Skip to main content
Article thumbnail
Location of Repository

Methanol extract of Sapindus saponaria can induce the necrosis of None-small-cell lung carcinoma A549 cell through the activation of PARP pathway

By 陳彥名 and Yan-Ming Chen

Abstract

惡性腫瘤是目前人類十大死亡主因中的第一位,而肺癌又是惡性腫瘤中排名第一的癌症。隨著中草藥現代化的崛起,越來越多的中草藥萃取物也被拿來研究對抗癌症。無患子(Sapindus saponaria)為國人廣為所知的落葉喬木,原產地為熱帶或副熱帶區域,如中國大陸長江流域以南地區、印度、日本、越南、寮國與台灣等,其種子常做為清潔劑使用。在細胞活性測試中,發現無患子的甲醇萃取物具有毒殺癌細胞的功能,而在針對不同種類的癌細胞毒殺測試中觀察到A549非小細胞肺癌細胞對其反應最為顯著。加入無患子甲醇萃取物後可明顯發現A549細胞的生長週期被迫停滯於G1期,而近一步的利用了雙染實驗測試後觀察到細胞在經過無患子甲醇萃取物處理後發生細胞壞死的現象。 為確認及研究其細胞壞死的訊號傳遞途徑,利用西方墨點法觀察細胞週期變化及細胞凋亡路線。於西方墨點測試中,細胞凋亡路徑的下游蛋白質caspase-3並無切剪的片段出現;而同樣影響細胞凋亡及細胞壞死的調控蛋白PARP則是有出現切剪的片段。更進一步測試細胞壞死相關路徑,於ROS測試中,經藥物處理過的細胞於各時間點其ROS濃度均無明顯差異。因此推論無患子甲醇萃取物會誘導A549非小細胞肺癌細胞,並非經由ROS途徑,而是經由PARP路徑導致細胞壞死。Tumor (cancers) is one of the ten leading causes of death, and lung cancer is the main causes of cancer death worldwide. With the raising of modern herb medicine, more and more herbs are tested against cancers. Sapindus saponaria, native to warm temperate to tropical regions like the southern region of Yangtze river in China, India, Japan, Vietnam, Laos and Taiwan, is a well-known deciduous tree. The drupes can be used as a natural surfactant for cleaning. In MTT assay we found that the methanol extract of S. saponaria has effect to inhibit the growth of A549 NSCLC cell lines. The methanol extract of S. saponaria owns the ability to arrest A549 cancer cell growth at G1 phase in cell cycle test. We also found that methanol extract of S. saponaria extract treated A549 cancer cell shows necrosis signals in double staining test. To justify the responsible signal pathway of necrosis in A549 cancer cell treatment with methanol extract of S. saponaria, we performed the Western Blotting test. The downstream protein caspase-3 was shown no cleaved fragments in treated A549 cell. However, PARP, the key protein in apoptosis and necrosis, has been cleaved into fragments. In addition, there has no noticeable difference among treatment time intervals in ROS test. Therefore, the methanol extract of S. saponaria may induce the necrosis of A549 cell not via ROS pathway but via the PARP activation.致謝 i 中文摘要 ii 英文摘要 iii 圖表目錄 vi 第一章 前言 1 一、 惡性腫瘤 1 (一) 肺癌 3 (二) 肺癌分類 3 1. 非小細胞肺癌 3 2. 小細胞肺癌 4 (三) 主要病因 4 (四) 診斷、治療及預防 5 二、 細胞週期 8 三、 細胞凋亡與細胞壞死 10 (一) 細胞凋亡 10 1. 外路徑 (Extrinsic pathway) 10 2. 內路徑 (Intrinsic pathway) 11 (二) 細胞壞死 13 1. 能量缺乏 16 2. 蛋白酶 16 3. 活性氧化物 17 四、 無患子 19 五、 實驗動機 21 第二章 實驗材料與方法 22 一、 實驗材料 22 (一) 實驗萃取素材 22 (二) 實驗藥品與抗體 22 (三) 實驗用溶液配方 24 二、 實驗方法 27 (一) 無患子萃取 (S. saponaria extract) 27 (二) 細胞培養 (Cell Culture) 27 (三) 細胞存活率分析 (MTT assay) 28 (四) 細胞週期測試 (Cell Cycle Determination) 28 (五) 細胞凋亡測試 (Apoptosis Determination) 29 (六) 西方墨點雜交法 (Western Blot) 29 (七) 活性氧自由基測試 (Reactive Oxygen Species, OXY) 31 第三章 結果 32 一、 測試無患子萃取物對多種癌細胞的毒殺能力 32 二、 以單染試驗觀察A549細胞所被誘導的細胞週期停滯現象 36 三、 以雙染試驗觀察A549細胞所被誘導的細胞死亡現象 38 四、 以西方墨點法觀察A549細胞週期變化 40 五、 以西方墨點法觀察A549細胞死亡方式 41 六、 探討無患子甲醇萃取物誘導A549細胞壞死的傳遞路徑 I 42 七、 探討無患子甲醇萃取物誘導A549細胞壞死的傳遞路徑 II 43 第四章 討論與結論 45 第五章 參考文獻 4

Topics: 無患子, Sapindus saponaria
Publisher: 生命科學院碩士在職專班
Year: 2014
OAI identifier: oai:ir.lib.nchu.edu.tw:11455/81155
Download PDF:
Sorry, we are unable to provide the full text but you may find it at the following location(s):
  • http://www.airitilibrary.com/P... (external link)
  • http://hdl.handle.net/11455/81... (external link)
  • Suggested articles


    To submit an update or takedown request for this paper, please submit an Update/Correction/Removal Request.