Adição dos antioxidantes Trolox e glutationa reduzida ao diluidor de criopreservação de sêmen de cães.

Abstract

Com o objetivo avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozóides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), através de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica (cor, aspecto, volume) e microscópica (motilidade progressiva, vigor, concentração, integridade do acrossoma e do DNA, e estresse oxidativo), e divisão do volume de sêmen em quatro alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais. Experimento 1: G1 = Tris-gema (Grupo Controle); G2 = Tris-gema + 200uM de Trolox e G3 = Tris-gema + 300 uM de Trolox; Experimento 2: G1 = Tris-gema (Grupo Controle); G2 = Tris-gema + 2 uM de GSH e G3 = Tris-gema + 5 uM de GSH; Experimento 3: G1) Tris-Gema (Grupo Controle); G2) Tris-Gema + 200 uM de Trolox; G3) Tris-Gema + 2 uM de GSH; G4) Tris-Gema + 200 uM Trolox + 2 uM de GSH. As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação (TK 3000) e armazenadas em nitrogênio líquido (196 oC). Após descongelação a 37 oC (0 min) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de MP, vigor e porcentual de espermatozóides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. II, os grupos experimentais (G2 e G3) apresentaram maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Conclui-se que o tempo de incubação interfere na viabilidade in vitro das células espermáticas, independente da adição de antioxidantes Trolox e/ou GSH; recomenda-se a adição do antioxidante GSH, nas concentrações de 2 uM e 5 uM, ao diluente utilizado para criopreservação do sêmen de cães.In order to evaluate the effect of adding antioxidants Trolox and Glutathione reduced on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of the breeds French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), through digital manipulation. Then proceeded to the evaluation macroscopic (color, appearance, volume) and microscopic (progressive motility, vigor, DNA, acrosome integrity and oxidative stress), followed by dividing the volume of semen on four aliquots, according to the experiments and experimental groups: Experimental 1 - G1 = Tris- Egg yolk (control group); G2 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox and G3 = Tris- Egg yolk + 300 uM of Trolox; Experimental 2 - G1 = Tris- Egg yolk (Control group); G2 = Tris- Egg yolk + 2 uM of GSH and G3 = Tris-Egg yolk + 5 uM of GSH; Experimental 3 - G1 = Tris- Egg yolk (control group); G2 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox; G3 = Tris- Egg yolk + 2 uM of GSH and G4 = Tris- Egg yolk + 200 uM of Trolox + 2 uM of GSH. The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine (TK3000) and stored in liquid nitrogen (-196 oC). After thawing a 37 oC and incubation during 60 minutes, it was detected that MP, vigor and sperm with intact acrosomes had significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In the Exp. 2, G2 and G3 groups had higher (P<0,05) percentage of sperm with oxidative stress. So, it can be concluded that the incubation time interfere on the in vitro viability of the sperm cells, independently of Trolox and GSH addition; and GSH, on the concentration of 2 and 5 uM, should be added to diluent of dog semen cryopreservation