genes. The presence of the hpmA and hpmB genes was confirmed by PCR in 205 (97.15%) of the 211 isolates. The dot blot confirmed the presence of the hpmA and hpmB genes in the isolates that did not amplify in the PCR. None of the isolates studied presented the hlyA gene. The hpmA and hpmB genes that were sequenced presented 98% identity with the same genes of the HI4320 P. mirabilis sample. This study showed that the PCR technique has good sensitivity for detecting the hpmA and hpmB genes of P. mirabilis

Topics: Proteus (Bactéria), Infecções urinárias, Hemólise e hemolisinas, Virulência (Microbiologia), Microbiologia, Urinary tract infections, Hemolysis and hemolysins, Virulence (Microbiology)
Publisher: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia.
Year: 2011
OAI identifier: oai:agregador.ibict.br.BDTD_UEL:oai:uel.br:vtls000188649
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