Plant Regeneration from Mesophyll Protoplasts of Solanum toxicarium

Abstract

Culture conditions were studied for plant regeneration from mesophyll protoplasts of Solanum toxicarium. Axenic seedlings of S. taxicarium were used as material for protoplast culture. Many viable protoplasts were isolated by incubating leaf slices in an enzyme solution containing 0.25% Meicerase and 0.05% Macerozyme for 16 hours at 25℃ without shaking. Protoplast density of 5.0×10^4·ml^<-1> in 1/2 MS media containing 0.1mg·liter^<-1> NAA and 0.1mg·liter^<-1> kinetin was suitable for colony formation. Most colonies were formed when protoplasts were cultured at 25℃ for 2 weekes after initial culture at 30℃ for 3 weeks. On the MS agar medium with 5mg·liter^<-1> zeatin, 34.9% of protoplast-derived calli differentiated shoots. These shoots rooted on 1/3 MS medium with 5g·liter^<-1> sucrose and 0.7% agar, and developed into whole plants.Solanum toxicariumの葉肉プロトプラストの培養条件について検討した. 葉肉プロトプラストの材料として無菌的に育成した実生苗を用いた. 苗の本葉を裁断し, 0.25%のメイセラーゼおよび0.05%のマセロザイムを含む酵素液を用い, 25\u27C, 16時間静置処理することにより, 活性の高いプロトプラストが多数得られた. 初代培地として0.1mg·liter^<-1> NAAおよび0.1mg·liter^<-1>カイネチンを含む1/2MS培地を用い, 5.0×10^4·ml^<-1>の密度で培養することにより, 多くのコロニーが得られた. 培養開始から3週目までを30℃, その後2週間を25\u27Cで培養することにより, 健全なコロニーが多数得られた. プロトプラスト由来カルスからの茎葉の再分化にはゼアチンが効果的であり, ゼアチンを5mg·liter^<-1>としたMS培地で移植後4週目に34.9%のシュート形成率が得られた. ショ糖5g·liter^<-1>, 塩類濃度1/3のMS培地に移植することにより, ほとんどのシュートが発根した.以上の実験により, S. toxicariumの葉肉プロトプラストからの植物体を再生させる培養系を確立することができた

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